急性淋巴細(xì)胞白血病患兒細(xì)胞因子水平與疾病狀態(tài)的關(guān)系研究*

宋曉梅，李 化，舒莉萍△

1.貴州醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞工程生物醫(yī)藥技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室/貴州省再生醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/貴州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室,貴州貴陽(yáng) 550004;2.貴州省貴陽(yáng)市婦幼保健院檢驗(yàn)科，貴州貴陽(yáng) 550004；3.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院成體干細(xì)胞轉(zhuǎn)化研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550004

白血病是一種造血干細(xì)胞異常增生性腫瘤，急性白血病可分為急性淋巴細(xì)胞白血病和急性非淋巴細(xì)胞白血病兩大類，其中急性淋巴細(xì)胞白血病較易治療。根據(jù)病情輕重,人們將急性淋巴細(xì)胞白血病分為低危、中危和高危3種。骨髓移植是通過(guò)移植正常的造血干細(xì)胞到患兒體內(nèi)來(lái)治療白血病的一種可行的方法[1-2]，其最為關(guān)鍵的步驟是找到與患兒匹配的造血干細(xì)胞。兒童急性淋巴細(xì)胞白血病具有較高的病死率，盡管臨床醫(yī)師在白血病患者體內(nèi)細(xì)胞因子變化方面已有諸多研究，但大部分是以成人為主，部分研究覆蓋兒童群體，但病例選擇年齡偏大。近年來(lái)，兒童急性白血病發(fā)病率呈逐年增高的趨勢(shì)，患兒表現(xiàn)為不同程度貧血、出血及關(guān)節(jié)浸潤(rùn)等，病情進(jìn)展速度快、復(fù)發(fā)率高[3-4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞免疫功能在急性淋巴細(xì)胞白血病發(fā)病機(jī)制中有著重要的作用[4]，為探討急性淋巴細(xì)胞白血病患兒細(xì)胞因子水平與疾病狀態(tài)的關(guān)系，本研究收集急性淋巴細(xì)胞白血病患兒212例進(jìn)行相關(guān)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年1月至2019年12月貴陽(yáng)市婦幼保健院收治的212例急性淋巴細(xì)胞白血病患兒納入急性淋巴細(xì)胞白血病組，根據(jù)患兒不同的疾病狀態(tài)將其分為初診組(128例)、緩解組(84例)，并將同期在該院進(jìn)行常規(guī)體檢的200例健康兒童納入對(duì)照組，同期收治的50例急性髓細(xì)胞白血病患兒納入急性髓細(xì)胞白血病組。初診組：男76例，女52例；年齡1～13歲，平均(7.38±1.25)歲；其中116例為B型，12例為T型。緩解組：男52例，女32例；年齡1～14歲，平均(7.35±1.22)歲；其中76例為B型，8例為T型。對(duì)照組：男120例，女80例；年齡1～14歲，平均(7.34±1.26)歲。急性髓細(xì)胞白血病組：男29例，女21例；年齡1～12歲，平均(7.21±1.35)歲；其中M0型12例，M1型10例，M2型17例，M3型5例，其他類型6例。4組研究對(duì)象年齡、性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象家屬對(duì)研究目的、注意事項(xiàng)表示了解，均簽署知情同意書(shū)。

1.2患兒納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)兒童急性淋巴細(xì)胞白血病診斷參照中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)血液腫瘤專業(yè)委員會(huì)發(fā)布的《淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤/華氏巨球蛋白血癥診斷與治療中國(guó)專家共識(shí)(2016年版)》[3]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，急性髓細(xì)胞白血病診斷參照《急性髓系白血病(復(fù)發(fā)難治性)中國(guó)診療指南(2011年版)》[4]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。(2)患兒臨床資料及病史、檢查記錄等資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并肝、腎疾病患兒；(2)神志不清或精神障礙患兒；(3)經(jīng)過(guò)病原學(xué)檢測(cè)及臨床檢查診斷為合并感染患兒；(4)合并其他類型血液系統(tǒng)疾病患兒；(5)存在語(yǔ)言交流溝通障礙、聽(tīng)力障礙以及無(wú)法配合研究者；(6)預(yù)計(jì)生存期≤3個(gè)月患兒。

1.3方法 于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集各組研究對(duì)象靜脈血3 mL，室溫環(huán)境下靜置直至血細(xì)胞凝固，3 000 r/min離心5～10 min，將血清分離后，于-80 ℃冰箱中保存待測(cè)。采用ELISA雙抗體夾心法對(duì)研究對(duì)象白細(xì)胞介素(IL)-2、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)-α等細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)。靜脈采血2 mL，采用Sysmex XS-500i全自動(dòng)五分類血液分析儀測(cè)定各項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)。

1.4觀察指標(biāo)[5](1)對(duì)比急性淋巴細(xì)胞白血病組、急性髓細(xì)胞白血病組及對(duì)照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)水平。(2)比較初診組、緩解組及對(duì)照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。(3)隨訪6個(gè)月，根據(jù)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒是否復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組。比較兩組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平。實(shí)驗(yàn)室參考值范圍如下：IL-2 0～7.5 pg/mL，IL-10 0～12.9 pg/mL，TNF-α 0～16.5 pg/mL，WBC (4～12)×109/L。

1.5急性淋巴細(xì)胞白血病危險(xiǎn)程度分型 WBC>10×109/L，屬于高危。WBC<10×109/L，血小板計(jì)數(shù)>40×109/L，屬于低危。WBC<10×109/L，血小板計(jì)數(shù)<40×109/L，屬于中危[6]。

2 結(jié) 果

2.1各組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較 急性淋巴細(xì)胞白血病組TNF-α、IL-10、WBC水平高于急性髓細(xì)胞白血病組與對(duì)照組，IL-2水平低于急性髓細(xì)胞白血病組與對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較

2.2初診組、緩解組、對(duì)照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較 初診組IL-2水平低于緩解組及對(duì)照組，TNF-α、IL-10、WBC水平高于緩解組及對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 初診組、緩解組、對(duì)照組血清IL-2、IL-10、TNF-α及WBC水平比較

2.3血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒臨床特征的關(guān)系 初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與患兒年齡、性別以及肝大無(wú)關(guān)(P>0.05)，與患兒疾病危險(xiǎn)程度分型有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒臨床特征的關(guān)系

續(xù)表3 血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒臨床特征的關(guān)系

2.4復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比較 急性淋巴細(xì)胞白血病患兒復(fù)發(fā)72例，未復(fù)發(fā)140例。與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組血清IL-2水平降低，IL-10、WBC以及TNF-α水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表4 復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平比較

3 討 論

兒童腫瘤的發(fā)病率為12.2/10萬(wàn)～17.3/10萬(wàn)，而白血病的發(fā)病率在兒童惡性腫瘤中位列第1，約占全部?jī)和瘣盒阅[瘤的1/3。在兒童血液系統(tǒng)腫瘤中，白血病是最為常見(jiàn)且最為嚴(yán)重的一種[7-9]。兒童白血病治療首選化療方案，針對(duì)部分復(fù)發(fā)、難治、高危的患兒則需要進(jìn)行骨髓移植。目前，規(guī)范化的白血病診治方案在全國(guó)各兒童白血病定點(diǎn)醫(yī)院已經(jīng)推廣實(shí)施多年，經(jīng)過(guò)規(guī)范化的診治，80%以上的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒可以治愈。以往研究發(fā)現(xiàn)：輔助性T淋巴細(xì)胞1(Th1細(xì)胞)主要分泌的細(xì)胞因子包括IL-2、干擾素(IFN)-γ等，Th1細(xì)胞在細(xì)胞免疫中具有較高的效能；輔助性T淋巴細(xì)胞2(Th2細(xì)胞)主要分泌的細(xì)胞因子包括IL-10、IL-4等，Th2細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中具有負(fù)調(diào)控作用。一旦Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞在人體免疫應(yīng)答中動(dòng)態(tài)平衡被打破，將會(huì)導(dǎo)致免疫功能紊亂，誘發(fā)一系列疾病[10-13]。

白血病是對(duì)人體危害較大的一種疾病，該病在發(fā)展過(guò)程中會(huì)因?yàn)榭寺⌒园籽〖?xì)胞增殖失控、分化障礙、凋亡受阻等機(jī)制而導(dǎo)致白血病細(xì)胞在骨髓或者其他造血組織中大量增殖，累積浸潤(rùn)其他非造血組織與器官，影響正常造血功能，引發(fā)一系列相關(guān)癥狀。白血病進(jìn)展時(shí)患者會(huì)有感染現(xiàn)象，多以細(xì)菌入侵為主，而感染發(fā)生時(shí)身體會(huì)出現(xiàn)一系列不良反應(yīng)。作為細(xì)胞免疫主要調(diào)節(jié)因子，IL-2來(lái)源于活化的Th1細(xì)胞，其他免疫細(xì)胞如B淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞盡管也能分泌IL-2，但分泌量較少[14-15]。以往學(xué)者在研究中對(duì)IL-2免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了如下總結(jié)：(1)IL-2對(duì)B、T淋巴細(xì)胞增殖、分化具有促進(jìn)作用，且能夠促使B淋巴細(xì)胞分泌抗體；(2)IL-2一方面可加強(qiáng)淋巴細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)，另一方面能夠?qū)?xì)胞殺傷靶細(xì)胞起到誘導(dǎo)作用；(3)IL-2刺激CD8+細(xì)胞產(chǎn)生，加快TNF、IFN等細(xì)胞因子的分泌，強(qiáng)化抗白血病作用機(jī)制；(4)在對(duì)自然殺傷(NK)細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)作用的同時(shí)，促使活化的NK細(xì)胞殺傷力的提升；(5)對(duì)巨噬細(xì)胞具有激活作用，能夠促進(jìn)吞噬及抗原呈遞功能的提升，參與抗腫瘤過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，初診組、緩解組IL-2水平明顯降低，考慮是由于白血病細(xì)胞分泌可溶性白細(xì)胞介素-2受體(sIL-2R)，與IL-2R競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合IL-2，導(dǎo)致IL-2水平減少，另外Th1細(xì)胞數(shù)量減少，其分泌IL-2能力也會(huì)下降，進(jìn)而導(dǎo)致IL-2水平降低。作為一種負(fù)向調(diào)控的細(xì)胞因子，IL-10能夠起到免疫抑制的作用。IL-10能夠?qū)乖阎旅舻腃D4+Th細(xì)胞(Th0型細(xì)胞)向Th1細(xì)胞的增殖、分化起到抑制作用，使其向Th2細(xì)胞方向增殖、分化，弱化Th1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力，抑制機(jī)體免疫功能，在腫瘤性疾病形成中具有參與作用。其次，IL-10能夠?qū)ρ仔苑磻?yīng)起到抑制作用，引起自身免疫性疾病的發(fā)生，在IL-10作用下，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)免疫無(wú)應(yīng)答，更容易發(fā)生免疫功能缺陷。當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)惡性病變，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)顯著增多，進(jìn)而增加IL-10的分泌，血清IL-10水平呈現(xiàn)出升高趨勢(shì)。本研究中，與對(duì)照組相比，初診組及緩解組患兒IL-10水平均升高，IL-10對(duì)機(jī)體免疫功能產(chǎn)生抑制作用，降低了免疫監(jiān)控能力，使得白血病細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，導(dǎo)致了白血病的發(fā)生。TNF-α主要來(lái)源于巨噬細(xì)胞及活化的單核細(xì)胞，具有多種生物活性，抗腫瘤能力強(qiáng)，在多種機(jī)體病理反應(yīng)中有著一定的參與作用。與此同時(shí)，該指標(biāo)還能夠促使細(xì)胞凋亡[16]。本研究中TNF-α在急性淋巴細(xì)胞白血病患兒中有所升高，且初診組TNF-α水平高于緩解組及對(duì)照組(P<0.05)。單純性的WBC升高是不能確診為白血病的，但是白血病患者在進(jìn)行血常規(guī)檢查時(shí)，往往出現(xiàn)WBC過(guò)高的情況，WBC過(guò)高是白血病的一種表現(xiàn)。本研究中初診急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清IL-2、IL-10、TNF-α、WBC水平與患兒年齡、性別及肝大等無(wú)關(guān)，與患兒疾病危險(xiǎn)程度分型密切相關(guān)，說(shuō)明上述指標(biāo)能夠反映患兒疾病狀態(tài)，可用于患兒病情及預(yù)后的評(píng)估。對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒進(jìn)行為期6個(gè)月隨訪，與未復(fù)發(fā)組相比，復(fù)發(fā)組血清IL-2水平降低，IL-10、WBC及TNF-α水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示急性淋巴細(xì)胞白血病患兒疾病復(fù)發(fā)后仍伴隨炎癥因子水平的升高，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒給予細(xì)胞因子水平監(jiān)測(cè)，能夠掌握患兒腫瘤生長(zhǎng)情況及復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，以便予以有效的干預(yù)措施。但由于樣本量少，本研究可能存在一定偏倚，在后續(xù)研究中應(yīng)加大樣本量，增加隨訪指標(biāo)，從更多方面探討急性淋巴細(xì)胞白血病患兒細(xì)胞因子表達(dá)變化情況，為臨床提供更可靠的依據(jù)。

綜上所述，血清IL-2、TNF-α、IL-10、WBC水平能反映出急性淋巴細(xì)胞白血病患兒疾病狀態(tài)，其水平變化能夠?qū)純好庖吖δ芷鸬筋A(yù)測(cè)作用，在急性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后及治療進(jìn)展評(píng)估中有著重要的意義。