成纖維活化蛋白在眼瞼基底細(xì)胞癌相關(guān)成纖維細(xì)胞中的表達(dá)研究

周金蕙,王 寧,母強(qiáng)元,劉 朱，王大慶

0引言

基底細(xì)胞癌(basal cell carcinoma, BCC)是人類最常見的惡性腫瘤之一[1]，也是眼瞼部位最常見的惡性上皮源性腫瘤，約占眼瞼惡性腫瘤的90%，多見于60～80歲老年人，好發(fā)于下瞼(50%)[2-6]。眼瞼BCC易出現(xiàn)倒睫、瞼內(nèi)翻等并發(fā)癥，因而屬于高危型BCC。大量研究證實(shí)，紫外線、放射線及遺傳因素等均是導(dǎo)致眼瞼BCC發(fā)生的危險(xiǎn)因素[7-8]。原癌基因異常激活或抑癌基因失活，多種相關(guān)蛋白、細(xì)胞因子等發(fā)生改變，均可導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖、分化, 凋亡受阻, 最終引發(fā)腫瘤[9]，但其確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚。

正常情況下，細(xì)胞外基質(zhì)是抗腫瘤形成的屏障。但當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，其周圍鄰近的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化以支持癌癥的發(fā)展[10-11]，從而被稱之為腫瘤微環(huán)境(tumor microenvironment, TME)[12]。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與其微環(huán)境改變的相關(guān)性在眾多研究中得到了驗(yàn)證[12-14]，其中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(carcinoma-associated fibroblasts, CAFs)是存在于腫瘤微環(huán)境中最豐富的細(xì)胞類型之一，其主要功能是提供并維持良好的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的微環(huán)境，從而在腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成過程中起關(guān)鍵作用[10,13-15]。

成纖維活化蛋白(fibroblast activation protein，F(xiàn)AP)是CAFs 最具代表性的分泌產(chǎn)物之一，在90%以上的上皮細(xì)胞癌CAFs和部分腫瘤細(xì)胞中高水平表達(dá)，而在人類正常組織中幾乎不表達(dá)，已有研究表明FAP的高表達(dá)與大部分腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移具有一定的相關(guān)性[12,16]。眼瞼BCC發(fā)病率高，具有侵襲性生長(zhǎng)的特點(diǎn)，但其惡性程度和轉(zhuǎn)移性較低[17]，其微環(huán)境中CAFs表達(dá)FAP的情況以及FAP在其侵襲性生長(zhǎng)中的作用尚不明確。因此，為了回答上述問題，本研究經(jīng)原代細(xì)胞培養(yǎng)獲得眼瞼基底細(xì)胞癌CAFs及正常成纖維細(xì)胞(normal fibroblasts，NFs)，然后檢測(cè)FAP在兩種細(xì)胞中的表達(dá)情況，以期進(jìn)一步探討FAP在人眼瞼基底細(xì)胞癌CAFs中的作用，探索影響眼瞼BCC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵因素，為BCC的預(yù)防、早期診斷及治療提供理論依據(jù)及新思路。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本來源選取川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院眼科2016-10/2017-05期間收治的擬行眼瞼基底細(xì)胞癌切除術(shù)和老年性眼瞼皮膚松弛癥矯正術(shù)共6例6眼患者的組織標(biāo)本作為研究對(duì)象。其中3例3眼眼瞼BCC患者(圖1A)為CAFs標(biāo)本來源；3例3眼老年性眼瞼皮膚松弛癥患者(圖1B)為NFs標(biāo)本來源，組織標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)。6例患者均無(wú)創(chuàng)傷及其他部位腫瘤等疾患，年齡為47～80歲，男女比例為1∶2，符合標(biāo)本來源均衡性(P<0.05)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過，組織標(biāo)本的收取均獲得患者的知情同意并簽署知情同意書。

圖1 標(biāo)本來源 A：CAFs標(biāo)本來源；B：NFs標(biāo)本來源。

1.1.2主要實(shí)驗(yàn)材料主要試劑：高糖DMEM培養(yǎng)基(H-DMEM)、0.25%胰蛋白酶(美國(guó)Hyclone公司)， 胎牛血清(FBS，美國(guó)Gibco公司)，RNA提取試劑(TRIzol)(北京Leagene生物有限公司),逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RT-PCR試劑盒(Thermo)，兔抗人波形蛋白(vimentin，VIM)單克隆抗體、鼠抗人細(xì)胞角蛋白(cytokeratin，CK)(廣譜)單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，鼠抗人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)單克隆抗體、兔抗人成纖維細(xì)胞活化蛋白(fibroblast activation protein，F(xiàn)AP)多克隆抗體(英國(guó)Abcam公司)，鼠抗人β-actin抗體、山羊抗兔/小鼠IgG/HRP聚合物(杭州華安生物科技公司)。主要儀器設(shè)備：生物安全柜(BSC-1000 II A2，蘇凈安泰公司，中國(guó))、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(CCL-170B-8，ESCO，印尼)、倒置相差顯微鏡(DM1L，Leica，德國(guó))、實(shí)時(shí)定量PCR儀(11491，Roche，瑞士)、酶標(biāo)儀(iMark，BIO-RAD，日本)、電泳儀(PowerPacTMHC，BIO-RAD，新加坡)、電轉(zhuǎn)儀(Trans-Blot SD Cell，BIO-RAD，美國(guó))、Fusion曝光儀(Vilber Fusion solo4，Vilber，法國(guó))。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本的收集和處理從川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院眼科手術(shù)室在無(wú)菌條件下完整切取新鮮基底細(xì)胞癌組織和正常眼瞼皮膚組織，盡可能不破壞組織完整性，將其放置于預(yù)先加入少許合成培養(yǎng)基的無(wú)菌1.5mL離心管中，用含冰袋的保溫箱低溫迅速轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室超凈工作臺(tái)。所有標(biāo)本取材均由同一位有經(jīng)驗(yàn)的術(shù)者操作。

1.2.2CAFs及NFs細(xì)胞原代培養(yǎng)及細(xì)胞處理用含0.1%雙抗的PBS溶液反復(fù)清洗標(biāo)本3次，置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中剪去除多余上皮和脂肪組織，將剩余的組織分成大小約1mm3的小塊后播種于含4mL合成培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，平放在含5% CO2的37℃ 恒溫細(xì)胞孵育箱中培養(yǎng)原代細(xì)胞。早期每天用倒置相差顯微鏡觀察培養(yǎng)情況，每2～3d換液。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿瓶底時(shí)，采用胰酶差速消化法進(jìn)行細(xì)胞傳代和純化，使用第3～6代純化細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1.2.3觀察細(xì)胞并鑒定細(xì)胞倒置相差顯微鏡下，觀察第3代純化的眼瞼CAFs和NFs細(xì)胞形態(tài)，拍攝圖片。細(xì)胞免疫化學(xué)染色(SP法)鑒定兩種細(xì)胞，步驟如下：爬片：將5.0×103個(gè)CAFs和NFs接種于酸預(yù)處理置于6孔板中的無(wú)菌載玻片上；固定：載玻片浸入4%多聚甲醛中室溫固定30min；破膜：0.5% Triton X-100溶液處理15min；滅活：3% H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶室溫處理30min；封閉：正常山羊血清封閉液室溫孵育30min；一抗孵育：滴加用PBS液稀釋的一抗(稀釋比例均為1∶100)，濕盒，4℃過夜孵育；二抗孵育：滴加山羊抗兔/小鼠 IgG/HRP 聚合物(稀釋比例均為1∶100)，37℃避光孵育30min；顯色：滴加DAB顯色液(按DAB試劑盒說明臨時(shí)配制使用，原液與稀釋液比例為1∶50)，3～5min，自來水洗滌終止；復(fù)染：蘇木素染核；脫水、透明、封片，顯微鏡觀察并拍照記錄結(jié)果。

1.2.4細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活力測(cè)定將眼瞼CAFs和NFs分別接種于96孔板中(4.0×103個(gè)/孔)，每例細(xì)胞設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，置于37℃含5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。每隔24h，取出一塊96 孔板，向每孔加入20μL 0.5% MTT溶液，作用4h后吸除含MTT溶液的上清液，加入150μL DMSO后置于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上，避光震蕩10min使紫色結(jié)晶物充分溶解，選擇490nm波長(zhǎng)，檢測(cè)其吸光光度值(OD值)；按以上步驟連續(xù)進(jìn)行7d，記錄數(shù)據(jù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，繪制生長(zhǎng)曲線。

1.2.5實(shí)時(shí)定量聚合酶反應(yīng)用TRIzol處理細(xì)胞提取總RNA后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。RT-qPCR循環(huán)條件為：初始變性(95℃下10min)、40次變性(95℃下15s)、退火(60℃下60s)、延伸(60℃下60s)。引物序列如下：FAP mRNA引物序列：上游引物：5’-TAG AAC CAT GCT TTG GAG ATA CT- 3’；下游引物：5’-CAA CAG GCG ACC AGC ATA AA- 3’。β-actin引物序列：上游引物：5’-ACA GAG CCT CGC CTT TGC C- 3’；下游引物：5’-GAT ATC ATC ATC CAT GGT GAG CTG G- 3’。以β-actin作為內(nèi)參對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行定量分析。使用公式2-△△Ct獲得實(shí)驗(yàn)組樣本基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.6蛋白免疫印跡分析用RIPA裂解緩沖液提取蛋白，使用BCA蛋白分析試劑盒測(cè)定總蛋白含量。用10% SDS-PAGE分離等量蛋白質(zhì)，然后將蛋白帶轉(zhuǎn)移到膜上。在4℃條件下，與一抗抗體(稀釋比例：FAP 1∶3000，β-actin 1∶1000)輕輕搖勻共同孵育一夜。添加二抗抗體(稀釋比例：羊抗兔二抗 1∶10000，羊抗鼠二抗 1∶2000)，在室溫下孵育1h。采用Fusion FX5程序曝光顯影對(duì)其免疫反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)和分析，引入β-actin作為內(nèi)參對(duì)照。應(yīng)用Image J軟件對(duì)所獲得的條帶灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果

2.1眼瞼CAFs和NFs的細(xì)胞培養(yǎng)和分離及純化結(jié)果在原代培養(yǎng)第3d可見上皮細(xì)胞和CAFs從癌組織塊邊緣爬出，癌上皮細(xì)胞呈團(tuán)狀生長(zhǎng)，CAFs排列緊密，呈放射狀生長(zhǎng)，約7d鋪滿瓶底；NFs組細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，原代培養(yǎng)第5～7d組織塊邊緣可見少量的上皮細(xì)胞和NFs,NFs形態(tài)規(guī)則，排列稀疏，約11～13d鋪滿瓶底。待細(xì)胞鋪滿瓶底經(jīng)胰酶差速消化法傳代與純化后，CAFs和NFs在形態(tài)上均未發(fā)生明顯改變，上皮細(xì)胞消失，原代CAFs生長(zhǎng)速度明顯快于NFs。

2.2眼瞼CAFs及NFs的初步鑒定結(jié)果

2.2.1細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果倒置顯微鏡下可見，眼瞼CAFs體積較大，呈長(zhǎng)梭形或紡錘形，胞質(zhì)突明顯減少，而胞漿內(nèi)具有較多顆粒，細(xì)胞大小差異明顯，生長(zhǎng)較快，排列紊亂且密集，喪失接觸抑制和密度抑制，存在明顯的重疊生長(zhǎng)現(xiàn)象(圖2A)；NFs呈扁平長(zhǎng)梭形，胞漿內(nèi)顆粒較少，細(xì)胞大小相對(duì)均一，分散排列，存在接觸抑制和密度抑制現(xiàn)象(圖2B)。

圖2 細(xì)胞培養(yǎng) A：CAFs從組織塊邊緣呈放射狀爬出，細(xì)胞較緊密，出現(xiàn)重疊現(xiàn)象；B：NFs從組織塊邊緣散在爬出，細(xì)胞較松散，未見緊密接觸。

2.2.2免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果FAP、VIM、α-SMA、CK在細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá)主要表現(xiàn)為胞質(zhì)中出現(xiàn)淡棕色或棕黃色顆粒。免疫化學(xué)染色結(jié)果示：CAFs組： FAP、VIM、α-SMA呈陽(yáng)性，CK呈陰性(圖3A～D)；NFs組：除了陽(yáng)性表達(dá)VIM外，其余均為陰性表達(dá)(圖3E～H)。

圖3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色 CAFs：A：CK呈陰性表達(dá), B：VIM呈陽(yáng)性表達(dá)，C：α-SMA呈陽(yáng)性表達(dá)，D： FAP呈陽(yáng)性表達(dá)；NFs：E：CK呈陰性表達(dá)，F(xiàn)：VIM呈陽(yáng)性表達(dá)，G：α-SMA呈陰性表達(dá)，H:FAP呈陰性表達(dá)。

2.3細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活力檢測(cè)結(jié)果兩組間OD值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F組間=1882，P組間<0.0001；F時(shí)間=1464，P時(shí)間<0.0001；F組間×?xí)r間=323.5，P組間×?xí)r間<0.0001)，見表1。繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，并在細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期以y分別為0.27、0.54劃線,其與細(xì)胞生長(zhǎng)曲線交叉點(diǎn)x的差值分別表示CAFs和NFs的群體倍增時(shí)間，即Tc=4.39-1.01=3.38d、Tn=5.06-1.01=4.05d。通過繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及倍增時(shí)間比較可見CAFs增殖速度相對(duì)更快，且呈持續(xù)增長(zhǎng)狀態(tài)，但其在第4d后增速逐漸減緩；而NFs于第5d細(xì)胞數(shù)達(dá)峰值后開始逐漸減少，見圖4。在第2～7d的增殖活力測(cè)定中，CAFs及NFs兩者之間同一天內(nèi)的增殖能力比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表1 細(xì)胞生長(zhǎng)增殖活力MTT法檢測(cè)結(jié)果

圖4 CAFs與NFs生長(zhǎng)曲線比較圖。

2.4RT-qPCR法檢測(cè)兩種細(xì)胞中FAPmRNA含量統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示眼瞼CAFs中FAP mRNA擴(kuò)增含量(3.672±0.221)明顯高于眼瞼NFs含量(1.034±0.024)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.58,P=0.002)，見圖5。

圖5 FAP mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較。

2.5WesternBlot檢測(cè)FAP蛋白表達(dá)結(jié)果Western Blot法檢測(cè)兩種細(xì)胞中FAP蛋白的表達(dá)結(jié)果示CAFs表達(dá)較高水平的FAP，而NFs幾乎不表達(dá)FAP(圖6A)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果示，F(xiàn)AP在CAFs中的表達(dá)量明顯高于NFs，兩者之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.720,P=0.007)，見圖6B。

圖6 FAP蛋白表達(dá)水平 A：具有代表性的FAP蛋白水平的Western Blot圖像;B：用三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的總結(jié)數(shù)據(jù)對(duì)免疫印跡進(jìn)行定量分析。

3討論

腫瘤或癌的發(fā)生、發(fā)展是多種因素共同作用的結(jié)果，許多證據(jù)表明，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤微環(huán)境變化緊密相關(guān)[18-19]。大量研究表明，CAFs是腫瘤微環(huán)境中最重要、最豐富的間質(zhì)細(xì)胞之一,其存在有利于合成更多的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)，為腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲等提供更有利的物質(zhì)條件，故而也被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素之一[20]。FAP是Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶，屬于二肽基肽酶家族一員，具有二肽基肽酶和內(nèi)肽酶雙重蛋白水解酶活性，其內(nèi)肽酶活性可降解腫瘤組織細(xì)胞外基質(zhì)，參與細(xì)胞外基質(zhì)的重塑，在多種人類惡性上皮腫瘤CAFs中高表達(dá)，也在部分腫瘤細(xì)胞中表達(dá)[8]，通過不斷釋放促腫瘤生長(zhǎng)和促血管生成介質(zhì)，介導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化并抑制免疫應(yīng)答，參與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移，并與部分患者的不良預(yù)后密切相關(guān)[11-12, 16]。眼瞼BCC以局部侵襲性生長(zhǎng)為特征，但惡性程度和轉(zhuǎn)移性均較低，所以本次我們探討了其微環(huán)境中CAFs表達(dá)FAP的情況以及FAP在其侵襲性生長(zhǎng)中的作用。

本實(shí)驗(yàn)采用組織塊貼壁法，成功獲得了純化的原代眼瞼CAFs與NFs，并對(duì)CAFs的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)CAFs呈紡錘形或長(zhǎng)梭形，胞質(zhì)突減少，增殖速率更快，存活能力更強(qiáng)，排列緊密，可重疊生長(zhǎng)，喪失了接觸抑制現(xiàn)象，分泌更多骨膜蛋白、生長(zhǎng)因子等，與NFs存在明顯的不同，這些差異與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道相似[21-22]。除了形態(tài)學(xué)特征改變之外，還需要使用細(xì)胞的特異性蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色來鑒定兩種細(xì)胞。因?yàn)镃AFs是腫瘤間質(zhì)中活化的成纖維細(xì)胞，具備平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞雙重特征，所以它們既表達(dá)肌纖維母細(xì)胞特異標(biāo)記α-SMA、FAP等[19,23-25]，又表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物VIM[26]，但上皮細(xì)胞標(biāo)志物CK為陰性表達(dá)[27-28]。因此，我們選用既往研究中常見的α-SMA、FAP、VIM及CK作為CAFs檢測(cè)指標(biāo)，運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)眼瞼CAFs及NFs進(jìn)行了鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：眼瞼CAFs表達(dá)α-SMA、FAP及VIM均陽(yáng)性，CK為陰性；NFs除表達(dá)VIM陽(yáng)性外，其余均陰性。其中α-SMA和FAP已被證實(shí)在體外培養(yǎng)的NFs中無(wú)表達(dá)或極低表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)不能發(fā)現(xiàn)，但RT-qPCR方法可能檢出[29]，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果一致[30]。

我們通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，CAFs較NFs具有更強(qiáng)的生長(zhǎng)增殖及存活能力(P<0.05)，其群體倍增時(shí)間明顯較NFs縮短，表明腫瘤組織中CAFs呈激活狀態(tài)，與NFs正常表型存在明顯差異，本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與我們前期的研究結(jié)果一致[22]。然后，我們進(jìn)一步通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，眼瞼基底細(xì)胞癌CAFs中FAP mRNA擴(kuò)增水平明顯高于NFs(P<0.05)；且Western Blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)眼瞼CAFs高表達(dá)FAP，而NFs不表達(dá)FAP(P<0.05)，與國(guó)內(nèi)外許多相關(guān)研究結(jié)果一致[11,23,31-33]，提示眼瞼基底細(xì)胞癌腫瘤微環(huán)境發(fā)生了變化，進(jìn)一步誘導(dǎo)NFs生物學(xué)特性和功能發(fā)生變化，最終轉(zhuǎn)變?yōu)镃AFs。以上分析結(jié)果表明，眼瞼基底細(xì)胞癌CAFs中FAP表達(dá)增強(qiáng)可能與其生長(zhǎng)增殖特性改變以及浸潤(rùn)性生長(zhǎng)有關(guān)。

目前關(guān)于FAP與CAFs相關(guān)的研究結(jié)果大多來源于一些惡性程度高、轉(zhuǎn)移性強(qiáng)且范圍廣的腫瘤類型，如乳腺癌[32]、胃癌[34]、結(jié)直腸癌[35]等。不同來源的腫瘤和不同區(qū)域腫瘤的CAFs的表型組成不同，因此其形態(tài)、功能具有異質(zhì)性[33]。多數(shù)研究認(rèn)為FAP促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、侵襲，但也有研究發(fā)現(xiàn)FAP-a除了發(fā)揮其酶的活性外，還具有非酶功能，認(rèn)為其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中可能具有抑制作用[33]。有研究發(fā)現(xiàn)FAP可能參與FAK、PTEN/PI3K/Akt和Ras-ERK信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及轉(zhuǎn)移[32-33]。

本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)眼瞼BCC與正常眼瞼皮膚組織中相關(guān)成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性以及FAP的表達(dá)存在明顯差異，這說明腫瘤微環(huán)境中成纖維細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生生物學(xué)特性和分泌功能的變化，并參與基底細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。FAP作為CAFs特異性的標(biāo)記蛋白，其在眼瞼基底細(xì)胞癌表達(dá)明顯增高，推測(cè)其可能與CAFs的生長(zhǎng)增殖特性改變以及眼瞼基底細(xì)胞癌的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)有密切聯(lián)系，可能是眼瞼基底細(xì)胞癌病因及防治的新靶標(biāo)，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。