豬細(xì)小病毒病滅活疫苗穩(wěn)定性研究報(bào)告

李應(yīng)鶴，宋 揚(yáng)，徐 剛，李 贄，于 鐳

（哈藥集團(tuán) 生物疫苗有限公司，哈爾濱 150069）

豬細(xì)小病毒病是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的三種重要傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]。因此，為了預(yù)防和控制這類疾病，研發(fā)安全、高效的疫苗是最主要的解決途徑。哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司試制的豬細(xì)小病毒病滅活疫苗（L株，懸浮培養(yǎng)）是一種含有豬細(xì)小病毒L株抗原的滅活疫苗，為了探討其穩(wěn)定性，將制備的3批滅活疫苗置于2～8℃環(huán)境中保存，分別于保存3、6、9、12、18和24個(gè)月后，按照現(xiàn)行《中國獸藥典》要求進(jìn)行疫苗性狀、無菌性和效力等檢驗(yàn)[3]，來確定疫苗的保存期，以期為養(yǎng)殖戶應(yīng)用到安全、高效的疫苗提供保證。

1 材料

1.1 疫苗

豬細(xì)小病毒病滅活疫苗（L株，懸浮培養(yǎng)），批號(hào)為201401、201402、201403，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備。

1.2 紅細(xì)胞凝集抑制抗原

豬細(xì)小病毒L株，批號(hào)為PPV-HI Ag-201401，紅細(xì)胞凝集價(jià)為1∶512，規(guī)格為1.0 mL·瓶-1，由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司制備和提供。

1.3 紅細(xì)胞懸液

0.5%豚鼠紅細(xì)胞懸液，按現(xiàn)行《中國獸藥典》進(jìn)行制備。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物

350～400 g成年豚鼠（豬細(xì)小病毒HI抗體不高于1∶8），由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 性狀檢測(cè)

將實(shí)驗(yàn)室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24個(gè)月后取樣，對(duì)其外觀、劑型、穩(wěn)定性和黏度按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 無菌檢驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24個(gè)月后取樣，按現(xiàn)行《中國獸藥典》進(jìn)行無菌檢驗(yàn)。

2.3 效力檢驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)室3批制品于2～8℃保存3、6、9、12、18、24個(gè)月后取樣，對(duì)體重350～400 g、豬細(xì)小病毒HI抗體效價(jià)低于1∶8的豚鼠5只進(jìn)行肌肉注射疫苗，0.5 mL·只-1。28 d后連同條件相同的未注射對(duì)照豚鼠2只，采血，測(cè)定HI抗體效價(jià)[2]。

3 結(jié)果與分析

3.1 性狀檢驗(yàn)結(jié)果

疫苗性狀檢驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)室3批制品2～8℃保存不同時(shí)間性狀檢驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，實(shí)驗(yàn)室3批制品在2～8℃保存24個(gè)月，外觀為粉白色乳狀液；水包油包水劑型；3 000 r/min離心15 min，管底析出水相均不超過0.5 mL；黏度符合規(guī)定。

3.2 無菌檢驗(yàn)結(jié)果

疫苗無菌檢驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)室3批制品2～8℃保存不同時(shí)間無菌檢驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，將實(shí)驗(yàn)室制備的3批豬細(xì)小病毒病滅活疫苗接種于T.G、G.A和G.P培養(yǎng)基上，2～8℃保存24個(gè)月后進(jìn)行觀察，結(jié)果培養(yǎng)基內(nèi)均無細(xì)菌、霉菌等雜菌的污染，比較純凈，與保存當(dāng)日無明顯差異，表明實(shí)驗(yàn)室制備的疫苗比較純凈、無菌。

3.3 效力檢驗(yàn)結(jié)果

疫苗效力檢驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知，將實(shí)驗(yàn)室3批制品在2～8℃保存24個(gè)月后，分別測(cè)定豬細(xì)小病毒HI抗體效價(jià)。結(jié)果免疫豚鼠豬細(xì)小病毒HI抗體效價(jià)均不低于1∶64，與保存當(dāng)日無明顯差異。對(duì)照組豬細(xì)小病毒血清抗體均為陰性。

表3 實(shí)驗(yàn)室3批制品2～8℃保存不同時(shí)間效力檢驗(yàn)結(jié)果

4 討論與結(jié)論

將制備的3批豬細(xì)小病毒病滅活疫苗（L株，懸浮培養(yǎng)）制品置于2～8℃環(huán)境中保存，分別于保存3、6、9、12、18和24個(gè)月后，按照現(xiàn)行《中國獸藥典》要求進(jìn)行疫苗性狀、無菌性和效力等檢驗(yàn)。從表1結(jié)果可以看出各組性狀穩(wěn)定，黏度符合規(guī)定。表2檢測(cè)結(jié)果表明疫苗純凈、無菌。表3結(jié)果中HI抗體效價(jià)穩(wěn)定，免疫豚鼠豬細(xì)小病毒HI抗體效價(jià)均不低于1∶64結(jié)果，均符合標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果并確保豬細(xì)小病毒病滅活疫苗的質(zhì)量，將本產(chǎn)品置2～8℃保存有效期暫定為18個(gè)月。