賀州市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)種豬偽狂犬病毒抗體水平檢測(cè)與分析

虞與理 王孝德 李志賢 禹婷婷 李而珍/廣西賀州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 542899

偽狂犬病(Pseudorabies,PR) 是由偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的多種動(dòng)物共患的急性傳染病，廣泛分布于我國(guó)各個(gè)地方，該傳染病對(duì)整個(gè)養(yǎng)豬業(yè)具有極為嚴(yán)重的危害性。臨床上主要表現(xiàn)為妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎及弱仔，新生仔豬出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀以及腹瀉死亡，育肥豬發(fā)熱和呼吸道等癥狀。PRV 可以通過種豬交配以垂直傳播的方式感染新生仔豬，因此做好種豬的PR 防控尤為重要。目前疫苗免疫是豬PR 中、高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)防控及規(guī)模豬場(chǎng)凈化的主要手段。大量文獻(xiàn)研究表明PRV gB 抗體水平能有效抑制豬場(chǎng)PR 的發(fā)病率。為了進(jìn)一步全面了解賀州市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)種豬PRV 疫苗免疫效果及gB 抗體水平，從賀州市8 個(gè)規(guī)模種豬場(chǎng)的免疫豬群中隨機(jī)采集480 份血清樣品進(jìn)行PRV gB 抗體檢測(cè)與分析，其結(jié)果有助于為種豬PR 的防控及凈化提供依據(jù)，以便為規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)提供科學(xué)的生物防疫指南。

1 材料方法

1.1 檢測(cè)試劑豬偽狂犬病毒gB 抗體檢測(cè)試劑盒，由北京金諾百特科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 血清樣品480 份血清樣品采集時(shí)間為2020 年6～8月，分別采自賀州市不同地區(qū)8 個(gè)規(guī)模種豬場(chǎng)（偽狂犬野毒抗體均為陰性）的后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬。疫苗使用：武漢科前活疫苗，免疫程序：后備母豬（1日齡鼻滴，35日齡），經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬每隔4 個(gè)月補(bǔ)免一次。

1.3 主要器材帝肯（上海）貿(mào)易有限公司 sunrise 酶標(biāo)儀、上海ZDP-A2080 電熱恒溫培養(yǎng)箱、Thermo Scientific MicroCL 21 離心機(jī)、BRAND 單道移液器(20～200 uL)、BRAND 多道移液器(20～200uL)。

1.4 檢測(cè)方法采用間接ELISA 試驗(yàn)，檢測(cè)程序嚴(yán)格按照北京金諾豬偽狂犬病毒gB 抗體檢測(cè)試劑盒使用說明進(jìn)行，所有檢測(cè)工作均在賀州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心血清學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成。

1.5 結(jié)果判定當(dāng)陰性對(duì)照OD450值≥0.7、陽性對(duì)照OD450值≤0.4，實(shí)驗(yàn)有效。S/N 值≤0.6 判為陽性；S/N 值大于等于0.6判為陰性。S/N 值=樣品的OD450/陰性對(duì)照的平均 OD450值。

2 結(jié)果

通過抽檢賀州市不同地區(qū)的8 個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)480份種豬血清，PRV gB 抗體平均陽性率為76.7%，其中后備母豬PRV gB 抗體陽性率最低僅為66.3%，種公豬PRV gB 抗體陽性率為76.9%，經(jīng)產(chǎn)母豬PRV gB 抗體陽性率最高為86.9%（見表2），不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)之間種豬的PRV gB 抗體陽性率差異較大（見表1）。

表1 規(guī)模場(chǎng)種豬PRVgB 抗體檢測(cè)情況

表2 規(guī)模豬場(chǎng)后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、種公豬PRVgB 抗體情況

3 討論

目前，我國(guó)用于預(yù)防偽狂犬病毒的疫苗主要是PRV gE基因缺失苗，該疫苗的使用可以通過ELISA 方法區(qū)分免疫豬和自然感染豬 。北京金諾PRV gB 抗體檢測(cè)試劑盒也是一種極其敏感的 PRV 全抗體檢測(cè)方法，非常微量的抗體水平就能夠產(chǎn)生陽性結(jié)果。此次檢測(cè)的PRV gB 抗體豬群均為PR 野毒抗體陰性豬群，因此 PRV gB 抗體水平能夠真實(shí)反映疫苗免疫效果。

我們?cè)谫R州市地區(qū)抽檢的8 家規(guī)模豬場(chǎng)480 份種豬血清，PRV gB 抗體平均陽性率為76.7%，略高于之前報(bào)告的廣西部分地區(qū)豬群豬偽狂犬病免疫抗體陽性率71.25%。其中后備母豬PRV gB 抗體陽性率最低僅為66.3%，經(jīng)產(chǎn)母豬PRV gB 抗體陽性率最高為86.9%，與段正贏等人報(bào)道PRV gB 抗體陽性率最高的豬為后備母豬存在差異，這可能與規(guī)模豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬每年普免3～4 次有關(guān)，經(jīng)過多次免疫，抗體效價(jià)較高。不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)種豬PRV gB 抗體陽性率差異較大，其中最低僅為18.3%，最高的為100.0%，這些數(shù)據(jù)說明賀州市近年來對(duì)豬PR凈化成效已經(jīng)達(dá)到了一定的高度，但是仍然存在不盡人意的地方。例如H 場(chǎng)種豬整體的PRV gB 抗體陽性率極低，并且后備母豬和種公豬的PRV gB 抗體陽性率為0，這樣長(zhǎng)期以來也不利于仔豬出生后獲得充足的母源抗體，可能造成仔豬會(huì)易感PRV 野毒，從而給豬場(chǎng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為此對(duì)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)PRV 抗體水平或制定科學(xué)的疫苗免疫制度預(yù)防策略顯得尤為迫切。另外檢測(cè)數(shù)據(jù)表明同一個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的后備母豬、經(jīng)產(chǎn)母豬和種公豬之間的PRV gB 抗體也存在差異。究其原因，豬場(chǎng)技術(shù)員是否嚴(yán)格按照免疫程序，按時(shí)按量對(duì)豬群進(jìn)行免疫，值得我們?nèi)タ紤]。要想達(dá)到預(yù)期的疫苗效果，需要把握細(xì)節(jié)方面，例如要讓疫苗恢復(fù)常溫后才能接種，免疫前要對(duì)被免疫豬群進(jìn)行健康檢查，然后要選擇合適的針頭，免疫時(shí)要及時(shí)更換針頭等，同時(shí)，要加強(qiáng)監(jiān)測(cè)，掌握豬群的偽狂犬疫苗抗體水平及野毒情況，對(duì)疫苗抗體水平低下的個(gè)體或抗體水平層次不齊的豬群進(jìn)行補(bǔ)免。整體而言，賀州市規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)種豬偽狂犬疫苗免疫效果比較理想,免疫程序合理。

4 結(jié)語

2012 年國(guó)務(wù)院辦公廳頒布的《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃 2012—2020》中要求，到 2020 年全國(guó)所有種豬場(chǎng)豬偽狂犬病要達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。雖然現(xiàn)階段我國(guó)的免疫水平相當(dāng)高，防治技術(shù)也比較成熟，但該病并沒有得到徹底的根治，形勢(shì)依然嚴(yán)峻。因此，加強(qiáng)疫苗，是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的根本措施，豬場(chǎng)要制定科學(xué)的、適合自己的免疫程序，采取嚴(yán)格的生物安全措施，加強(qiáng)豬場(chǎng)飼養(yǎng)管理，加強(qiáng)消毒，并通過PRV gB 抗體的監(jiān)測(cè)工作，為豬場(chǎng)的安全生產(chǎn)保駕護(hù)航。