高效液相色譜法檢測(cè)蔬菜中吡蟲(chóng)啉殘留試驗(yàn)分析

摘要：本文以蔬菜作為主要研究對(duì)象，對(duì)蔬菜中的吡蟲(chóng)啉殘留情況進(jìn)行針對(duì)性的檢測(cè)。從檢測(cè)結(jié)果中可以看出，高效液相色譜法可以在短時(shí)間內(nèi)快速完成檢測(cè)，并有效保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，對(duì)蔬菜中的吡蟲(chóng)啉殘留測(cè)定非常適合。

關(guān)鍵詞：蔬菜;高效液相色譜法;吡蟲(chóng)啉;殘留

吡蟲(chóng)啉是國(guó)外經(jīng)多年研究創(chuàng)造出的煙堿類殺蟲(chóng)劑，已經(jīng)在世界范圍內(nèi)得到廣泛的應(yīng)用，銷量位居同類型殺蟲(chóng)劑首位。其在殺蟲(chóng)過(guò)程中會(huì)對(duì)乙酰膽堿體產(chǎn)生一定的作用，對(duì)昆蟲(chóng)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生干擾，使昆蟲(chóng)受到強(qiáng)烈的刺激，堵塞神經(jīng)通路，最終死亡。吡蟲(chóng)啉具有高效、毒性小的多重特點(diǎn)，可以在果蔬、谷類等作物中廣泛應(yīng)用，也可用來(lái)防治害蟲(chóng)。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備、試劑和樣品

選擇安捷倫1260型高效液相色譜儀（配備紫外檢測(cè)器），準(zhǔn)備乙腈、二氯甲烷和甲醇等試劑，另準(zhǔn)備好吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)品。由同一農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)采購(gòu)西紅柿、菜豆和結(jié)球甘藍(lán)3種蔬菜作為樣品。

1.2 試驗(yàn)步驟

1.2.1 提取 使用食品粉碎機(jī)粉碎蔬菜樣品，用天平稱量出試驗(yàn)所需的試樣25克，統(tǒng)一放置于250毫升燒杯中，再加入50毫升乙腈，使用高速均漿機(jī)進(jìn)行120秒的勻漿，并將其過(guò)濾，放到具塞量筒中，加入4克氯化鈉，進(jìn)行50秒的劇烈振蕩后，保持30分鐘的靜止，將乙腈吸取出10毫升，并放到燒杯中，使用氮?dú)獯蹈梢译?，配制好甲醇和二氯甲烷混合溶液，使提取物可以被充分溶解?/p>

1.2.2 凈化 取supel cleaLC-NH2小柱，對(duì)甲醇和二氯甲烷按一定比例配制，先預(yù)淋洗supelcleaLC-NH2小柱，再將上述提取液加入柱中，并做兩次洗脫，收集洗脫液。將洗脫液收集在定容離心管中，再使用氮吹儀吹干此離心管，取2毫升甲醇溶液加入已吹干的定容離心管中，使用濾膜過(guò)濾，為液相色譜分析創(chuàng)造良好的條件。

1.2.3 液相色譜條件 色譜柱：Waters symmetry shieldTMC 18（4.6×250毫米，5微米），溫度控制在30℃左右，檢測(cè)波長(zhǎng)275納米;流動(dòng)相CH3OH∶H2O∶CH3CN=55∶25 ∶20;流速每分鐘0.8毫升;進(jìn)樣量10.0微升。

1.2.4 樣品測(cè)定 在滿足色譜條件下，待儀器恢復(fù)到穩(wěn)定狀態(tài)后，再次加入吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣時(shí)需要保證相鄰兩針的響應(yīng)值達(dá)到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)樣順序?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液，計(jì)算結(jié)果需要將兩次重復(fù)所得面積相加，取平均值。

1.2.5 結(jié)果計(jì)算 以該公式對(duì)樣品中吡蟲(chóng)啉農(nóng)藥殘留含量進(jìn)行準(zhǔn)確的計(jì)算，其中測(cè)定樣品含量以m2表示，加入的乙腈量以V1表示;V2代表分取體積;最后定容體積以V3表示;進(jìn)樣體積和稱樣量分別以V4和?L表示;m1稱樣量。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

以甲醇為介質(zhì)稀釋吡蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)品，使其可以成為不同規(guī)格的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液，這一系列溶液的規(guī)格分別為0.1、0.2、0.5和1.0毫克/升，使用液相色譜儀依次進(jìn)樣測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度處于0.1以上，不超過(guò)1.0毫克/升時(shí)，吡蟲(chóng)啉濃度會(huì)與儀器響應(yīng)值面積產(chǎn)生線性相關(guān)，并且這種線性相關(guān)較好，擁有完整的校正曲線，其相關(guān)系數(shù)為0.992508。

2.2 最低檢出限

稀釋后的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)溶液為基線噪音的10倍以上，濃度較高。如果以15克進(jìn)行取樣，其最低檢出限為0.01毫克/公斤。

2.3 色譜條件的選擇

吡蟲(chóng)啉具有極好的使用效果，可以充分溶解在水中，也可以保留在C18柱上，呈現(xiàn)的峰行非常良好。從試驗(yàn)中可以明確，需要將甲醇、乙腈、水，以55∶20∶25的比例混合，并選擇分離試樣中的吡蟲(chóng)啉。如圖1所示為吡蟲(chóng)啉的準(zhǔn)分子離子的色譜圖。

2.4 試樣前處理方法

2.4.1 選擇提取溶劑和洗脫液 在選擇樣品提取劑時(shí)，乙腈、丙酮等都屬于首要的選擇之一，需要由專業(yè)人員提取一定質(zhì)量濃度的樣品，從中能夠發(fā)現(xiàn)提取效果最佳的是乙腈，其比丙酮、乙酸乙酯等試劑的回收率明顯高出很多，在提取操作時(shí)也非常便利。不同比例二氯甲烷比甲醇，會(huì)直接影響藥品洗脫效果。結(jié)果表明，當(dāng)吡蟲(chóng)啉回收率處于穩(wěn)定狀態(tài)時(shí)，甲醇體積分?jǐn)?shù)為1.0%～9%，但甲醇與二氯甲烷相結(jié)合時(shí)，只會(huì)存在較少的雜質(zhì)峰。當(dāng)使用10毫升的洗脫劑時(shí)，吡蟲(chóng)啉可以完全回收。

2.4.2 選擇凈化方法 目前，液液萃取法和固相萃取法是分析農(nóng)藥殘留最為常用的方法之一。固相萃取方法可以將提取、收縮等步驟相整合，使操作步驟更加簡(jiǎn)化，并對(duì)溶劑用量進(jìn)行合理控制，使樣品前處理效率得到顯著提升，該方法基于這些優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)引起了相關(guān)人員的關(guān)注和重視。本文通過(guò)比較后發(fā)現(xiàn)，處理效果最好的是氨基小柱。氨基小柱在蔬菜樣品前處理時(shí)，雜質(zhì)較少，只會(huì)受到較小的干擾，顏色比較淺，回收率與分析測(cè)定需求相符合。本試驗(yàn)在處理時(shí)應(yīng)用升C-NH2柱凈化方式，可以使試樣中的天然色素和糖類大分子得到有效地去除，試驗(yàn)充分證明可以對(duì)吡蟲(chóng)啉測(cè)定的干擾進(jìn)行快速消除。

2.5 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn)

將3份西紅柿樣品稱取好，合理利用標(biāo)準(zhǔn)加入法，將0.05、0.10、0.20毫克/公斤的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)品加入到已知含量的吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)品中，按照上述方法完成提取，并做好凈化，在色譜條件下對(duì)吡蟲(chóng)啉含量進(jìn)行科學(xué)地測(cè)定，并針對(duì)回收率實(shí)驗(yàn)展開(kāi)分析。如表1所示，為計(jì)算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

從表1中可以明確看出，當(dāng)平均率處于95.4%～106.8%時(shí)，其處于0.05～0.20毫克/公斤的添加水平范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差可以控制在合理地范圍內(nèi)，與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥殘留需求相符合。

2.6 樣品的檢測(cè)

選取10份來(lái)自同一農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的西紅柿、菜豆和結(jié)球甘藍(lán)，運(yùn)用此方法進(jìn)行測(cè)定，從測(cè)定結(jié)果中可以準(zhǔn)確確定并沒(méi)有殘留吡蟲(chóng)啉。

3 結(jié)論

本文在進(jìn)行蔬菜中吡蟲(chóng)啉農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，對(duì)樣品進(jìn)行了規(guī)范化地處理，充分發(fā)揮高效液相色譜檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)，順利完成了檢測(cè)工作。從檢測(cè)結(jié)果中可以明確看出，當(dāng)吡蟲(chóng)啉添加水平處于0.05、0.10毫克/公斤時(shí)，可以準(zhǔn)確計(jì)算其相對(duì)偏差，與農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求相符合。該方法在檢測(cè)蔬菜樣品時(shí)花費(fèi)的時(shí)間較少，操作便利性強(qiáng)，并且檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)，可以為測(cè)定其他產(chǎn)品的吡蟲(chóng)啉殘留量提供借鑒和參考，大力推廣。

作者簡(jiǎn)介：周玲（1992-），女，助理工程師。主要從事農(nóng)藥殘留檢測(cè)工作。