不同海拔燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量分析

王靜怡 郭昕 馮春 楊利 何耀瑩 段紅吉 武正才

【摘 要】 目的：研究不同海拔生長的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的提取收率及含量。方法：采用乙醇熱回流提取方法提取燈盞花乙素，提取的燈盞花乙素用HPLC檢測含量。結(jié)果：所采樣品中，海拔在1000 m以下及2000 m以上生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素提取收率為5‰～8‰;藥材中燈盞花乙素的含量為1.8%～3.3%;海拔在1000～2000 m之間生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素提取收率在8‰～12‰;藥材中燈盞花乙素的含量為3.4%～5.3%。結(jié)論：適合于種植燈盞細(xì)辛的地理位置為海拔在100～2000 m左右的地方。

【關(guān)鍵詞】 海拔;燈盞細(xì)辛;提取收率;燈盞花乙素;含量

【中圖分類號】R284.1 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2021）11-0041-03

Abstract：Objective To study the extraction yield of Scutellarin from Erigeron breviscapus at different altitude. Methods Breviscapine was extracted by alcohol heat reflux method， and the content of Breviscapine was determined by HPLC. Results The extraction yield of Scutellarin from fleabane was 5‰～8‰The content of Scutellarin was 1.8 %～ 3.3% in the samples below 1000m and above 2000 m above sea level The yield of Scutellarin from Erigeron breviscapus was 8‰～12‰ The content of Scutellarin was 3.4% ～ 5.3%.Conclusion Suitable for cultivation of Erigeron breviscapus geographical location in the elevation of about 1000 meters to 2000 meter.

Keywords：Altitude; Erigeron breviscapus; Extraction Yield; Scutellarin;Content

燈盞細(xì)辛為菊科植物短葶飛蓬[Erigeron breviscapus （Vant.） Hard.-Mazz]的干燥全草，主要分布于我國云南、貴州、四川等地，從采集樣品的最低海拔695 m，到最高海拔4041.6 m均有生長，是一種民間常用中藥。燈盞細(xì)辛具有散寒解表、祛風(fēng)除濕、活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)等功效。臨床主要用于治療缺血性腦血管疾病、冠心病、心絞痛等癥，其療效較好，毒副作用小，運(yùn)用范圍廣。燈盞細(xì)辛主要有效成分為黃酮類化合物燈盞花乙素。由于不同海拔的燈盞細(xì)辛藥材中主成分燈盞花乙素含量差異較大，為了采收到質(zhì)量較好的藥材，對藥材產(chǎn)地的選擇十分重要。通過對不同海拔的藥材進(jìn)行研究比較，找到收購的最佳產(chǎn)地及較適合于種植燈盞細(xì)辛的地理位置。

1 儀器和試藥

Agilent-1100高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），BUCHI Rotavapor R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琪），BP221D電子分析天平（德國塞多利斯）， HS6150D 超聲波清洗器 （天津恒實(shí)）， 0.5～5.0、6.4～8.0精密pH試紙（上海三愛思試劑有限公司）;燈盞花乙素對照品（中國食品藥品檢驗(yàn)研究院，批號110842-201508），乙醇（色譜純），其它試劑均為分析純。9批不同產(chǎn)地不同海拔燈盞細(xì)辛藥材樣品（詳見燈盞細(xì)辛藥材樣品來源表1）。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法工藝流程 燈盞細(xì)辛粉→乙醇回流→減壓濃縮→堿溶除膠→濾過→酸沉→濾過→沉淀醇溶→干燥→粗品→精制→成品。

2.2 提取操作方法 取燈盞細(xì)辛粉200 g，用70%的乙醇回流提取3次（溶劑倍量5 N、5 N、4 N，回流時(shí)間2 h、2 h、1 h），減壓濃縮至（浸膏∶ 生藥=1∶ 1），用飲用水稀釋至浸膏2倍量，用10%NaOH溶液調(diào)pH7.0～7.2，靜置過夜，膠質(zhì)用120目篩網(wǎng)濾除，濾液用10%H2SO4調(diào)pH2.0～2.5，靜置過夜，濾過，沉淀用乙醇洗滌，干燥即得燈盞花素粗品。粗品用20倍純化水溶解，用10%NaOH溶液調(diào)pH 7.0～7.2，濾過，濾液用10%H2SO4調(diào)pH 2.0～2.5，靜置過夜，濾過，沉淀用少量乙醇洗滌，干燥即得燈盞細(xì)辛提取物。

2.3 含量方法學(xué)考察與結(jié)果

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，250 mm×4.6 mm，5 μm十八烷基鍵合硅膠色譜柱。流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶ 60），流速為每分鐘1.0 mL;柱溫40 ℃;檢測波長335 nm。理論塔板數(shù)按燈盞花乙素峰計(jì)算不得低于5000。

2.3.2 對照品溶液的制備 取燈盞花乙素對照品10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超聲處理（功率300 W，頻率50 KHz）45 min，取出，放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇70 mL，超聲處理（功率300 W，頻率50 KHz）45 min，取出，放置室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取燈盞花乙素對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理，以甲醇定容，取1、5、10、15、20 mL分別置于25 mL量瓶中，用甲醇定容，精密吸取5 μL，按色譜條件依次進(jìn)樣，記錄峰面積，以濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，燈盞花乙素的回歸方程為Y=490816X+7770.9（r=0.9991），說明燈盞花乙素在0.2～4.0 μg線性良好。

2.3.5 精密度考察 取燈盞花乙素對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得峰面積，其RSD為0.69%，方法精密度良好。

2.3.6 重復(fù)性考察 取同一供試樣品6份，精密稱定，按樣品測定項(xiàng)下的方法進(jìn)行含量測定。測得供試品RSD為1.79%，表明供試品的重現(xiàn)性良好。

2.3.7 穩(wěn)定性考察 取同一燈盞細(xì)辛樣品溶液，分別在0、1、2、4、6、8 h依次注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，結(jié)果RSD為1.97%，表明供試品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.8 加樣回收率考察 精密稱取已知含量的燈盞細(xì)辛提取物樣品（3#號樣品）6份，分別精密加入一定量的燈盞花乙素對照品，按2.3.3制備供試品溶液，根據(jù)色譜條件進(jìn)樣，平均回收率為98.73%，RSD為1.08%，表明該方法回收率較好，方法可行。

2.3.9 樣品含量測定 取不同海拔的燈盞細(xì)辛提取物樣品，按照含量測定 “2.3.3”方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

3 結(jié)果

3.1 不同海拔的燈盞細(xì)辛藥材中提取燈盞花乙素的收率及含量 相關(guān)數(shù)據(jù)詳見表3。

3.2 不同海拔燈盞細(xì)辛藥材中提取的燈盞花乙素收率折線圖 如圖1所示。

3.3 不同海拔燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素含量圖 如圖2所示。

4 討論

從圖1可以看出，海拔在1100～2126 m之間生長的4個(gè)燈盞細(xì)辛樣品中燈盞細(xì)辛提取物的提取收率為8‰～12‰，收率較高。海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細(xì)辛樣品中燈盞細(xì)辛提取物的提取收率為5‰～8‰，收率較低。從圖2可以看出海拔在1100～2126 m之間生長的四個(gè)燈盞細(xì)辛藥材中盞花乙素的含量為3.4%～5.3%，海拔在1000 m以下2162 m以上生長的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的的含量為1.8%～3.3%。

本研究證明，不同海拔生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的提取收率及含量有差異，且摸索出海拔較低或者海拔較高的地方生長的燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的提取收率和含量都不高，海拔在1000～2000 m左右生長的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素含量較高。適合種植燈盞細(xì)辛的最佳地理位置為海拔在1000～2000 m左右的地方。

各地收購的季節(jié)與當(dāng)?shù)氐牡乩砦恢糜嘘P(guān)，溫差、陽光照射時(shí)間都會(huì)影響燈盞細(xì)辛的采收時(shí)間。為了研究不同海拔生長的燈盞細(xì)辛中對燈盞花乙素的含量，在采收時(shí)期和采收地點(diǎn)應(yīng)盡可能統(tǒng)一，采收時(shí)期都選擇盛花期，采收的地點(diǎn)都選擇向陽坡地。

參考文獻(xiàn)

[1]宋立人，洪恂，丁緒亮，等. 現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2001： 885-887.

[2]郭濟(jì)賢，潘偉堅(jiān)，楊瑞萍，等. 中藥燈盞花及其同屬部分植物的研究概況[J]. 中成藥研究， 1987， 9（8）： 30-31.

[3]李廷釗，劉文庸，李國棟，等. 燈盞細(xì)辛提取工藝的研究[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002， 33（6）： 281-282.

[4]張旭，耿伯顯，陳玲玲，等. 燈盞花HPLC指紋圖譜的研究[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志， 2003， 34（6）： 270-272.

[5]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：402-404.

（收稿日期：2020-11-05 編輯：劉 斌）