2018～2019年安陽(yáng)市規(guī)模豬場(chǎng)豬流感病毒病調(diào)查研究

王慶云，趙 琳，郭希萍，王會(huì)英

(安陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 安陽(yáng) 455000)

豬流行性感冒簡(jiǎn)稱豬流感(Swine Influenza, SI)是由豬流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的針對(duì)與不同日齡，性別和品種豬的一種急性、熱性、高密度接觸性呼吸道傳染病。常見(jiàn)的病毒亞型包括H1N1、H3N2和H1N2等，也有H5N1和H9N2亞型的報(bào)道。各亞型病毒導(dǎo)致的豬流感在世界各地均有發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬流感臨床癥狀主要表現(xiàn)為突發(fā)、高熱(高達(dá)40～42°C)、流涕、咳嗽和呼吸困難等。感染豬流感病毒的豬會(huì)表現(xiàn)出精神萎靡，食欲不振，眼鼻有粘性帶血分泌物流出，并伴有陣咳和尖咳，呼吸急促，呈腹式呼吸，身體極度虛弱，甚至虛脫，臥地不起。若是懷孕母豬感染，會(huì)導(dǎo)致繁殖障礙，流產(chǎn)甚至死亡。對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的影響極大。

豬流感的潛伏期一般為1～3 d，通常當(dāng)豬發(fā)現(xiàn)癥狀24 h后，豬舍內(nèi)便會(huì)出現(xiàn)同樣癥狀的豬。豬流感病毒在豬的呼吸道系統(tǒng)，隨著病豬呼出的氣體及分泌物傳播，健康豬通過(guò)與病豬的接觸，2～3 d便可傳遍豬群，呈現(xiàn)快速傳播的態(tài)勢(shì)。如若養(yǎng)殖人員采取治療措施，該病會(huì)在7 d內(nèi)得到有效的治療，流行態(tài)勢(shì)也會(huì)得到相應(yīng)的控制。但如若飼養(yǎng)人員的忽視，后期繼發(fā)感染其他傳染性疾病，會(huì)使治療難度加大，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)不可估量的經(jīng)濟(jì)損失。另外，H1N1型流感病毒還可導(dǎo)致禽流感和人流感的發(fā)生。2009年3月，在墨西哥爆發(fā)的人甲型H1N1型流感疫情，僅半年時(shí)間就導(dǎo)致世界近有45萬(wàn)人感染，6 000多人死亡。豬被認(rèn)為是人流感和禽流感病毒共同的易感宿主，被認(rèn)為是流感病毒基因的重編輯的“混合器”，在流感病毒的適應(yīng)性變異及新病毒株的形成中具有重要的作用，因此，對(duì)流感病毒的調(diào)查監(jiān)測(cè)，不僅對(duì)豬養(yǎng)殖業(yè)具有必要性，而且對(duì)公共衛(wèi)生領(lǐng)域也具有重要的指導(dǎo)意義。

為了解安陽(yáng)市2018～2019年的豬流感的流行情況，本研究采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法對(duì)該市豬血清樣本進(jìn)行檢測(cè)調(diào)查，現(xiàn)將調(diào)查情況報(bào)道如下：

1 材料

1.1 受檢樣品

來(lái)源于安陽(yáng)市文峰區(qū)，北關(guān)區(qū)，殷都區(qū)，龍安區(qū)，安陽(yáng)縣，湯陰縣，內(nèi)黃縣，林州市等地區(qū)的養(yǎng)豬場(chǎng)，散養(yǎng)戶，及生豬交易市場(chǎng)的1 169份豬血清。

1.2 材料

材料：豬流感病毒(H1亞型)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒和豬流感病毒(H3亞型)ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)買(mǎi)于北京IDEXX元亨有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

嚴(yán)格按照購(gòu)買(mǎi)的ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)規(guī)范操作。1)用樣品稀釋液按照1︰50稀釋被檢測(cè)血清；2)加樣。每孔加入100 μL，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各2孔，用封閉液封板室溫封閉30 min；3)封閉完成后，棄封閉液，每孔加入350 μL洗滌液洗滌5次，每次15s，拍干；4)每孔加入100 μL酶標(biāo)抗豬抗體，室溫作用30 min；5)棄抗體，每孔加入350 μL洗滌液洗滌4次，每次15s，拍干；6)每孔加入底物反應(yīng)液100 μL，室溫避光顯色15 min；7)每孔加入終止液100 μL，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔OD650的值，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果判定：當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD650值減去陰性對(duì)照孔平均OD650值≥0.15時(shí)，確定試驗(yàn)成立。S/P≥0.4，判被檢樣品為陽(yáng)性；S/P<0.4，判被檢樣品為陰性。

3 結(jié)果與分析

3.1 安陽(yáng)市H1亞型流感病毒感染情況

通過(guò)對(duì)安陽(yáng)市1169份豬血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，H1亞型流感病毒的感染陽(yáng)性率在33.98%～70.44%之間分布，平均感染率為54.49%。其中北關(guān)區(qū)的H1亞型感染率最高，高達(dá)70.44%；湯陰縣的H1亞型感染率最低，為33.98%。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1和圖1。

表1 安陽(yáng)地區(qū)SIV(H1)血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

圖1 安陽(yáng)市各縣(市、區(qū))SIV(H1)血清陽(yáng)性檢出率

3.2 安陽(yáng)市H3亞型流感病毒感染情況

通過(guò)對(duì)安陽(yáng)市1169份豬血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，H3亞型流感病毒的感染陽(yáng)性率在24.37%～36.90%之間分布，平均感染率為30.62%。其中林州市的H3亞型感染率最高，為36.90%；內(nèi)黃縣的H3亞型感染率最低，為24.37%。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

表2 安陽(yáng)地區(qū)SIV(H3)血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

圖2 安陽(yáng)市各縣(市、區(qū))SIV(H3)血清陽(yáng)性檢出率

3.3 安陽(yáng)市H1和 H3亞型流感病毒重復(fù)感染情況

通過(guò)對(duì)安陽(yáng)市1169份豬血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，安陽(yáng)地區(qū)豬流感病毒H1和H3亞型流感病毒重復(fù)感染率在17.65%～34.52%之間分布，平均感染率為24.29%。其中林州市的H1和H3亞型流感病毒重復(fù)感染率最高，為34.52%；內(nèi)黃縣的H1和H3亞型流感病毒重復(fù)感染率最低，為17.65%。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3和圖3。

表3 安陽(yáng)地區(qū)SIV(H1和H3)血清陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)結(jié)果

圖3 安陽(yáng)市各縣(市、區(qū))SIV(H1和H3)血清陽(yáng)性檢出率

4 討論

通過(guò)本次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在安陽(yáng)市豬群中存在H1和H3亞型豬流感病毒的感染，且存在H1和H3亞型豬流感病毒的混合感染。安陽(yáng)市H1亞型豬流感病毒的感染率較H3亞型豬流感病毒的高。我們發(fā)現(xiàn)，有關(guān)H1亞型豬流感病毒的感染主要在北關(guān)區(qū)，其養(yǎng)殖密度大，檢測(cè)樣本為247份，其中陽(yáng)性為174份，陽(yáng)性率最高，為70.44%。究其原因，可能與養(yǎng)殖密度，及豬流感的傳播速度有密切關(guān)系。而在安陽(yáng)縣檢測(cè)樣本為96例，陽(yáng)性樣本為61例，陽(yáng)性率也高達(dá)63.54%。我們發(fā)現(xiàn)地理位置上安陽(yáng)縣緊靠北關(guān)區(qū)，這就為豬流感病毒的傳播提供了有利條件，由于豬交易市場(chǎng)或相鄰豬場(chǎng)的交流，導(dǎo)致了安陽(yáng)縣H1亞型豬流感病毒的感染率也較高。

H3亞型豬流感的感染率最高地區(qū)為林州市，陽(yáng)性率為36.90%。其次為北關(guān)區(qū)，陽(yáng)性率為36.03%。結(jié)果表明，養(yǎng)殖的密集度與豬流感的傳播有重要關(guān)系。另外，調(diào)查發(fā)現(xiàn)各地區(qū)的陽(yáng)相率相差不大，這可能跟豬流感病毒的季節(jié)性流行有一定的關(guān)系。林州市的H1和H3亞型流感病毒的重復(fù)性感染率也是最高的，H1和H3亞型流感病毒存在混合型感染，甚至?xí)嬖谄渌《?，例如豬瘟病毒、偽狂犬病毒等的感染。針對(duì)豬流行性感冒疾病，尚無(wú)特效治療藥物，所以養(yǎng)殖人員應(yīng)該加強(qiáng)豬流感相關(guān)知識(shí)的學(xué)習(xí)，加強(qiáng)豬的飼養(yǎng)管理，盡早接種高效豬流感疫苗，發(fā)現(xiàn)疫情，盡早隔離病豬，做好環(huán)境消毒清潔工作。

研究表明，豬的呼吸道上皮細(xì)胞同時(shí)具有識(shí)別和結(jié)合人流感病毒與禽流感病毒的唾液酸受體，可成為人流感和禽流感的中間宿主。豬作為中間宿主可以在流感病毒的基因編輯中扮演重要的角色，從而產(chǎn)生新的病毒種類，對(duì)公共衛(wèi)生安全造成重大威脅。另外，H1N1亞型的豬流感病毒能在人和豬種群中交互傳播，可造成人類呼吸道疾病，如重癥肺炎等疾病，對(duì)于人的生命安全有重大隱患。因此，對(duì)于豬流感的調(diào)查研究不僅能夠規(guī)范養(yǎng)豬業(yè)，為生豬養(yǎng)殖提供預(yù)警，也是人類公共衛(wèi)生安全所必要的。