三種清熱解毒類中成藥的熒光指紋圖譜研究

朱丹丹，毛 越，楊莉麗

(河北師范大學(xué) 化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，河北 石家莊 050024)

0 引言

金蓮花膠囊是采用毛茛科植物金蓮花的干燥花制成的單方制劑，具有清熱解毒，抗菌消炎的功效，用于上呼吸道感染、咽炎、扁桃體炎的治療[1]。李勇軍等[1]采用高效液相色譜法建立了不同廠家不同批次金蓮花膠囊的指紋圖譜。李桂蘭等[2]采用高效液相色譜法對金蓮花膠囊中對羥基苯甲蘋果酸、葒草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、葒草素和牡荊素的含量進行測定，為金蓮花膠囊的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

清火片由大青葉、大黃、石膏、薄荷腦4味中藥組成，具有清熱瀉火、通便之功效，用于咽喉腫痛、牙痛、頭目眩暈、口鼻生瘡、風火目赤、大便不通的治療[3]。許苗苗等[4]建立了高效液相色譜-熒光檢測測定清火片中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種游離蒽醌和結(jié)合蒽醌含量的方法。

復(fù)方穿心蓮片是由穿心蓮和路邊青提取制成的片劑，具有清熱解毒、利濕之功效，可用于風熱感冒、咽喉疼痛、濕熱泄瀉等疾病的治療[5]。周少林等[6]采用薄層色譜法鑒別復(fù)方穿心蓮片中的穿心蓮和路邊青；采用高效液相色譜法測定復(fù)方穿心蓮片中的脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。張慧曄等[7]優(yōu)化了復(fù)方穿心蓮片的薄層鑒別方法，并對該制劑中的穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯和路邊青進行定性鑒別。敖華蓉等[8]建立了不同廠家不同批次復(fù)方穿心蓮片的高效液相色譜指紋圖譜，并對穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯等6種有效成分的含量進行測定。

本文對3種清熱解毒類中成藥金蓮花膠囊、清火片和復(fù)方穿心蓮片的三維熒光圖譜進行測定，應(yīng)用Matlab軟件提取三維熒光圖譜數(shù)據(jù)的特征參數(shù)[9]，利用聚類分析法對3種清熱解毒類中成藥三維熒光圖譜的一致性進行考察，對于熒光圖譜一致性良好的中成藥；采用平均值法分別建立其三維熒光指紋圖譜。

1 材料與方法

1.1 儀器、材料與試劑

F-4600熒光分光光度計(Hitachi公司)，SB25-12DTD超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)，0.45 μm濾膜(天津市科億隆實驗設(shè)備有限公司)，甲醇(色譜純，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?，去離子水(自制)。

金蓮花膠囊：牙克石市森健藥業(yè)有限公司(簡稱牙克石市森健，批號02190102、02190108、02190111、02190301、02190502、02191008)，吉林天藥本草堂制藥有限公司(簡稱吉林天藥，批號20180101、190601、190602)，貴州益康制藥有限公司(簡稱貴州益康，批號20190501、20190702、20190902、20191101、20191204、20200201、20200102、20200204)，江西銀濤藥業(yè)有限公司(簡稱江西銀濤，批號1904002、1905003、1906004、1907006)。

清火片：廣西正堂藥業(yè)有限責任公司(簡稱廣西正堂，批號20190301、20190701、20190702、20190703、20191001、20200101)，江西省芙蓉堂藥業(yè)股份有限公司(簡稱江西芙蓉堂，批號190602、1900702、190807、190808、190809、190901、190910、191109、191111、200203、200307、200308)，伊春金北藥制藥有限責任公司(簡稱伊春金北，批號19040260、19060560、19100160、19110760、20021260、20040960)，廣西維威制藥有限公司(簡稱廣西維威，批號190102、190303、190403、190701)。

復(fù)方穿心蓮片：廣州白云山和記黃埔中藥有限公司(簡稱廣州白云山，批號D18S004、G18S006、H18S007、I18S001、B19S001、B19S002、B19S004、G19S001、G19S002、G19S004、G19S006、G19S012、H19S002、I19S007)，廣東羅浮山國藥股份有限公司(簡稱廣東羅浮山，批號L19C032、L19C221、L19C232、L19I131、L19I142、L19I271、L19I273、L19J191、L19J192、L19J201、L19J202、L19K191、L19K171)，廣西禪方藥業(yè)股份有限公司(簡稱廣西禪方，批號181202、190301、190401、190601、190702、190703、190705、190804、190805、190905、191001、191005)，廣東新峰藥業(yè)股份有限公司(簡稱廣東新峰，批號180907、190403、190406、190501、191104、191108、191201、200203)。

1.2 方法

從每個批號的中成藥中隨機選取3個樣本進行實驗，片劑需先除去糖衣，研磨成粉末狀備用，膠囊直接取出膠囊內(nèi)容物即可。

準確稱取適量藥物，以甲醇為溶劑定容，在超聲時間10 min(金蓮花膠囊超聲時間為15min)和超聲溫度25℃的條件下，對樣品進行超聲提取，過濾后得中成藥的甲醇提取液，以每毫升溶劑中所含中成藥質(zhì)量表示濃度，分別得到濃度為0.750mg·mL-1、1.00mg·mL-1和0.500mg·mL-1的金蓮花膠囊、清火片和復(fù)方穿心蓮片樣本的甲醇提取液。

在響應(yīng)時間0.5 s、負高壓700V、掃描速度2400nm·min-1、狹縫寬度5.0/5.0nm、采樣間隔1.0nm的儀器條件下，激發(fā)波長掃描范圍為200～700nm，發(fā)射波長掃描范圍為200～800nm，分別測定不同廠家、同一廠家不同批號金蓮花膠囊、清火片和復(fù)方穿心蓮片樣本甲醇提取液的三維熒光圖譜。應(yīng)用Matlab軟件提取三維熒光圖譜數(shù)據(jù)的特征參數(shù)，結(jié)合聚類分析法，對3種清熱解毒類中成藥三維熒光圖譜的一致性進行考察，采用平均值法分別建立其三維熒光指紋圖譜。

2 結(jié)果與討論

2.1 3種清熱解毒類中成藥的三維熒光圖譜一致性考察

2.1.1 金蓮花膠囊的三維熒光圖譜一致性考察

測定了牙克石市森健、吉林天藥、貴州益康和江西銀濤4個廠家生產(chǎn)的21個批號63個金蓮花膠囊樣本的三維熒光圖譜，采用聚類分析法考察不同廠家、同一廠家不同批號金蓮花膠囊三維熒光圖譜的相似性和差異性。聚類分析結(jié)果如圖1所示。

圖1 63個金蓮花膠囊樣本的聚類分析結(jié)果

由圖1的聚類結(jié)果可知，在相關(guān)系數(shù)為0.988時，牙克石市森健(No.1-18)、吉林天藥(No.19-27)、貴州益康(No.28-51)和江西銀濤(No.52-63)生產(chǎn)的金蓮花膠囊樣本聚為一類，因此4個廠家生產(chǎn)的21個批號63個金蓮花膠囊樣本的三維熒光圖譜具有良好的一致性。

2.1.2 清火片的三維熒光圖譜一致性考察

測定了廣西正堂、江西芙蓉堂、伊春金北和廣西維威4個廠家生產(chǎn)的28個批號84個清火片樣本的三維熒光圖譜，采用聚類分析法考察不同廠家、同一廠家不同批號清火片三維熒光圖譜的相似性和差異性。聚類分析結(jié)果如圖2所示。

由圖2的聚類結(jié)果可知，在相關(guān)系數(shù)為0.999時，廣西正堂(No.1-18)、江西芙蓉堂(No.19-54)、伊春金北(No.55-72)和廣西維威(No.73-84)生產(chǎn)的清火片樣本聚為一類，因此4個廠家生產(chǎn)的28個批號84個清火片的三維熒光圖譜具有良好的一致性。

圖2 84個清火片樣本的聚類分析結(jié)果

2.1.3 復(fù)方穿心蓮片的三維熒光圖譜一致性考察

測定了廣東羅浮山、廣州白云山、廣西禪方和廣東新峰4個廠家生產(chǎn)的47個批號141個復(fù)方穿心蓮片樣本的三維熒光圖譜，采用聚類分析法考察不同廠家、同一廠家不同批號復(fù)方穿心蓮片三維熒光圖譜的相似性和差異性。聚類分析結(jié)果如圖3所示。

圖3 141個復(fù)方穿心蓮片樣本的聚類分析結(jié)果

由圖3的聚類結(jié)果可知，在相關(guān)系數(shù)為0.981時，廣州白云山(No.1-42)、廣東羅浮山(No.43-81)、廣西禪方(No.82-117)和廣東新峰(No.118-141)生產(chǎn)的復(fù)方穿心蓮片樣本聚為一類，因此4個廠家生產(chǎn)的47個批號141個復(fù)方穿心蓮片的三維熒光圖譜具有良好的一致性。

2.2 清熱解毒類中成藥的三維熒光指紋圖譜的建立

根據(jù)聚類分析結(jié)果，每種中成藥的三維熒光圖譜具有良好的一致性，采用平均值法建立其三維熒光指紋圖譜，結(jié)果如圖4所示。

圖4 清熱解毒類中成藥的三維熒光指紋圖譜(步長50)

金蓮花膠囊的熒光峰位置為λex/λem=397/466nm、λex/λem=305/412nm、λex/λem=232/313nm、λex/λem=247/443nm和λex/λem=283/318nm；清火片的熒光峰位置為λex/λem=229/318nm、λex/λem=281/318nm和λex/λem=316/411nm；復(fù)方穿心蓮片的熒光峰位置為λex/λem=308/426nm和λex/λem=405/675 nm。

3 結(jié)論

采用熒光光譜法測定了不同廠家不同批次的3種中成藥的三維熒光圖譜，聚類分析結(jié)果表明，3種清熱解毒類中成藥的三維熒光圖譜均具有良好的一致性，分別建立了3種清熱解毒類中成藥的三維熒光指紋圖譜，不同中成藥的三維熒光指紋圖譜存在明顯差異，可用于中成藥的鑒別。