臭氧對銀耳標(biāo)準(zhǔn)菇房的消毒效果及其安全性研究

鄭峻

（福建省食用菌技術(shù)推廣總站 福州350003）

銀耳（Tremella fuciformisBerk.）又名白木耳，具有滋陰、潤肺、養(yǎng)胃生津的功效，被人們譽為“菌中之冠”。銀耳在我國已有悠久的栽培歷史，寧德市古田縣是銀耳的主產(chǎn)區(qū)，全國90%左右的銀耳來源于寧德市古田縣袋料栽培。2012年古田縣銀耳栽培規(guī)模達3.68億袋，銀耳產(chǎn)量達28萬t，成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶的主要經(jīng)濟來源之一[2-3]。農(nóng)戶栽培由于投入小、條件簡陋，通常是接種間和出菇房經(jīng)過簡單的煙霧消毒后就進行接種使用，造成銀耳在生產(chǎn)過程中易遭受病蟲害的危害[4]，一方面破壞培養(yǎng)基造成壞包，另一方面侵染子實體降低產(chǎn)量和品質(zhì)，給生產(chǎn)帶來極大的損失，已成為困擾廣大菇農(nóng)的一個重要問題[5]。目前銀耳栽培過程受到的危害有病害和蟲害2種，病害包括木霉、鏈孢霉、曲霉、青霉等霉菌，蟲害主要為害螨、蚊蠅和跳蟲，這些病蟲害經(jīng)常同時發(fā)生[6-7]。

針對銀耳生產(chǎn)中病蟲害的危害，消毒殺菌是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)方法是采用化學(xué)消毒劑進行空間消毒，最常用的是采用甲醛-高錳酸鉀、二氯異氰尿酸鈉等熏蒸殺菌，或用敵敵畏和魚藤精等農(nóng)藥噴灑消毒[8-10]，這種化學(xué)消毒方法會強烈刺激使用者的眼睛和呼吸道，嚴(yán)重影響生產(chǎn)者的身體健康，同時會產(chǎn)生部分化學(xué)藥物的殘留，對銀耳造成二次污染，極大的影響了采摘銀耳的品質(zhì)[11-12]。近年來食用菌產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題越來越受到重視，對農(nóng)藥的殘留把控也越來越嚴(yán)格，因此尋找新的空間消毒滅菌方法是銀耳栽培的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。臭氧是一種高效、廣譜的殺菌劑，利用其強氧化性，可以在較短的時間內(nèi)破壞各種細菌、霉菌、原蟲孢體卵囊和其他微生物的生物結(jié)構(gòu)，臭氧的滅殺率與過氧乙酸相當(dāng)，強于甲醛-高錳酸鉀、二氯異氰尿酸鈉等消毒劑，并且其氧化消毒后的產(chǎn)物是氧氣[13-14]，不會造成二次污染，且在有效殺菌濃度范圍內(nèi)幾乎不會對彩鋼板造成腐蝕。本試驗對臭氧在銀耳標(biāo)準(zhǔn)菇房中的殺菌消毒效果和安全性進行了研究，以期對銀耳栽培農(nóng)戶的生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗設(shè)備 超凈工作臺、臭氧機（徐州錦康臭氧設(shè)備有限公司生產(chǎn)的JK-Y50，臭氧產(chǎn)量為50 g/h）。

1.1.2 試驗藥品與培養(yǎng)基配方 LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取粉5 g，NaCl 5 g，瓊脂15 g，水1000 mL。121℃滅菌20 min。

氣霧消毒劑：保菇王，主要成分為二氯異氰尿酸鈉，有效成分為69%。

1.1.3 試驗菇房概況 試驗菇房是銀耳標(biāo)準(zhǔn)菇房，長12 m、寬4.5 m、高4.5 m。

1.1.4 試驗?zāi)攴?試驗于2020年在古田縣渭洋村夢幻食用菌專業(yè)合作社進行。

1.2 試驗方法

1.2.1 臭氧濃度試驗 ①沉降菌試驗。參考《GB/T 16294-2010醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》，在菇房內(nèi)地面上按附圖布置采樣點，將已制備好的LB平板按采樣點布置逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，讓固體培養(yǎng)基表面暴露在空氣中，靜置60 min后蓋上平板封上封口膜，將培養(yǎng)皿放置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d后記錄每個平板上的菌落數(shù)量，計算平均值。②濃度試驗。選擇3個潔凈大小一致的菇房，按照“1.2.1①”的方法進行沉降菌試驗，測量消毒前的菌落數(shù)，分別采用1臺臭氧機、2臺臭氧機和3臺臭氧機消毒1.0 h，靜置2.0 h后，按照“1.2.1①”的方法進行沉降菌試驗，測量消毒后的菌落數(shù)，對比消毒前后菌落數(shù)變化。

附圖 采樣點分布

1.2.2 臭氧消毒時間試驗 隨機選擇4個菇房分別用2臺臭氧機進行消毒，消毒時間設(shè)置為0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h，按“1.2.1①”中方法進行消毒前后沉降菌試驗，測試消毒效果。

1.2.3 生產(chǎn)試驗 隨機選擇3間清洗晾干后的菇房，每間菇房都按“1.2.1①”中的方法測試空間沉降菌，然后用2臺臭氧機消毒1.0 h，再測試空間沉降菌，消毒后將剛滅完的銀耳料棒放進菇房，待菌棒冷卻后再進行臭氧消毒接種，待翻筒上架時統(tǒng)計污染率。以傳統(tǒng)氣霧消毒接種方法作對照，氣霧消毒劑根據(jù)傳統(tǒng)方法使用，生產(chǎn)中每間菇房保菇王用量為1000～1200 g（400 g的3包或500 g的2包）。

1.2.4 安全性試驗 按照“1.2.3”的方法進行消毒后定期觀察菌絲生長情況，測量菌絲生長速度，記錄出菇情況和產(chǎn)量，采菇后檢測六六六、滴滴涕、氯氰菊酯、溴氰菊酯4種農(nóng)藥。

2 結(jié)果和分析

2.1 臭氧濃度試驗結(jié)果

濃度試驗結(jié)果表明（表1），隨著臭氧濃度的升高菌落減少率升高，濃度達到100 g后便不顯著，菌落減少率達到85.6%。

表1 不同臭氧濃度下的消毒效果

2.2 作用時間試驗結(jié)果

作用時間試驗結(jié)果表明（表2），隨著臭氧機工作時間的增加菌落減少率隨之增加，但作用時間在1.0 h、1.5 h和2.0 h情況下沒有顯著差異，菌落減少率在86.6%左右。

表2 不同工作時間下的消毒效果

2.3 生產(chǎn)試驗結(jié)果

生產(chǎn)試驗結(jié)果表明（表3），按試驗方法進行臭氧消毒的效果略優(yōu)于氣霧消毒劑，沉降菌測試菌落減少率達88.9%，高于氣霧消毒劑的72.5%，菌包污染率為2.2%，低于氣霧消毒劑的3.0%。

表3 不同消毒劑生產(chǎn)試驗結(jié)果

2.4 安全性試驗結(jié)果

安全性試驗結(jié)果表明（表4），臭氧消毒和氣霧消毒劑在菌絲生長、出菇情況和產(chǎn)量方面均沒有顯著差異，六六六、滴滴涕、氯氰菊酯、溴氰菊酯這4種農(nóng)藥均未檢測出，且使用臭氧消毒后空氣中沒有刺鼻氣味。

表4 安全性試驗結(jié)果

3 結(jié)論與討論

食用菌生產(chǎn)過程中消毒殺菌是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)方法是采用氣霧消毒劑進行空間消毒，但是氣霧消毒劑有刺鼻氣味，對接種人員有一定傷害，同時氣霧消毒產(chǎn)生的鹽酸、次氯酸等對標(biāo)準(zhǔn)菇房的彩鋼板墻體產(chǎn)生腐蝕。臭氧是一種高效、廣譜、清潔的殺菌劑，其氧化消毒后的產(chǎn)物是氧氣，不會造成二次污染[15]。

本研究表明，在長12 m、寬4.5 m、高4.5 m的銀耳標(biāo)準(zhǔn)菇房內(nèi)采用2臺50 g/h的臭氧機消毒1.0 h，能夠達到和氣霧消毒劑相同的效果，且消毒完成后臭氧降解后空氣清新，無刺鼻氣味，并且對菌絲生長和出菇無影響，無農(nóng)藥殘留，是一種比較清潔的消毒劑。