絲線結扎誘導種植體周圍黏膜炎的實驗研究

蔡榕 王新革 王金 雷家琪 張照欣 李德華

種植術后并發(fā)癥是種植失敗的一個主要原因，分為種植體周圍黏膜炎和種植體周圍炎。種植體周圍黏膜炎的病變局限于黏膜，不伴隨進行性邊緣骨吸收［1］，患病率約為 43%～50%［1－2］。種植體周圍炎的病變突破軟組織封閉，伴隨邊緣骨吸收［3］，患病率約為12%～40%［1］。種植體周圍黏膜炎不治療可能發(fā)展成種植體周圍炎，治療則可能恢復健康［4］。由于種植體周圍炎缺乏有效的治療方法，所以早期診斷、治療種植體周圍黏膜炎，防止其進一步發(fā)展至關重要［5］。

在動物體內(nèi)誘導種植體周圍黏膜炎是研究其防治的基礎，主要方法為菌斑自然堆積法和絲線結扎輔助菌斑堆積法。Martins等［4］發(fā)現(xiàn)菌斑自然堆積6周后比格犬出現(xiàn)種植體周圍黏膜炎，17周后出現(xiàn)種植體周圍炎；Berglundh等［6］通過菌斑堆積3周在比格犬口內(nèi)誘導了種植體周圍黏膜炎，在作者的另一項實驗中，菌斑堆積90 d后種植體周圍黏膜炎狀態(tài)仍然持續(xù)［7］?？梢娋咦匀欢逊e法誘導種植體周圍黏膜炎的時效性不佳，且誘導時間不易控。

Trejo等［8］通過絲線結扎輔助菌斑堆積法在恒河猴口內(nèi)誘導了種植體周圍黏膜炎，作者用絲線在種植體周圍結扎1周后取出，待菌斑自然堆積2周后再用絲線結扎3周，但未說明絲線結扎的位置，若絲線結扎在齦溝內(nèi)，則可能破壞種植體周圍軟組織封閉，引發(fā)異物反應，誘導種植體周圍炎，且多次操作增加了動物麻醉的風險。Schou等［9］通過齦緣絲線結扎3周在食蟹猴口內(nèi)誘導了種植體周圍黏膜炎，但缺乏對結果的全面評估。

本實驗擬采用頸緣絲線結扎輔助菌斑堆積法誘導種植體周圍黏膜炎，并通過口內(nèi)檢查、探診、齦溝液檢測、影像學檢查證明其可靠性，為種植體周圍黏膜炎的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 基本材料

1.1.1 實驗動物 12月齡雄性比格犬3只，體重13 kg左右（成都達碩實驗動物有限公司）。本實驗已通過第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院動物倫理委員會審批。

1.1.2 主要實驗儀器與試劑 速眠新 II（吉林圣達動物藥品有限公司）；戊巴比妥鈉（第四軍醫(yī)大學口腔醫(yī)院動物實驗中心）；復方鹽酸阿替卡因注射液（碧蘭公司，法國）；種植體（TL，LN，3.3 mm×8 mm，江蘇創(chuàng)英醫(yī)療器械有限公司）；愈合帽（1.5 mm，江蘇創(chuàng)英醫(yī)療器械有限公司）；種植機（西諾普公司，瑞士）；0.25 N壓力敏感探針（科爾公司，瑞士）；30號吸潮紙尖（北京達雅鼎醫(yī)療器械有限公司）；3－0絲線（上海金環(huán)醫(yī)療用品股份有限公司）；數(shù)字化牙片機（西諾德有限公司，德國）。

1.2 實驗方法

1.2.1 牙拔除術 比格犬術前8～12 h禁食禁水，于臀大肌注射速眠新 II（0.1 mL/kg）與 2.5%戊巴比妥鈉溶液（0.5 mL/kg）進行麻醉。用1%碘伏進行口內(nèi)消毒，碧蘭麻進行局部浸潤麻醉，微創(chuàng)拔除比格犬下頜第二至四前磨牙，間斷縫合。術后3 d皮下注射安痛定（0.2 mL/kg，1次/d），術后 1周皮下注射青霉素（10 000 U/kg，1次/d）。

1.2.2 種植體植入術 愈合3個月后行種植體植入術，麻醉及用藥同前。翻開黏骨膜瓣，平整骨面，逐級備洞，下頜每側植入3顆種植體，植入扭矩為35 N·cm，種植體的粗糙面上緣與骨面齊平，種植體之間和與牙之間距離7 mm，安裝愈合帽，間斷縫合。術后軟食喂養(yǎng)，種植體和其余牙每周刷3次。

1.2.3 分組 使用SPSS 22.0軟件生成隨機數(shù)組，將每只比格犬的左右側隨機分為健康組（PH）和黏膜炎組（PM）。每組種植體數(shù)為9顆。

1.2.4 絲線結扎 于比格犬臀大肌注射速眠新II（0.03 mL/kg）與 2.5%戊巴比妥鈉溶液（0.2 mL/kg）進行麻醉。黏膜炎組種植體在植入后第8～11周結扎3－0絲線，絲線結扎位置為愈合帽－種植體連接處，位于齦緣上，結扎期間停止種植體周圍衛(wèi)生維護。

1.3 觀察指標

1.3.1 口內(nèi)檢查 檢查每個愈合帽的近中頰面、正中頰面、遠中頰面以及舌面，按下述標準進行記分：

牙齦指數(shù)（GI）：0，牙齦健康；1，牙齦輕度炎癥：牙齦的顏色有輕度改變并輕度水腫；2，牙齦中度炎癥：牙齦色紅，水腫光亮；3，牙齦重度炎癥：牙齦明顯紅腫或有潰瘍，并有自動出血傾向。

菌斑指數(shù)（PI）：0，齦緣區(qū)無菌斑；1，齦緣區(qū)愈合帽表面有薄的菌斑，但視診不可見，若用探針尖刮可見牙菌斑；2，可見中等量菌斑；3，大量軟垢；每顆種植體的記分為記分之和除以4，每組記分為種植體記分之和除以數(shù)目。

取出黏膜炎組的絲線，所有種植體更換新愈合帽，每顆種植體探診頰舌側兩個位點，記錄探診出血指數(shù)（BOP）、探診深度（PD）。

1.3.2 齦溝液檢測 剪去吸潮紙尖尖端5 mm，6根一組置于Ep管中，電子天平稱重。棉卷隔濕，氣槍輕吹種植體及周圍牙齦，2 min后將吸潮紙尖插入種植體頰、舌側的近中、正中、遠中齦緣下1 mm，30 s后取出，若紙尖沾有血液和唾液，則棄去該管，間隔2 min重復取樣，然后將吸潮紙尖放回原Ep管稱重，按1 g/mL換算成齦溝液體積。剪除吸潮紙尖干燥段，保留濕潤段，加入200μL PBS緩沖液，混勻5 min，離心5 min（4℃、3 000 r/min），置于 －80℃冰箱保存。檢測前將齦溝液標本恢復至室溫，混勻2 min，用酶聯(lián)免疫反應（ELISA）測定 IL-1β、IL-6、TNF-α含量。

1.3.3 影像學檢查 兩組在第 8周與11周拍攝X線片，以種植體的直徑為參照，測量種植體近遠中兩側骨結合頂點（BCI）到種植體肩臺（IS）處的距離。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進行獨立樣本t檢驗，結果用±s表示，P＜0.05為具有統(tǒng)計學差異。

2 結 果

實驗動物健康，種植體骨結合良好，未出現(xiàn)松動、脫落。

2.1 口內(nèi)檢查

健康組愈合帽表面無明顯軟垢，種植體周圍牙齦色澤、質地正常；黏膜炎組9個愈合帽在絲線結扎3周后表面均覆蓋大量軟垢、菌斑，牙齦出現(xiàn)紅腫（圖1），且 GI、PI明顯上升（P＜0.001）（表 1）。

圖1 口內(nèi)觀察Fig 1 Intraoral observation

黏膜炎組種植體在絲線結扎3周后BOP顯著高于健康組（P＜0.001），2組PD無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）（表 1）。

表1 口內(nèi)檢查結果Tab1 Intraoral examination results

2.2 齦溝液檢測

2組種植體在第11周時齦溝液重量和IL-1β、IL-6、TNF-α含量存在顯著差異（P＜0.05）（表 2）。

表2 齦溝液量及其中炎癥因子含量Tab 2 Volume of gingival fluid and inflammatory factor content

2.3 影像學檢查

2組在第8與11周時IS-BCI的長度無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），即邊緣骨水平穩(wěn)定（圖 2）。

圖2 影像學檢查Fig 2 Radiographic examination

3 討 論

3.1 實驗動物以及種植體植入術要點

表3 影像學檢查結果 （mm）Tab 3 Radiographic examination results （mm）

研究種植體周圍黏膜炎的動物包括犬、靈長類動物、小型豬。犬具有操作方便、易于維護衛(wèi)生的優(yōu)點，且骨骼微觀特點與人類相近，拔牙創(chuàng)愈合周期、骨愈合周期與人類相似，因此應用最為廣泛［10］。靈長類動物下頜骨的解剖學特征要求植入減徑種植體，且動物購買和飼養(yǎng)價格昂貴，在種植體周圍黏膜炎研究中很少使用［10］。小型豬的骨愈合周期等還需要更多的研究［11］。因此本實驗選用比格犬作為實驗動物。

比格犬下頜第一前磨牙位于尖牙牙根上方，且距離頦孔較近，因此通常在第二前磨牙至第一磨牙區(qū)域植入種植體。種植體直徑宜選“窄”（3.0～3.75 mm）或“超窄”（＜3.0 mm），種植體長度宜選“短”（6～10 mm）或“超短”（≤6 mm）［12］。

比格犬邊緣骨水平在種植體植入術后3～5周穩(wěn)定［13］，骨結合率在第4周穩(wěn)定［14］，結合上皮寬度在第6周穩(wěn)定，軟組織屏障在第6～8周成熟［15］，因此本實驗的絲線結扎起始時間為種植體植入術后第8周。

比格犬的牙齦厚度約（1.723±0.281）mm，齦溝深度約1 mm［16］，使用軟組織水平種植體能排除二期手術對黏膜的影響，1.8 mm穿黏膜高度也使愈合帽－種植體界面結扎的絲線位于齦緣，不進入齦溝內(nèi)，排除了絲線對軟組織封閉的影響。

3.2 誘導種植體周圍黏膜炎的實驗結果

黏膜炎組種植體周圍組織均出現(xiàn)炎癥表現(xiàn)，牙齦指數(shù)、菌斑指數(shù)、探診出血指數(shù)、齦溝液體積和IL-1β、IL-6、TNF-α含量顯著高于健康組，兩組探診深度無統(tǒng)計學差異，兩組邊緣骨水平均穩(wěn)定。上述結果表明齦緣絲線結扎3周可以誘導比格犬種植體周圍黏膜炎。

4 結 論

本實驗改良了絲線結扎誘導比格犬種植體周圍黏膜炎的方法。結果表明，齦緣絲線結扎3周可以誘導比格犬種植體周圍黏膜炎，為種植體周圍黏膜炎的研究提供了參考，而結扎時間及材料對炎癥的影響還需進一步研究。