G試驗(yàn)聯(lián)合GM試驗(yàn)在惡性血液病侵襲性真菌感染的診斷價值

岳婷婷

（沭陽銘和醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 宿遷 223600）

0 引言

侵襲性真菌感染（IFI）指真菌侵入人體血液或器官組織所引起的感染性疾病，是惡性血液病患者常見的感染類型。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示，患者確診與臨床診斷IFI總發(fā)生率約為1.5%～2.5%?；罱M織標(biāo)本鏡檢與病原學(xué)培養(yǎng)是臨床診斷IFI金標(biāo)準(zhǔn)，不過取樣多為侵入性操作，對于惡性血液病患者而言不易耐受，加之培養(yǎng)周期長，常導(dǎo)致治療時機(jī)延誤[1]。因此，有必要探尋一種敏感、高效的IFI診斷方法。（1，3）-β-D-葡聚糖檢測（G試驗(yàn)）與半乳甘露聚糖檢測（GM試驗(yàn)）是臨床診斷真菌感染常用實(shí)驗(yàn)室方法，文章現(xiàn)擇取我院近年收治惡性血液病患者，探究其聯(lián)合診斷患者IFI的臨床價值，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。從2018年2月至2020年3月我院收治惡性血液病患者中擇取149例高危/疑似IFI的患者為研究對象?；颊咧?，男82例，女67例，年齡為7～83歲，平均37歲。疾病種類分布：急性髓性白血病46例，淋巴細(xì)胞系腫瘤31例，骨髓增殖性腫瘤和（或）骨髓增生異常綜合征27例，何杰金氏淋巴瘤19例，成熟B細(xì)胞腫瘤13例，成熟T/NK細(xì)胞腫瘤8例，其他5例。

1.2 納入與排除。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理組織學(xué)檢查證實(shí)為惡性血液病，診斷符合WHO關(guān)于惡性血液病的疾病分類（2008年），疾病種類不限；②臨床評估證實(shí)患者存在IFI危險因素或疑似已經(jīng)發(fā)生IFI，評估參照《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則》（第五次修訂版）；③同期接受：G試與GM試驗(yàn)，臨床資料齊全；接受活組織標(biāo)本鏡檢或病原學(xué)培養(yǎng)，獲得明確真菌感染或非感染病理診斷；患者簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①疾病診斷與病情評估不符合上述標(biāo)準(zhǔn)；②合并其他惡性腫瘤；③近期抗菌藥物預(yù)防及治療史；④近期免疫抑制劑和糖皮質(zhì)激素用藥史；⑤合并免疫缺陷；⑥IFI感染史。

1.3 方法。G試驗(yàn)：采集患者血樣3 mL，上機(jī)3000 r·min-1速率離心5 min，分離血漿，以購自湛江博康海洋生物有限公司的真菌（1，3）-β-D-葡聚糖檢測試劑盒進(jìn)行檢測，采用終點(diǎn)顯色基質(zhì)法。GM試驗(yàn)：樣本同法上機(jī)離心，提取血清，以丹娜（天津）生物科技有限公司生產(chǎn)的半乳甘露聚糖檢測試劑盒進(jìn)行檢測，采用酶聯(lián)免疫吸附法法。兩項(xiàng)檢測均嚴(yán)格遵照試劑說明書操作，全程質(zhì)量控制，檢測使用LKM-02-32型動態(tài)試管檢測儀。

1.4 觀察指標(biāo)與評價標(biāo)準(zhǔn)。G試驗(yàn)以（1，3）-β-D-葡聚糖≥10 pg/mL為陽性標(biāo)準(zhǔn)，GM試驗(yàn)以半乳甘露聚糖≥0.85 μg/L為陽性標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)兩項(xiàng)試驗(yàn)陽性檢出率。以活組織標(biāo)本鏡檢或病原學(xué)培養(yǎng)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評價兩項(xiàng)試驗(yàn)單一診斷及聯(lián)合診斷惡性血液病IFI的靈敏度與特異度。聯(lián)合診斷判定標(biāo)準(zhǔn)：兩項(xiàng)試驗(yàn)中至少有一項(xiàng)為陽性結(jié)果——陽性；兩項(xiàng)試驗(yàn)同為陰性結(jié)果——陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以SPSS 21.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料±標(biāo)準(zhǔn)差表示，t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

G試驗(yàn)診斷陽性39例，陰性110例。GM試驗(yàn)診斷陽性39例，陰性110例，經(jīng)過活組織標(biāo)本鏡檢或病原學(xué)培養(yǎng)，149例患者中確診IFI（陽性）37例，非IFI（陰性）112例。G試驗(yàn)陽性39例，陰性110例。以此為金標(biāo)準(zhǔn)，G試驗(yàn)診斷IFI假陰性4例，假陽性6例，GM試驗(yàn)診斷IFI假陰性5例，假陽性7例，G試驗(yàn)+GM試驗(yàn)診斷IFI假陰性1例，假陽性4例。經(jīng)計(jì)算，G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)與兩項(xiàng)試驗(yàn)聯(lián)合診斷IFI結(jié)果見表1。統(tǒng)計(jì)顯示，以G試驗(yàn)+GM試驗(yàn)診斷IFM的靈敏度、特異度、總符合率、陽性預(yù)測值與陰性預(yù)測值均高于G試驗(yàn)與GM實(shí)驗(yàn)單一診斷。

表1 三種診斷方法的靈敏度與特異度比較

3 討論

近年，非培養(yǎng)方法診斷IFI受到廣泛關(guān)注和重視，建立IFI實(shí)驗(yàn)室診斷依據(jù)也成為臨床研究的熱點(diǎn)。G試驗(yàn)是非培養(yǎng)診斷IFI常用方法之一，其原理是對（1，3）-β-D-葡聚糖成分進(jìn)行檢測。該物質(zhì)廣泛存在于真菌壁中，是真菌細(xì)胞壁上的特有成分，尤其在IFI常見致病菌念珠菌與曲霉菌的細(xì)胞壁中含量多，占比超過50%[2]。研究發(fā)現(xiàn)，淺部感染狀態(tài)下，真菌（1，3）-β-D-葡聚糖成分釋放較少，體液增高不明顯，而當(dāng)真菌進(jìn)入深部組織后，免疫細(xì)胞被明顯激活，大量吞噬細(xì)胞吞噬和消化真菌，通過補(bǔ)體溶解等免疫學(xué)作用，會不斷釋放（1，3）-β-D-葡聚糖，造成其血水平明顯增高[3]。因此，G試驗(yàn)被視為是診斷深部真菌感染敏感、可行的方法。除適用于念珠菌和曲霉菌外，G試驗(yàn)也適用于檢測毛孢子菌、卡式肺孢子菌、鐮刀菌等，但不適用于隱球菌和接合菌的檢測。不過值得注意的是，纖維素膜血透、靜脈輸注免疫球蛋白與凝血因子、標(biāo)本污染、標(biāo)本暴露于紗布或含有葡聚糖的材料中、使用抗糖類抗癌藥、化療造成黏膜損傷等因素，可能導(dǎo)致（1，3）-β-D-葡聚糖檢測出現(xiàn)漏誤診。

GM試驗(yàn)是通過檢測半乳甘露聚糖診斷IFI的非培養(yǎng)診斷技術(shù)，半乳甘露聚糖是曲霉菌屬真菌細(xì)胞壁的特異性多糖，會隨著菌絲的生長從頂端釋放，是研究發(fā)現(xiàn)的曲霉菌屬真菌感染最早釋放的抗原[4]。通過免疫學(xué)方法測定患者血清中的半乳甘露聚糖抗原，對于早期發(fā)現(xiàn)和診斷IFI具有重要臨床價值。不過，對于真菌感染程度輕的患者，近期β-酰胺類抗生素治療的患者，以及服用過含葡聚糖成分的藥物者，GM試驗(yàn)可能出現(xiàn)漏誤診，另外技術(shù)誤差也可能導(dǎo)致GM試驗(yàn)出現(xiàn)假陽性問題[5]。對此，本研究以G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)聯(lián)合診斷IFI，兩者技術(shù)原理不同，對菌種的敏感傾向所不同，聯(lián)合使用優(yōu)勢互補(bǔ)，可以進(jìn)一步提高對IFI的診斷價值。本研究結(jié)果示，兩者聯(lián)合診斷IFI靈敏度97.30%、特異度96.43%，總符合率96.64%，陽性預(yù)測值90.0%，陰性預(yù)測值99.08%，各項(xiàng)指標(biāo)均高于G實(shí)驗(yàn)與GM實(shí)驗(yàn)單一檢測各結(jié)果，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)論相符[6]，肯定了聯(lián)合診斷的價值與優(yōu)勢。

綜上所述，G試驗(yàn)與GM實(shí)驗(yàn)均可以為臨床診斷惡性血液病IFI提供有價值的實(shí)驗(yàn)室參考，兩者聯(lián)合使用，可進(jìn)一步提高診斷準(zhǔn)確率，減少漏誤診，從而更好地指導(dǎo)合理用藥，促進(jìn)IFI科學(xué)治療，值得臨床推廣。