艾滋病抗病毒治療對HIV-1 感染者腸道微生態(tài)療效探究

李戰(zhàn)英

（廣西平果市人民院，廣西 平果 531400）

0 引言

HIV病毒會對人體免疫能力造成破壞，使免疫系統(tǒng)喪失抵抗力。尤其是CD4作為HIV病毒主要攻擊的T淋巴細胞，一旦發(fā)生HIV感染后則會出現(xiàn)大量消耗的情況，促使淋巴組織結構發(fā)生改變以及腸道黏膜屏障功能異常，為腸道細菌產物的轉移創(chuàng)造一定條件，最終導致腸道微生態(tài)失調與全身炎癥[1-2]。聯(lián)合抗反轉錄病毒治療法（cART）雖然可對HIV的復制發(fā)揮抑制作用，降低患者死亡率，但經過長期觀察發(fā)現(xiàn)，患者經cART治療后慢性免疫激活、高炎癥狀態(tài)均未得到改善，可能是腸道菌群失調造成的結果。基于此，本文就艾滋病抗病毒治療對HIV-1感染者腸道微生態(tài)的影響進行研究，總結如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取2019年8月至2021年8月廣西平果市人民院診治的208例HIV感染患者作為研究對象。將患者是否接受聯(lián)合抗反轉錄病毒（cART）治療依據(jù)進行分組，將187例接受cART治療的患者納入cART治療組，余下21例未接受cART治療的患者納入cART未治療組。cART治療組中，男100例，女87例；年齡23～48歲，平均（35.62±3.27）歲：體重：45～65 kg，平均（51.14±2.16）kg。cART未治療組中，男13例，女8例；年齡24～49歲，平均（35.76±3.14）歲；體重：45～65 kg，平均（51.29±2.30）kg。兩組一般資料無統(tǒng)計學意義存在（P＞0.05），本次研究已獲得醫(yī)院倫理委員會批準。納入標準：①患者符合《中國艾滋病診療指南（2018版）》[3]制定的相關診斷標準；②患者知情且同意加入研究。排除標準：①合并消化系統(tǒng)疾病者；②合并良性或惡性腫瘤者；③經手術切除腸道者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑：應用儀器包括常溫離心機、冷凍離心機、流式細胞分析儀、PCR儀、電泳儀、熒光定量系統(tǒng)、白細胞分化原CD3/CD4/CD45檢測試劑盒等。

1.2.2 CD4計數(shù)：應用EDTA-K2抗凝血真空管對患者靜脈血進行采集、混勻后保存；依次將熒光抗體、50 μL EDTA-K2抗凝血加入塑料試管內混勻，放置于室溫暗處15 min，通過TQ-PREP儀做溶血與固定處理，最后應用流式細胞儀計算CD4細胞。

1.2.3 腸道微生物DNA擴增與測序：在糞便DNA保存管內留取1管患者糞便，放置于室溫下3 d后保存于-70℃冰箱中；應用刮刀將200 mg糞便刮取后保存于2 mL離心管內，在E.Z.N.A.?Stool DNA Kit說明書指導下對DNA進行提?。惶崛〗Y束后，首先通過瓊脂糖凝膠電泳對DNA提取質量做檢測處理，檢測合格即可擴增；應用引物擴增16S rRNA可變區(qū)（V3+V4），擴增技術為PCR法，通過2%瓊脂糖凝膠電泳處理擴增產物，并回收目標片段；通過熒光定量系統(tǒng)在文庫上定量純化后的PCR產物，處理結束后測序。

1.2.4 生物信息學分析：在生物信息學分析過程中應用Flash1.2.8軟件進行，首先設定序列相似性＞97%干凈數(shù)據(jù)為一個操作分類單元（OTU），同時選擇最佳聚類中心序列視為該OTU的代表序列，再通過blast做序列比對處理；將OTU代表序列同時比對核糖體數(shù)據(jù)庫（RDP）、NCBI-16S數(shù)據(jù)庫，為各代表性序列進行物種注釋。應用QIIME18.0軟件對α多樣性進行分析，其中包括Observed sPecies、Chao1、Shannon、SimPson 和Goods coverage。

1.3 統(tǒng)計學分析。處理工具為SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計量數(shù)據(jù)（）比較行t檢驗，計數(shù)數(shù)據(jù)（%）比較行χ2檢驗。比較差異有統(tǒng)計學意義以P＜0.05表示。

2 結果

2.1 對比HIV-1感染患者OTU數(shù)。cART治療組、cART未治療組患者OTU數(shù)M（QR）各為158（142.00）、230（215.00），對比發(fā)現(xiàn)差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；cART組187例患者中，CD4細胞計數(shù)＜200個/mm3的患者共有103例，OTU數(shù)為128.54（93.00）；CD4細胞計數(shù)≥200個/mm3的患者共有84例，OTU數(shù)為198.00（100.00），對比發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

2.2 對比cART治療組、cART未治療組α多樣性指數(shù)。cART治療組SimPson指數(shù)低于cART未治療組（P＜0.05）。見表1。

表1 比較cART治療組、cART未治療組α多樣性指數(shù)[M（QR）]

2.3 對比cART治療組患者α多樣性指數(shù)。CD4細胞計數(shù)≥200個/mm3組Observed sPecies 與Chao1指數(shù)均高于CD4細胞計數(shù)＜200個/mm3組（P＜0.05）。見表2。

表2 比較cART治療組患者α多樣性指數(shù)[M（QR）]

2.4 對比cART治療組、cART未治療組腸道微生物主要門與屬構成情況。在變形菌門、藍細菌、埃希菌屬、鏈球菌屬、羅氏菌屬比較上，cART治療組與cART未治療組存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在其他門、屬水平優(yōu)勢物種構成比較上，兩組不存在統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表3。

表3 比較HIV-1感染患者腸道微生物主要門與屬構成情況[M（Qs），%]

2.5 對比cART治療組腸道微生物主要門與屬構成情況。在藍細菌構成比較上，CD4細胞計數(shù)＜200個/mm3組與CD4細胞計數(shù)≥200個/mm3存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 比較cART治療組腸道微生物主要門與屬構成情況[M（Qs），%]

3 討論

HIV-1感染患者因為腸道菌群失調，經cART治療處于慢性免疫激活及炎癥狀態(tài)中，如研究結果顯示：CD4細胞計數(shù)≥200個/mm3組Observed sPecies 與Chao1指數(shù)均高于CD4細胞計數(shù)＜200個/mm3組患者（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。表明若HIV-1感染患者CD4水平越低，其接受cART治療后腸道通透性發(fā)生改變的可能性則越大，并且易加重微生物移位現(xiàn)象[4]。α多樣性指數(shù)是研究與比較群落多樣性、生態(tài)多樣性的手段，其中Observed sPecies 和 Chao1 指數(shù)具有評估物種總數(shù)的作用，兩項指數(shù)與樣本所含物種數(shù)量呈正比，而SimPson 和 Shannon 指數(shù)則是物種豐富度、均勻度的綜合體現(xiàn)[5-6]。研究結果顯示：cART治療組SimPson指數(shù)低于cART未治療（P＜0.05），說明HIV-1感染患者經cART治療后微生物群組組成的變化受到限制，且腸道生態(tài)失調程度加重，可能是HIV病毒復制、免疫機制重建與cART治療藥物作用導致[7-8]。本研究中，cART治療組與cART未治療組的變形菌門、藍細菌、埃希菌屬、鏈球菌屬、羅氏菌屬存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。CD4細胞計數(shù)＜200個/mm3組藍細菌構成比與CD4細胞計數(shù)≥200個/mm3組存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。分析可知，患者行cART治療后厚壁菌門屬減少，如鏈球菌屬。同時，厚壁菌門中還存在著產生短鏈脂肪酸丁酸鹽的物種，酸丁鹽具有調節(jié)腸內穩(wěn)態(tài)的作用，不僅可為上皮細胞提供能量，而且又能對腸道免疫細胞反應信號分子進行調節(jié)，表明cART治療會影響HIV-1感染者的腸道穩(wěn)態(tài)，引起胃腸道癥狀[9]。

綜上所述，cART治療會使HIV-1患者治療后腸道微生態(tài)紊亂，且不同CD4細胞水平的HIV-1感染患者腸道微生物會發(fā)生動態(tài)變化。