干擾素釋放試驗(yàn)聯(lián)合CFP10 抗原檢測診斷結(jié)核性胸腔積液對靈敏度、特異性及準(zhǔn)確性的影響

李合林，周璟

（中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明），廣東 深圳 518106）

0 引言

胸腔積液是多種疾病的共同臨床表現(xiàn)，其中以滲出性液多見，病因包括胸膜炎癥、胸膜腫瘤、膈下炎癥和結(jié)締組織病等。臨床上以結(jié)核性和腫瘤性胸腔積液的診斷和鑒別診斷尤為重要，兩者一旦誤診將會帶來嚴(yán)重的后果[1]。結(jié)核性胸腔積液的臨床診斷一直是一個(gè)難題，因在痰液和胸水中難以找到抗酸桿菌，胸腔積液中結(jié)核分枝桿菌涂片和培養(yǎng)的陽性率僅為1.7%～24.5%，而采用胸膜活檢則陽性率也很低，也容易造成漏診和誤診。目前結(jié)核性胸腔積液的診斷方法主要包括胸腔積液生化檢查、結(jié)核菌素皮試、胸腔積液細(xì)菌學(xué)檢查、組織病理活檢，影像學(xué)檢查以及臨床特征表現(xiàn)等。但上述這些檢查方法由于其特異性和敏感性均較低，都無法滿足臨床需要，因此需尋找更為有效的檢測方式[2]。本文主要分析干擾素釋放試驗(yàn)聯(lián)合CFP10抗原檢測診斷結(jié)核性胸腔積液對靈敏度、特異性及準(zhǔn)確性的影響，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取2020年6月至2021年6月收治的胸腔積液患者60例，根據(jù)最終是否診斷結(jié)核性分為兩組：分為結(jié)核性胸腔積液組（n=30）和非結(jié)核性胸腔積液組（n=30）。其中結(jié)核性胸腔積液組，男16例，女14例，年齡28～75歲，平均（43.84±8.64）歲，病程8～10周，平均（9.23±0.25）周；非結(jié)核性胸腔積液組，男15例，女15例，年齡29～75歲，平均（43.65±8.57）歲，病程8～11周，平均（9.33±0.36）周。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對兩組患者一般資料進(jìn)行分析后顯示，其年齡、性別、病程等差異對本次研究結(jié)果無影響，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①本次研究所選患者均自愿參與本研究，對本次研究完全知情并簽署知情同意書；②本次研究所有患者均符合胸腔積液診斷標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)臨床檢查確診；③本次研究所有患者均為神志清醒、無溝通障礙、具有自主行為能力的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除臨床資料不完整的患者；②排除不愿意參與本次研究的患者；③排除患有精神類疾病、溝通障礙、無自主行為能力的患者。

1.2 方法[3]。給予結(jié)核性胸腔積液組和非結(jié)核性胸腔積液組患者干擾素釋放試驗(yàn)和CFP10抗原檢測，具體方法如下：

1.2.1 樣本采集：所有患者抽取空腹外周靜脈血20 mL，對患者實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)胸膜穿刺術(shù)，采集胸腔積液100 mL，將離心獲得的血清樣本、血單個(gè)核細(xì)胞樣本和胸腔積液PEMC樣本置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆茫? h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.2.2 干擾素釋放試驗(yàn)：采用結(jié)核感染T細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)進(jìn)行檢測：將血清、血單個(gè)核細(xì)胞樣本及胸腔積液PEMC樣本采用0.9%氯化鈉溶液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為2.0×10/mL，使用Oxford Immunotec公司的TSPOT.TB試劑盒于4 h內(nèi)完成檢測。

1.2.3 CFP10抗原檢測：采用雙抗體夾心法，將10Oul標(biāo)準(zhǔn)品或胸腔積液標(biāo)本加入包被了CFP10蛋白單克隆抗體的微孔中，20℃振蕩孵育1 h，洗滌3次后，加入用分析緩沖液進(jìn)行1∶100稀釋的Eu3+-抗CFP10蛋白單克隆抗體100μL，20℃振蕩孵育1 h，洗滌5次。滴入增強(qiáng)液100ul，振蕩10 min，于熒光檢測儀（1235 Auto DELFIA，美國Perkin Elmer公司）上測定熒光值，最后依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中CFP10蛋白的含量。

1.3 觀察指標(biāo)。本研究需收集兩組患者檢測結(jié)果，判斷干擾素釋放試驗(yàn)和CFP10抗原檢測的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確性，并且以細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，判斷這兩種檢測方法的準(zhǔn)確性高低。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。使用SPSS 20.0軟件對本次研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，使用χ2和%表示計(jì)數(shù)資料，P＜0.05表示數(shù)據(jù)對比差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

干擾素釋放試驗(yàn)聯(lián)合CFP10抗原檢測的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度。經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)，干擾素釋放試驗(yàn)和CFP10抗原檢測在結(jié)核性胸腔積液組患者中的檢測靈敏度、特異性均高于非結(jié)核性胸腔積液組患者。干擾素釋放試驗(yàn)在診斷結(jié)核性胸腔積液中靈敏度為96.5%，特異性為87.5%，準(zhǔn)確性為93.4%，陽性預(yù)測值為95.6%，陰性預(yù)測值為87.5%；CFP10抗原檢測的靈敏度與特異度分別為96.23%與 94.00%，并且CFP10抗原檢測的準(zhǔn)確性為95.51%。見表1。

表1 干擾素釋放試驗(yàn)聯(lián)合CFP10抗原檢測的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度（n，%）

3 討論

到目前為止，結(jié)核病仍是全球前10位死因之一，自2007年以來一直位居單一傳染性疾病死因之首[4]。近年來，我國結(jié)核病防治工作取得了很大進(jìn)步，肺結(jié)核疫情呈逐年下降趨勢，發(fā)病人數(shù)位居世界第三位，但是我國結(jié)核病防治工作還面臨著結(jié)核病流動性傳播、耐多藥結(jié)核病和結(jié)核菌、艾滋病病毒雙重感染等新的挑戰(zhàn)。結(jié)核性胸腔積液是最常見的肺外結(jié)核，在我國發(fā)病率極高，胸腔積液作為臨床常見的病癥，比較嚴(yán)重的類型有結(jié)核性與惡性滲出性胸腔積液。目前胸腔積液結(jié)核桿菌培養(yǎng)或涂片使結(jié)核性胸腔積液的診斷與鑒別診斷比較困難，檢測抗酸桿菌的陽性率偏低[5]。胸腔積液尤其是滲出性胸腔積液是臨床診斷上的一個(gè)難點(diǎn)，在臨床上不少患者是經(jīng)過抗結(jié)核治療后才明確診斷。因此，尋找一種有效的試驗(yàn)檢測結(jié)核性胸腔積液顯得尤為重要。

細(xì)菌學(xué)檢查陽性是結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于胸腔積液中含菌量少，對于細(xì)菌學(xué)陰性、臨床無結(jié)核毒血癥狀表現(xiàn)的患者診斷尤為困難，其特異性和敏感性均較低，都無法滿足臨床需要多數(shù)情況只能依賴結(jié)核診斷性治療來明確診斷。由于現(xiàn)階段大多數(shù)診斷方式對于結(jié)核性胸腔積液的診斷都較為困難，因此需尋求更為有效的診斷方式。近年來，γ－干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是結(jié)核病診斷方面的重大突破。干擾素釋放試驗(yàn)中的IFN-γ，作為一種分泌蛋白，基因位于人體的第12條染色體上，IFN-γ主要是由抗原和有絲分裂原誘發(fā)而來，有研究表明結(jié)核性胸腔積液內(nèi)有結(jié)核菌侵入胸腔，引起T淋巴細(xì)胞大量增殖活化，產(chǎn)生大量的IFN-γ細(xì)胞促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬結(jié)核菌，可作為診斷結(jié)核性胸腔積液的參考指標(biāo)[6]。同時(shí)，CFP10是一種特異性培養(yǎng)濾液蛋白，具有良好的抗原性，可作為特異性抗原誘導(dǎo)結(jié)核菌素試驗(yàn)（PPD）皮膚試驗(yàn)陽性者的良好指示劑[7]。在本次研究中聯(lián)合使用干擾素釋放試驗(yàn)和CFP10抗原檢測發(fā)現(xiàn)，這兩種方法在結(jié)核性胸腔積液的診斷中靈敏度、特異性及準(zhǔn)確度均較高。

綜上所述，干擾素釋放試驗(yàn)聯(lián)合CFP10抗原檢測診斷結(jié)核性胸腔積液具有較高的靈敏度、特異性及準(zhǔn)確性，可為臨床治療結(jié)核性胸腔積液提供科學(xué)可靠的參考依據(jù)。