XPertMTB/RIF 檢測技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用

文靜

（廣西河池市南丹縣人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣西 河池 547200）

0 引言

結(jié)核病是結(jié)合分期桿菌引起的傳染病，直接危害了機(jī)體多器官系統(tǒng)，我國2020年結(jié)核病流行學(xué)調(diào)查中，全國活動(dòng)性肺結(jié)核患者高達(dá)499萬例，每年新發(fā)結(jié)核患者約100萬例[1]。隨著臨床醫(yī)學(xué)不斷發(fā)展，肺結(jié)核致死率已經(jīng)較低，尤其是抗肺結(jié)核藥物的出現(xiàn)，為肺結(jié)核的治療提供了諸多便利，但由于化療方案不合理，服藥不正規(guī)及單一用藥等，使結(jié)核桿菌產(chǎn)生耐藥性，不易被治愈[2-3]。傳統(tǒng)方法中的痰涂片找抗酸桿菌陽性率不高及金標(biāo)準(zhǔn)的痰結(jié)核菌培養(yǎng)時(shí)間過長均難以實(shí)現(xiàn)對結(jié)核病的做出早期診斷及及時(shí)有效的治療，GeneXPertMTB/RIF作為一種實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)以診斷自動(dòng)化，操作簡單化，檢測周期短的優(yōu)勢成為結(jié)核病早期診斷有利補(bǔ)充[4]。本文把該項(xiàng)檢測技術(shù)納入研究，選擇對象為我院收治的76例臨床確診的肺結(jié)核患者，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取廣西河池市南丹縣人民醫(yī)院2020年10月至2021年5月收治的76例肺結(jié)核患者納入研究，其中男61例，女15例，年齡15～82歲；平均（45.65±7.58）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為首次確診患者，未進(jìn)行抗結(jié)核治療；②知曉本文相關(guān)研究；③同時(shí)進(jìn)行痰涂片、痰培養(yǎng)及GeneXPertMTB/RIF檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重器官功能性障礙；②呼吸道中未留存足夠標(biāo)本患者；③合并其他傳染疾病者。

1.2 方法。充分漱口后，用力深咳收集下呼吸道痰液及時(shí)送檢，一式三份，分別進(jìn)行金胺O染色法、羅氏培養(yǎng)、XPertMTB/RIF檢測。金胺O染色法：按照抗酸染色液（熒光金胺O法）試劑盒說明進(jìn)行專業(yè)操作。鏡下查見呈明亮的橘黃色或黃綠色細(xì)長略帶彎曲的桿菌即為抗酸分枝桿菌陽性，否則即為抗酸分枝桿菌陰性。

羅氏培養(yǎng)：按照羅氏培養(yǎng)管試劑盒說明進(jìn)行專業(yè)操作。接種后第3 d、第7 d各觀察，典型的分歧桿菌菌落粗糙且為淡黃色，菜花樣干燥，如有菌落生長需要實(shí)施涂片鏡檢以鑒別污染，以及速生長分枝桿菌。每周觀察一次，并及時(shí)記錄，至第八周末，無菌生長，培養(yǎng)陰性。

XPertMTB/RIF：采用美國CePheid公司生產(chǎn)的GeneXPert儀器及XPertMTB/RIF檢測試劑盒，檢測痰中MTB及利福平耐藥性。將痰標(biāo)本與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液常規(guī)按1∶2混合，震蕩均勻，常溫靜置15 min，使痰標(biāo)本充分液化。再將處理后的痰標(biāo)本轉(zhuǎn)移至XPertMTB/RIF檢測試劑盒中，置GeneXPert 系統(tǒng)全自動(dòng)檢測，在軟件窗口直接明確結(jié)果。

質(zhì)量控制：嚴(yán)格做好室內(nèi)質(zhì)量控制，積極參加廣西檢測能力驗(yàn)證的室間質(zhì)評。

1.3 觀察指標(biāo)。記錄三種檢測方式下，患者陽性率情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。本研究采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對本文數(shù)據(jù)計(jì)算，計(jì)量資料用表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分比表達(dá)，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

三種檢測方式陽性率。XPertMTB/RIF檢測陽性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、羅氏培養(yǎng)53.95%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三種檢測方法檢測結(jié)果[n（%）]

3 討論

結(jié)核俗稱“癆病”，由于機(jī)體感染結(jié)核桿菌所致，是臨床上常見的一種慢性的傳染性疾病，不同季節(jié)均會(huì)發(fā)病?？捎绊懭矶鄠€(gè)器官（如腦膜、腹膜、腸、皮膚、骨骼等），尤其以肺結(jié)核發(fā)生率最高，主要表現(xiàn)為低熱、乏力、消瘦等全身，系統(tǒng)癥狀主要在于咳痰、咯血、咳嗽、胸痛等，主要傳播途徑是呼吸道，傳染源為傳染性肺結(jié)核，具有較高的死亡率，成為人類重要致死傳染病[5]。

我國結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)核菌，是按規(guī)定進(jìn)行基本的檢查方式，也就是標(biāo)本涂片染色檢查、藥敏試驗(yàn)等。常規(guī)染色方法需要延長染色時(shí)間與加熱，使得其著色；而金胺0熒光法屬于熒光染色液，無需加熱，相對較抗酸熱染液更加安全。其染色原理在室溫環(huán)境下染色復(fù)染，紫外光源熒光顯微鏡檢查，而其他細(xì)菌與背景物質(zhì)一般為暗黃色，此時(shí)可選擇低倍鏡檢。而標(biāo)本涂片抗酸染色操作較為簡單，價(jià)格較低，已經(jīng)在臨床廣泛用于結(jié)合桿菌檢查，主要是在形態(tài)學(xué)觀察下，受制痰液中分枝桿菌數(shù)量，檢查期間敏感性較低，需要涂片中分枝桿菌達(dá)到103～104CFU/mL，對于部分患者無法檢出，僅僅適合20%的活性結(jié)合人群，漏檢率較高[6]，而且該方法無法區(qū)分非結(jié)核分枝桿菌（NTM）與結(jié)核分枝桿菌（MTB）。與涂片法相比，固體培養(yǎng)法靈敏度較高[7-8]，但檢查時(shí)間較長，需要4～8周完成，會(huì)影響患者治療，并會(huì)增加傳播風(fēng)險(xiǎn)，無法滿足臨床診療要求。此時(shí)需要快速且簡單的檢查方式，用于臨床診斷與治療。

XPert MTB/RIF是一種新型方法，在2 h內(nèi)完成痰樣本中結(jié)核分歧桿菌復(fù)合群和利福平耐藥rPoB基因突變檢測，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化擴(kuò)增，操作簡單，時(shí)效性較強(qiáng)的目標(biāo)。有道報(bào)指出XPert MTB/RIF檢測肺泡灌洗液診斷涂陰肺結(jié)核及結(jié)核病應(yīng)急診斷靈敏度和特異度均較高[9-10]。本文將XPertMTB/RIF檢測技術(shù)納入研究，選擇其他檢測方式進(jìn)行對比，結(jié)果顯示：XPertMTB/RIF檢測陽性率60.53%高于金胺O染色法40.79%、羅氏培養(yǎng)53.95%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本文結(jié)果證實(shí)該方法整體檢測情況理想，具有重要意義。目前XPertMTB/RIF檢測已成為WHO重點(diǎn)推薦的肺結(jié)核和利福平耐藥、以及HIV合并結(jié)核分枝桿菌感染疑似病例的重要檢測方法。另外XPertMTB/RIF檢測技術(shù)，利用巢式實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)，結(jié)合傳統(tǒng)PCR檢測需要的樣品制備，使用獨(dú)立一次性試劑盒，能夠自動(dòng)化完成，相比傳統(tǒng)的PCR方法更簡便、生物安全性更高、檢測過程不會(huì)受到影響、硬件設(shè)施要求低等優(yōu)勢。XPertMTB/RIF實(shí)現(xiàn)了結(jié)核病患者從“檢測＋等待”到“檢測即治療”的模式轉(zhuǎn)換，這將是臨床診斷肺結(jié)核的重要方式。

綜上所述，XPert MTB/RIF在肺結(jié)核中，診斷價(jià)值較高，能夠很好對患者進(jìn)行診斷，操作簡單、時(shí)間較短及安全性高，具有重要意義。