七味活絡(luò)酊的制備及臨床應(yīng)用

艾東方 魏德紅 吳韻 鄧婷 杜平

【摘 要】 目的：研制七味活絡(luò)酊，用于治療肩關(guān)節(jié)周圍炎。方法：以乙醇為溶劑，氮酮為助滲劑，用浸漬法及溶解法制備七味活絡(luò)酊，建立質(zhì)量控制標準，并觀察65例患者的治療效果。結(jié)果：制備工藝簡便易操作，穩(wěn)定可行，所制得的七味活絡(luò)酊對肩關(guān)節(jié)周圍炎的總有效率為100%。結(jié)論：本品制備工藝合理，質(zhì)量可控，治療肩關(guān)節(jié)周圍炎具有較好療效。

【關(guān)鍵詞】 七味活絡(luò)酊;制備;薄層色譜鑒別法;肩關(guān)節(jié)周圍炎;臨床觀察

【中圖分類號】R283.6 ? 【文獻標志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2021）09-0067-05

Abstract：Objective To develop Qiwei Huoluo tincture for the treatment of Scapulohumeral Periarthritis. Methods Qiwei Huoluo tincture was prepared with ethanol as solvent and azone as penetration enhancer by impregnation and dissolution methods. The quality control standard was established and the therapeutic effect of 65 patients was observed.Results The preparation technology is simple， easy to operate， stable and feasible. The total effective rate of Qiwei Huoluo tincture on Scapulohumeral Periarthritis is 100%.Conclusion The preparation process of Qiwei Huoluo tincture is reasonable and the quality is controllable.Qiwei Huoluo tincture has a good effect on the treatment of Scapulohumeral Periarthritis.

Keywords：Qiwei Huoluo Tincture; Preparation; TLC Identification Method; Scapulohumeral Periarthritis; Clinical Observation

肩關(guān)節(jié)周圍炎又稱肩周炎、凍結(jié)肩、五十肩等，是一種以肩臂疼痛和活動受限為主要特征的常見病。目前常用的治療方法有口服消炎鎮(zhèn)痛藥、中藥，阻滯、手術(shù)、熏洗、推拿、針灸、小針刀及功能鍛煉等[1-3]，但上述方法各有利弊，往往使用范圍局限，取效不佳。中藥酊劑是治療肩關(guān)節(jié)周圍炎最好的藥物[2，4]。因此，研究開發(fā)質(zhì)量可控、安全有效的相應(yīng)制劑已成為臨床的迫切需求。

七味活絡(luò)方是黔西北地區(qū)治療肩關(guān)節(jié)周圍炎的苗族秘方，由生扯攏、桃枝、山烏龜、細辛、草烏、豨薟草、冰片七味藥組成。傳統(tǒng)用藥方法是將方中藥味粉碎后，加上自釀糯米酒適量調(diào)敷患處，由于藥物制備使用簡單隨意，患者用藥后療效差異較大。本課題組在原組方的基礎(chǔ)上，加用適量氮酮與乙醇為輔料，采用浸漬法及溶解法制備成七味活絡(luò)酊;對該制劑的性狀、乙醇量、總固體等進行測定，采用薄層色譜法對方中草烏和冰片進行定性鑒別，并考察其穩(wěn)定性及皮膚刺激性，以控制七味活絡(luò)酊的內(nèi)在質(zhì)量;經(jīng)用七味活絡(luò)酊治療肩關(guān)節(jié)周圍炎患者，具有安全簡便、起效快、療效確切等特點?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 FA1004電子天平（上海方瑞儀器有限公司）; AKD-310G液體相對密度、濃度測試儀（揚州艾科瑞德儀器儀表有限公司）;GC2010型氣相色譜儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑 生扯攏、桃枝、山烏龜藥材采自貴州省納雍縣，細辛、草烏、豨薟草、冰片飲片購自四川蜀善藥業(yè)有限公司，經(jīng)貴州省畢節(jié)市中醫(yī)院魏德紅副主任中藥師鑒定均為正品。氮酮（批號：20180712，上海市瑞新化學品有限公司）;75%乙醇（批號：20190201，中科圣陽生物科技股份有限公司）;硅膠G板（批號：20170801，青島海洋化工有限公司）;化學試劑均為分析純。

1.3 實驗動物 豚鼠5只，其中雌性3只，雄性2只，體重200～250 g，由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場提供。試驗前2周飼養(yǎng)在清潔、噪聲低，燈光、溫度、濕度可控的房間，配備全價飼料及新鮮蔬菜，自行采食、飲水。

2 七味活絡(luò)酊的檢查及穩(wěn)定性

2.1 七味活絡(luò)酊的制備 取生扯攏40 g、桃枝30 g、山烏龜30 g、細辛40 g、草烏30 g、豨薟草30 g粉碎成粗粉，用粗粉重量4～5倍的75%乙醇作溶劑，浸漬48 h后，以2～3 mL/min速度緩緩滲漉，收集滲漉液備用;取冰片20 g及氮酮2 mL加入上述滲漉液中，攪勻使溶解，加75%乙醇調(diào)整至1000 mL，混勻，靜置，濾過，即得。

2.2 七味活絡(luò)酊的檢查 取3批（批號：20190606、20190611、20190613）七味活絡(luò)酊，檢查其性狀，并根據(jù)《中華人民共和國藥典》[5]方法進行乙醇量、總固體、甲醇量、裝量、微生物限度檢查。

2.2.1 性狀 將3批適量的七味活絡(luò)酊分別置于無色透明玻璃容器內(nèi)，進行觀察、嗅聞及品嘗。結(jié)果均為棕紅色澄清液體，氣芳香，味辛辣而清涼。

2.2.2 乙醇量 依照中國藥典2015年版四部通則0711乙醇量測定法項下蒸餾法的第二法進行測定。對上述3批七味活絡(luò)酊進行乙醇量測定，結(jié)果分別為64.3%、62.1%、59.7%。根據(jù)測定結(jié)果，暫定七味活絡(luò)酊含乙醇量的控制標準為55%～65%。

2.2.3 總固體 依照中國藥典2015年版四部通則0185酒劑項下總固體測定第二法進行測定。對上述3批七味活絡(luò)酊進行總固體測定，結(jié)果分別為10.67 mg/mL、10.87 mg/mL、10.63 mg/mL。根據(jù)測定結(jié)果，暫定七味活絡(luò)酊總固體的控制標準為每1 mL遺留殘渣不得少于10 mg。

2.2.4 甲醇量 依照中國藥典2015年版四部通則0871甲醇量檢查法項下第一法進行測定。對上述3批七味活絡(luò)酊進行甲醇量測定，結(jié)果分別為0.042%、0.037%、0.045%，均符合相關(guān)要求。

2.2.5 裝量 依照中國藥典2015年版四部通則0942最低裝量檢查法項下容量法進行測定。七味活絡(luò)酊的標示裝量為60 mL/瓶，抽取上述3批制劑進行測定，裝量均未低于標示裝量的97%，平均裝量分別為62.1 mL、61.9 mL、62.4 mL，結(jié)果符合相關(guān)要求。

2.2.6 微生物限度 依照中國藥典2015年版四部通則1105非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法和1106控制菌檢查法及1107非無菌藥品微生物限度標準檢查，上述3批七味活絡(luò)酊需氧菌總數(shù)分別為87 cfu/mL、62 cfu/mL、93 cfu/mL，霉菌和酵母菌總數(shù)分別為79 cfu/mL、56 cfu/mL、83 cfu/mL，且均未檢出金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌（mL），結(jié)果符合相關(guān)要求。

2.3 七味活絡(luò)酊的定性鑒別

2.3.1 草烏的薄層色譜鑒別[6] 取3批七味活絡(luò)酊（批號：20190606、20190611、20190613）各60 mL，分別水浴蒸至30 mL，放冷，加氨試液調(diào)pH至9～10，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作為不同批次供試品溶液。另按處方稱取除草烏外的藥材，按制備工藝制成陰性樣品，同法制成陰性供試品溶液。取草烏藥材粉末2 g，加氨試液2 mL潤濕，加乙醚20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加二氯甲烷1 mL使溶解，作為對照品溶液。按中國藥典2015年版四部通則0502薄層色譜法，吸取上述5種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4∶[KG-*3/5]3.6∶[KG-*3/5]1）為展開劑，置氨蒸氣飽和20分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。薄層色譜中，在與對照藥材相對應(yīng)的位置，不同批次供試品均顯兩個相同棕黃色的主斑點，陰性供試品無此斑點，說明陰性樣品無干擾。如圖1所示。

2.3.2 冰片的薄層色譜鑒別[7] 取3批七味活絡(luò)酊（批號：20190606、20190611、20190613）各10 mL，分別加乙醚7 mL，取上層溶液，50 ℃濃縮至3 mL，作為不同批次供試品溶液。另按處方稱取除冰片外的藥材，按制備工藝制成陰性樣品，同法制成陰性供試品溶液。取冰片飲片0.2 g，加乙醇2 mL使溶解，作為對照品溶液。按中國藥典2015年版四部通則0502薄層色譜法，吸取上述5種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（8.5∶[KG-*3/5]1.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105 ℃烘至斑點顯色清晰。薄層色譜中，在與對照藥材相應(yīng)的位置，不同批次供試品均顯相同顏色的斑點，陰性供試品無此斑點，說明陰性樣品無干擾。如圖2所示。

2.4 七味活絡(luò)酊的穩(wěn)定性試驗 參照中藥新藥質(zhì)量穩(wěn)定性研究的技術(shù)要求[8]，將3批（批號：20190606、20190611、20190613）七味活絡(luò)酊各取適量，分別置于無色透明的玻璃容器內(nèi)，密封，并標識為1、2、3不同編號的供試品，室溫放置，于0、1、2、3個月進行取樣，按“2.2七味活絡(luò)酊的檢查”項下方法，觀測其相關(guān)項目。結(jié)果3批供試品的性狀在不同觀測時間均未見變化，乙醇量、總固體也無明顯改變，說明七味活絡(luò)酊具有良好的初步穩(wěn)定性。見表1。

2.5 七味活絡(luò)酊的皮膚刺激性試驗 參照外用藥皮膚刺激性試驗的研究[8]，取健康豚鼠5只，給藥前24小時將其背脊左右各去毛約3 cm×3 cm（去毛后無紅斑、水腫、皮損等異常），在各豚鼠去毛皮膚左側(cè)涂抹七味活絡(luò)酊1 mL，右側(cè)涂抹用2 mL氮酮加入75%乙醇1000 mL中制成的空白七味活絡(luò)酊1 mL，二層紗布覆蓋，繃帶固定，24 h后除去紗布，以溫水洗去左右側(cè)殘留物，觀察1、24、48、72 h后皮膚刺激反應(yīng)及恢復(fù)情況，與右側(cè)比較，并按皮膚刺激反應(yīng)及皮膚刺激強度評分標準進行評分與評價。結(jié)果5只豚鼠中有2只在用藥后24 h觀察，可見輕微紅斑，1只可見輕微水腫，其他時間觀察均未見異常，說明七味活絡(luò)酊對豚鼠皮膚無明顯刺激性。

3 七味活絡(luò)酊的臨床試驗

3.1 診斷標準 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[9]及《肩周炎》[2]相關(guān)標準制訂。①患者50歲左右，常有風濕寒邪侵襲史或外傷史。②肩部疼痛及活動痛，夜間加重，可放射到手，但無感覺異常。③肩關(guān)節(jié)活動受限，以上舉、前伸、外展為甚。④肩周肌肉痙攣或萎縮，肩周有廣泛壓痛。⑤ⅹ線及化驗檢查常無異常發(fā)現(xiàn)。

3.2 納入標準 符合診斷標準的住院和門診病例均入選，并對門診病例嚴控可變因素;患者簽署知情同意書。

3.3 排出標準[10] 嚴重心腦疾患或臟器衰竭者;出血傾向者;頸椎病致上肢放射性疼痛者;局部軟組織有炎癥破損者;精神病患者。

3.4 試驗設(shè)計 采用隨機、雙盲、安慰劑平行對照臨床試驗方法。按患者就診順序，依次交叉分別納入治療組和安慰劑組，由臨床試驗負責人保存盲底及揭盲。

3.5 樣本含量 樣本含量為65例，分為治療組（七味活絡(luò)酊組）33例，其中男7例，女26例;安慰劑組32例，其中男8例，女24例。兩組年齡均為40～65歲。

3.6 干預(yù)措施 兩組分別用七味活絡(luò)酊或安慰劑涂擦患處，2～5 mL/次，3～5次/d，療程均為7 d，期間不使用其他治療肩關(guān)節(jié)周圍炎的藥物或方法。安慰劑為七味活絡(luò)酊輔料加色素制成，外觀與七味活絡(luò)酊基本一致。

3.7 療效評分 將涵蓋各評分項目且隱去分數(shù)的肩關(guān)節(jié)周圍炎療效評定量表[11]給患者，由患者根據(jù)自己狀況在相應(yīng)的方框中打“？”后，交給研究者對各項目添加分數(shù)，分別對患者的日常生活能力、肩關(guān)節(jié)活動能力、肩關(guān)節(jié)疼痛程度進行評分，并計算各項目之總分。

3.8 療效評價標準 以各項目總分作為療效評價標準：治愈：80～100分;好轉(zhuǎn)：50～80分;未愈：50分以下。

3.9 統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用Wilcoxon秩和檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3.10 兩組治療情況比較

3.10.1 總有效率比較 治療組的總有效率明顯高于安慰劑組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明七味活絡(luò)酊治療肩關(guān)節(jié)周圍炎為有效的康復(fù)治療方法。見表2。

3.10.2 日常生活能力評分比較 治療組優(yōu)于安慰劑組（P<0.05），說明治療組更能改善患者的日常生活能力。見表3

3.10.3 肩關(guān)節(jié)活動功能評分比較 治療組高于安慰劑組（P<0.05），說明治療組患者的肩關(guān)節(jié)活動功能得到了改善。見表4。

3.10.4 肩關(guān)節(jié)疼痛評分比較 治療組與安慰劑組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明治療組減輕肩關(guān)節(jié)疼痛程度優(yōu)于安慰劑組。見表5。

4 討論

肩關(guān)節(jié)周圍炎多發(fā)生于50歲左右的中老年人，常與外傷或受涼、肩關(guān)節(jié)慢性勞損等有關(guān)。本病屬祖國醫(yī)學的“痹證”范疇，年老體弱，氣血虛損，風、寒、濕邪侵入關(guān)節(jié)，致局部經(jīng)脈閉塞、氣滯血瘀，故“不通則痛”。根據(jù)其癥狀演變可分為疼痛期、僵硬期及緩解期。肩關(guān)節(jié)周圍炎治療的主要目的是緩解疼痛、恢復(fù)關(guān)節(jié)活動度及緩解臨床癥狀，以提高患者的生活質(zhì)量和滿意度[12]。

七味活絡(luò)酊處方中生扯攏祛風除濕，桃枝活血通絡(luò)，山烏龜清熱解毒、散瘀止痛，細辛解表散寒、祛風止痛、通竅，草烏祛風除濕、溫經(jīng)止痛，豨薟草祛風濕、利關(guān)節(jié)，冰片開竅、止痛消腫。諸藥合用，可以起到祛風除濕、活血通絡(luò)、散瘀止痛的作用。同時，方中冰片及所用輔料氮酮和乙醇均有一定的促滲作用，能促使中藥活性成分透過角質(zhì)層屏障，作用于局部病灶及毛細血管，增強七味活絡(luò)酊的靶向作用[4]。

本研究對七味活絡(luò)酊作性狀、乙醇量、總固體等檢查，并采用薄層色譜法定性鑒別其中草烏和冰片，能保證制劑質(zhì)量符合2015年版《中國藥典》（四部）的相關(guān)要求。選用現(xiàn)有多種肩關(guān)節(jié)周圍炎療效評定標準中的“肩關(guān)節(jié)周圍炎療效評定量表”作為療效評定工具，具有較為科學、客觀、規(guī)范、簡便等優(yōu)勢，能對患者的治療效果進行較為全面的評價[11]。試驗結(jié)果表明，經(jīng)優(yōu)化工藝制備的七味活絡(luò)酊有良好的初步穩(wěn)定性，對豚鼠皮膚無明顯刺激，草烏、冰片鑒別薄層色譜分離效果較好、斑點顯色清晰;七味活絡(luò)酊用于臨床，在改善患者的日常生活能力、肩關(guān)節(jié)活動功能，緩解患者的肩關(guān)節(jié)疼痛及有效率幾方面，均明顯優(yōu)于安慰劑（P<0.05），且未見不良反應(yīng)。研究還發(fā)現(xiàn)，七味活絡(luò)酊組33例患者首次用藥后，大多即刻減輕疼痛并恢復(fù)部分肩關(guān)節(jié)活動功能，說明該制劑具有吸收快、作用迅速等特點。

綜上所述，本研究對七味活絡(luò)酊的制備及臨床應(yīng)用提供了一定的方法和證據(jù)支持，為該制劑的進一步開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。本課題組將從七味活絡(luò)酊的制備工藝、質(zhì)量控制標準、療效評定標準、大樣本患者的治療效果等方面進行更深入的研究，以完善尚存不足，提高其應(yīng)用性。

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（收稿日期：2020-10-26 編輯：程鵬飛）