圈養(yǎng)條件下古巴火烈鳥血液生理生化指標(biāo)的測定

鄧麗玲，陳 莎，李雨芮，汪波瀚，程先武，熊恒慶，吳 磊，郭玉琦

（武漢市動(dòng)物園管理處，湖北 武漢 43000）

古巴火烈鳥（Phoenicopterus rubber）屬于鳥綱（Aves）、紅鸛科（Phoenicopteridae），紅鸛屬（Phoenicopterus），分布于地中海沿岸，棲息于溫?zé)釒}湖水濱，淺灘，以小魚、小蝦、昆蟲、藻類等為食，性格溫和，機(jī)警，善游泳，是動(dòng)物園中最受歡迎的野生鳥類之一，也是動(dòng)物園獸醫(yī)護(hù)理的重要組成部分。

生理生化活動(dòng)是生命體的基本過程，動(dòng)物血液學(xué)和臨床生物化學(xué)參數(shù)是動(dòng)物的基本資料，在疾病診斷和治療過程中具有相當(dāng)大的潛在價(jià)值，特別是鳥類。目前，國內(nèi)學(xué)者對古巴火烈鳥的研究主要在人工育雛、人工飼養(yǎng)管理、臨床病例分析，但對古巴火烈鳥的血液生理生化的研究暫未見報(bào)道。國外學(xué)者V.I.Peinado等對不同品種的火烈鳥部分生理生化值進(jìn)行了研究，HAWKEY等對不同年齡段的火烈鳥的部分生理生化值進(jìn)行了分析，PUERTA,M.L等報(bào)道了智利火烈鳥部分血液生理生化值。本研究以武漢動(dòng)物園圈養(yǎng)的42只古巴火烈鳥為研究對象，測定了26項(xiàng)生理生化指標(biāo)并進(jìn)行了分析，為古巴火烈鳥的飼養(yǎng)管理、疾病防治等研究提供基礎(chǔ)性數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

所有研究對象均為成年古巴火烈鳥，年齡在15歲左右，無疾病臨床癥狀。體重1.47～3.1kg。

1.2 飼養(yǎng)條件

飼養(yǎng)古巴火烈鳥的小島為開放系統(tǒng)，籠舍由內(nèi)室和室外運(yùn)動(dòng)場構(gòu)成，自然光照，自由飲水，定時(shí)定量飼喂。動(dòng)物飼料為特定的古巴火烈鳥飼料，由玉米、黃豆、麩皮、胡蘿卜，番茄，洋蔥，蝦皮，雞蛋，肉雞商品料，小黃魚構(gòu)成。

1.3 試驗(yàn)器材及試劑

萊卡光學(xué)顯微鏡、watson 177-112C細(xì)胞計(jì)數(shù)板、diff-quick染液，0.01%甲苯胺藍(lán)，瑞氏染色液，病理級(jí)載玻片、目鏡測微尺、毛細(xì)管離心機(jī)，xk-2型血紅蛋白儀、天津微納芯PointcareV全自動(dòng)生化儀及配套生化試劑盤。

1.4 樣品采集

2019年4月、2019年10月、2020年10月，動(dòng)物進(jìn)食前，人工保定，在同一時(shí)間（9～11時(shí)）從跖骨中靜脈采血2～3mL，分別用EDTA管和肝素管保存血樣。EDTA管血樣用于血常規(guī)檢測，肝素管血樣用于生化指標(biāo)檢測。血涂片必須在采血現(xiàn)場制作，自然風(fēng)干。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 紅細(xì)胞總數(shù)

（RBC,個(gè)×1012/L）、白細(xì)胞總數(shù) 血樣稀釋后，采用watson 177-112C細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

1.5.2 血細(xì)胞大小測量

血涂片染色后隨機(jī)選取50個(gè)細(xì)胞，用顯微測微尺進(jìn)行測量。

1.5.3 血紅蛋白值（HB，G/L）測定 用xk-2型血紅蛋白儀進(jìn)行測定。

1.5.4 紅細(xì)胞壓積（PCV）測定

75mm毛細(xì)管，注入40μL血液，以口腔紅蠟封口，放入毛細(xì)離心機(jī)，封口的一頭朝外，1500R/min，離心2min。紅細(xì)胞比容=血細(xì)胞高度/（紅細(xì)胞+血漿高度）×100%。

1.5.5 白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

血涂片染色后高倍鏡下連續(xù)隨機(jī)觀察100個(gè)白細(xì)胞，進(jìn)行分類計(jì)數(shù)。

1.5.6 生化指標(biāo)的測定

樣品采集后2h內(nèi)進(jìn)行生化指標(biāo)（TP、ALB、GLO、A/G、GLU、UA、AST、CK、K+、Na+、Na+/K+、Cl-、CA、P）檢測，該檢測由天津微納芯PointcareV全自動(dòng)生化儀及配套生化試劑盤完成。

2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析方法

測定的指標(biāo)均按種屬、性別進(jìn)行分組分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用EXCEL和SASS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行生物學(xué)統(tǒng)計(jì)，內(nèi)容包括樣本平均值X、樣本標(biāo)準(zhǔn)差SD以及獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)。樣本均值X，反映了樣本的整體情況；樣本標(biāo)準(zhǔn)差SD，反映樣本偏離平均值X的情況；X+/-SD反映樣本的取值范圍。分析比較兩個(gè)獨(dú)立樣本的差異時(shí)，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)獨(dú)立樣本均值方程的T檢驗(yàn)，測出P=sig（雙側(cè)）值，當(dāng)P

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 古巴火烈鳥血液形態(tài)學(xué)

3.1.1 紅細(xì)胞（red blood cell）

9～15μm，具有明顯的特異性，卵圓細(xì)胞，細(xì)胞核橢圓形，胞漿染色均勻。

3.1.2 多染性紅細(xì)胞

6～10μm橢圓形，胞漿藍(lán)色，核常成塊狀，染色不均，紫藍(lán)色。

3.1.3 嗜異性粒細(xì)胞（heterophilic granulocyte）

9～15μm不規(guī)則圓形及類圓形，胞質(zhì)淡染，充滿桿狀或紡錘狀結(jié)晶顆粒，桿狀核染色不均，輪廓不清，分葉核染色較細(xì)膩，紫紅色，常分2葉。

3.1.4 淋巴細(xì)胞

5～9μm圓形或類圓形，胞質(zhì)淡藍(lán)色，細(xì)胞核圓形，與紅細(xì)胞緊密接觸后常被觀察到變形。

3.1.5 嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil）7～11μm圓形，胞質(zhì)藍(lán)灰色，內(nèi)含圓形嗜酸性顆粒，顆粒有折光性，胞核常分2葉，顏色紫紅帶藍(lán)。

3.1.6 單核細(xì)胞（monocyte）10～15μm，圓形細(xì)胞，胞質(zhì)豐富，稍不透明有流動(dòng)感，淡灰藍(lán)色，胞核呈腎形、卵圓形、馬蹄形或不規(guī)則形。

3.1.7 嗜堿性粒細(xì)胞（basophil）7～11μm，不規(guī)則形，胞漿豐富，胞核不規(guī)則，染色較粗糙，內(nèi)有染色深的嗜堿性顆粒。

3.1.8 凝血細(xì)胞（thrombocyte）

4～7μm，橢圓形，胞漿淡藍(lán)灰色，胞核紫紅色。

3.2 古巴火烈鳥血液生理指標(biāo)測定結(jié)果

42只成年古巴火烈鳥17項(xiàng)血液生理指標(biāo)測定結(jié)果（見表1），可以看出，成年古巴火烈鳥的雌雄生理指標(biāo)數(shù)值比較接近，經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，差異均不顯著（P>0.05）。

表1 圈養(yǎng)條件下古巴火烈鳥血液生理指標(biāo)測定結(jié)果（X±SD）

3.3 圈養(yǎng)成年古巴火烈鳥血液生化指標(biāo)測定結(jié)果

42只圈養(yǎng)成年古巴火烈鳥項(xiàng)血液生化指標(biāo)測定結(jié)果（見表2），可以看出，成年古巴火烈鳥的雌雄生化指標(biāo)數(shù)值存在一定差異，但差異不顯著，均未通過統(tǒng)計(jì)學(xué)P值檢驗(yàn)（P>0.05）。

表2 成年火烈鳥血液生化指標(biāo)測定結(jié)果（X±SD）

4 討論與分析

4.1 古巴火烈鳥生理指標(biāo)分析

本次實(shí)驗(yàn)所獲得的圈養(yǎng)條件下古巴火烈鳥的生理指標(biāo)雌雄之間存在差異，但無顯著差異。紅細(xì)胞總數(shù)及血紅蛋白值雌性指標(biāo)略高于雄性，白細(xì)胞總數(shù)雄性略高于雌性。與國外學(xué)者V.I.Peinado等火烈鳥的研究報(bào)道情況相比，血紅蛋白值、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞總數(shù)、異嗜性粒細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞偏低，白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞總數(shù)、單核細(xì)胞總數(shù)及嗜堿性粒細(xì)胞總數(shù)則略高，但都在鳥類血液生理指標(biāo)正常參考范圍之內(nèi)。

4.2 古巴火烈鳥生化指標(biāo)分析

本次實(shí)驗(yàn)所獲得的圈養(yǎng)條件下古巴火烈鳥的生化指標(biāo)雌雄之間存在差異，但無顯著差異。尿酸、谷草轉(zhuǎn)氨酶雌性指標(biāo)高于雄性，總蛋白、白蛋白、球蛋白雄性指標(biāo)高于雌性，其余指標(biāo)基本一致。

5 小結(jié)與討論

鳥類的紅細(xì)胞屬有核紅細(xì)胞，大部分的血液分析儀都無法進(jìn)行分析，流式細(xì)胞儀雖然可以分析出來，但機(jī)器過于昂貴。所以盡管這項(xiàng)研究的大部分血液生理指標(biāo)數(shù)據(jù)都是作者根據(jù)人工計(jì)數(shù)方法計(jì)算出來，但在臨床上也有一定的參考意義。本實(shí)驗(yàn)所測得關(guān)于圈養(yǎng)條件下古巴火烈鳥的部分血液生理生化數(shù)值與野生古巴火烈鳥測定的情況是否一致，以及在不同時(shí)期、不同地域、不同變化規(guī)律下表現(xiàn)如何等等，均有待進(jìn)一步研究。理想情況下，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)該根據(jù)自己的臨床需要建立一套參考范圍，尤其是當(dāng)參考數(shù)據(jù)是通過不同的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)獲得的，這樣有助于解釋動(dòng)物由于環(huán)境、溫度和其他因素所造成的區(qū)別。此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅供參考。