肝癌患者中IL-17表達(dá)與HBV基因型的相關(guān)性研究

楊 娜 謝會娟 梁文龍

原發(fā)性肝癌是臨床最為常見的惡性腫瘤疾病之一，患者發(fā)病后表現(xiàn)為明顯的肝區(qū)疼痛，出現(xiàn)腹痛腹脹等癥狀，并隨著患者病情的進(jìn)展，會出現(xiàn)肝臟組織的壞死、破裂，可引起腹腔內(nèi)出血，出現(xiàn)腹膜刺激征，進(jìn)而嚴(yán)重影患者的生命健康和生活質(zhì)量，并最終危及患者的生命[1-2]。隨著社會工作壓力的增加和生活習(xí)慣的改變，原發(fā)性肝癌的發(fā)病率逐年升高，已成為威脅人類生命安全的最重要的癌癥腫瘤疾病。在對于原發(fā)性肝癌的發(fā)病機(jī)制研究中，乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是肝癌發(fā)生的1個(gè)重要誘因，在大部分肝癌患者中均能檢出HBV，隨著乙型肝炎病毒攜帶者的增多及乙型肝炎發(fā)病率的升高，使得原發(fā)性肝癌的發(fā)病率逐年升高[3-4]。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)在肝癌發(fā)病過程中伴隨著免疫反應(yīng)、炎性反應(yīng)等過程的參與。白細(xì)胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)是1種重要的促炎性因子，在機(jī)體多種炎癥反應(yīng)及自身免疫過程中發(fā)揮作用，具有促進(jìn)多種腫瘤生長的作用，也有相關(guān)報(bào)道表明IL-17可能是潛在的評估肝癌患者病情、預(yù)后的敏感指標(biāo)[5-6]。而目前臨床對于肝癌患者的IL-17水平與HBV感染過程及HBV基因型之間是否存在某種聯(lián)系尚未有明確的研究證實(shí)[7]。為此，本研究中選取肝癌患者為研究對象，通過檢測其IL-17的表達(dá)，進(jìn)一步探討IL-17與HBV基因型的相關(guān)性，現(xiàn)將主要研究內(nèi)容報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年04月至2020年04月期間我院收治的92例原發(fā)性肝癌患者為研究對象納入肝癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：① 患者經(jīng)CT、MRI、病理學(xué)檢查確診為原發(fā)性肝癌，符合中華醫(yī)學(xué)會腫瘤學(xué)會制定的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；② 患者均為首次確診；③ 患者均伴有HBV感染；④ 患者自愿參與本項(xiàng)研究，配合完成研究過程；⑤ 研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會審查通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 患者并發(fā)其他腫瘤疾病；② 入組前已接受治療藥物干預(yù)的患者；③ 癌癥終末期患者；④ 患者基礎(chǔ)資料、臨床檢測資料缺失或不完善。92例患者中男性47例、女性45例，年齡42～78歲，平均年齡(56.92±10.83)歲，體質(zhì)指數(shù)(Body mass index，BMI)18～26 kg/m2，平均BMI(22.38±2.83)kg/m2，腫瘤分期：Ⅱa期21例、Ⅱb期39例、Ⅲ期32例。選取同期在我院進(jìn)行治療的乙型肝炎患者80例為肝炎組，患者均確診為乙型肝炎，男性39例、女性41例，年齡41～76歲，平均年齡(54.82±11.76)歲，BMI19～27 kg/m2，平均BMI(23.13±2.98)kg/m2，另選同期在我院進(jìn)行健康檢查的健康受試者50例為對照組，其中男性28例、女性22例，年齡41～74歲，平均年齡(55.23±11.36)歲，BMI19～26kg/m2，平均BMI(22.43±2.89)kg/m2，受試者各項(xiàng)生命體征指標(biāo)正常，無肝部疾病史。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

肝癌組、肝炎組患者和健康對照組受試者入院后采集晨起空腹肘靜脈血約3 ml，加入到含有乙二胺四乙酸二鈉抗凝管中，在DT-5B型臺式高速離心機(jī)(德國艾本德離心設(shè)備公司)中離心分離，轉(zhuǎn)速5000 rpm、離心10 min后分離得到血清上清液標(biāo)本，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測患者的IL-17水平，檢測儀器為Emax 2100型全波段多功能酶標(biāo)儀(美國美度公司)，檢測試劑盒購置于安徽深藍(lán)科技有限公司，操作按儀器試劑盒說明書要求進(jìn)行。對肝癌組、肝炎組患者采用PCR擴(kuò)增技術(shù)提取HBV DNA，采用 PCR 結(jié)合熒光探針的體外DNA擴(kuò)增和檢測技術(shù)，定量檢測血清標(biāo)本中的 HBV DNA含量，檢測儀器為RR901 PCR梯度擴(kuò)增儀(德國Whatman Biometra公司)，乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒購置于達(dá)安基因生物科技公司，將測序結(jié)果輸入NCBI在線病毒基因分型工具，經(jīng)序列對比確定HBV基因型。

1.3 評價(jià)指標(biāo)

對肝癌組、肝炎組患者和健康對照組受試者的IL-17水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對比，并將肝癌組患者按腫瘤分期分為Ⅱa期組(21例)、Ⅱb期組(39例)、Ⅲ期組(32例)，對三組患者間的IL-17水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對比。根據(jù)HBV基因型檢測結(jié)果，對肝癌組、肝炎組患者的HBV基因型分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對比，并對肝癌組患者不同HBV基因型間IL-17水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)對比，探討IL-17與HBV基因型分布的關(guān)系。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果

2.1 各組患者IL-17水平對比

肝癌組患者的IL-17水平高于肝炎組且高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 各組患者IL-17水平對比

2.2 肝癌組不同分期患者IL-17水平對比

肝癌組患者中隨著患者分期的增加，IL-17水平呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(P<0.05)，見表2。

表2 肝癌組不同分期患者IL-17水平對比

2.3 肝癌組、肝炎組HBV基因型分布對比

肝癌組患者HBV基因型分布與肝炎組患者HBV基因型分布有顯著性差異，肝癌組患者以C基因型為主，肝炎組患者以B基因型為主(P<0.05)，見表3。

表3 肝癌組、肝炎組HBV基因型分布對比(例，%)

2.4 肝癌組HBV不同基因型患者IL-17水平對比

肝癌組患者中，HBV C基因型患者IL-17高于B基因型且高于A基因型、D基因型患者(P<0.05)，見表4。

表4 肝癌組HBV不同基因型患者IL-17水平對比

3 討論

肝癌是臨床最為常見的惡性腫瘤疾病，是起源于肝臟上皮細(xì)胞惡變的腫瘤疾病。我國作為人口大國，有龐大的原發(fā)性肝癌的發(fā)病人群。目前，對于原發(fā)性肝癌的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[8]。其中HBV感染、免疫反應(yīng)、炎性因子反應(yīng)等是肝癌發(fā)生的重要誘因，相關(guān)的報(bào)道顯示在肝癌患者中多伴有HBV病毒的陽性表達(dá)和一些細(xì)胞因子成分水平的上升。其中IL-17作為1種經(jīng)典的促炎性因子，是由機(jī)體的Th17細(xì)胞分泌的特征性的細(xì)胞因子， 通過刺激靶細(xì)胞釋放前炎性介質(zhì)，誘導(dǎo)機(jī)體的中性粒細(xì)胞活化聚集，進(jìn)而可加重機(jī)體的炎癥反應(yīng)，在多種癌癥腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展過程中有水平的異常改變，多呈現(xiàn)高表達(dá)[9-10]。而機(jī)體的抗病毒免疫清除過程可造成肝細(xì)胞的損傷，誘發(fā)原發(fā)性肝癌的發(fā)生。因此，IL-17在肝癌患者中的表達(dá)過程與HBV的表達(dá)及基因型的分布是否存在關(guān)聯(lián)，對于原發(fā)性肝癌發(fā)病機(jī)制的深入探討有著重要意義，本研究基于此開展相關(guān)研究，旨在進(jìn)一步探討肝癌患者IL-17與HBV基因型的相關(guān)性[11]。

在本研究中，對各組患者受試者的IL-17水平進(jìn)行檢測對比，結(jié)果顯示肝癌組患者的IL-17水平高于肝炎組且高于對照組，且肝癌組中隨著患者的腫瘤分期的升高，患者IL-17水平呈現(xiàn)依次升高的趨勢，表明IL-17的高表達(dá)可能參與肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程中。這是因?yàn)镮L-17主要是由Th17細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分泌產(chǎn)生的細(xì)胞因子，通過促進(jìn)T細(xì)胞激活并介導(dǎo)纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等分泌多種致炎因子，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生[6，12]。進(jìn)而導(dǎo)致的肝臟細(xì)胞的炎性損傷，進(jìn)而參與肝臟腫瘤細(xì)胞的形成和發(fā)展過程。在IL-17表達(dá)水平與HBV感染相關(guān)性分析中，乙型肝炎、肝癌患者的IL-17均處于較高水平，表明IL-17可能參與了HBV相關(guān)肝臟疾的發(fā)生、發(fā)展并且可能與肝臟嚴(yán)重程度相關(guān)，IL-17水平變化與HBV感染程度可能有一定的關(guān)聯(lián)[13]。在基因型對比中，肝癌組患者HBV基因型分布與肝炎組患者HBV基因型分布有顯著性差異，肝癌組患者以C基因型為主，肝炎組患者以B基因型為主，這與既往的臨床報(bào)道結(jié)果基本吻合。HBV有多種基因型，其中亞洲地區(qū)主要以A、B、C、D四種基因型為主，B基因型的病變程度相對較輕，主要出現(xiàn)在乙型肝炎患者及HBV無癥狀攜帶者人群中，而C基因型則是發(fā)展成為嚴(yán)重肝病的機(jī)率較高，進(jìn)而易出現(xiàn)在肝癌患者人群中，在肝炎、肝癌患者人群中表現(xiàn)出了HBV基因型的差異。因此，通過對患者的HBV基因型的檢測也有助于原發(fā)性肝癌的診斷，較早對HBV C基因型感染者采取積極有效的抗病毒治療可能會減少原發(fā)性肝癌的發(fā)生和進(jìn)展[14]。在IL-17表達(dá)水平與HBV基因型的相關(guān)性研究中，肝癌組患者中，HBV C基因型患者IL-17高于B基因型且高于A基因型、D基因型患者，初步表明IL-17與HBV基因型存在一定的相關(guān)性，表明HBV感染者不同基因型間免疫應(yīng)答有所差異，肝癌患者HBV C基因型由于病毒的影響激活機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，進(jìn)而表現(xiàn)出IL-17的高表達(dá)。

綜上所述，肝癌患者中IL-17呈現(xiàn)高表達(dá)，隨肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程呈現(xiàn)規(guī)律性升高。并且IL-17的表達(dá)與HBV基因型有密切的關(guān)聯(lián)，在C基因型中IL-17呈現(xiàn)高表達(dá)。因此，通過對患者IL-17水平的檢測對于肝癌的發(fā)病診斷、病情評估、治療靶點(diǎn)選擇及預(yù)后效果評估有重要的參考意義。