亞急性瘤胃酸中毒耐受性不同的奶牛血漿和乳中脂肪酸及代謝物組成分析

張濤，牟英玉，亓王盼，郭長征，張繼友，毛勝勇

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)消化道微生物研究室，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)反芻動物營養(yǎng)與飼料工程中心，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，江蘇南京210095）

奶牛亞急性瘤胃酸中毒（subacute ruminal acidosis，SARA）是由于奶牛長期采食過量易發(fā)酵碳水化合物，導(dǎo)致瘤胃內(nèi)微生物產(chǎn)酸速率大于酸的移除速率，造成瘤胃內(nèi)揮發(fā)性脂肪酸（volatile fatty acid，VFA）積累，最終使瘤胃 pH 值長期處于 5.2～5.8 的一種營養(yǎng)代謝疾?。?］，當(dāng)奶牛瘤胃 pH＜5.8 持續(xù)時間超過 330 min·d?1，將其定義為SARA［2］。SARA 可導(dǎo)致瘤胃代謝紊亂、瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)被破壞，并誘發(fā)瘤胃上皮炎癥等疾病，最終嚴重危害動物的機體健康，并降低其生產(chǎn)性能，給奶牛養(yǎng)殖帶來巨大的經(jīng)濟損失。在實際生產(chǎn)中，養(yǎng)殖者常通過配方調(diào)整、添加碳酸氫鈉等緩沖劑或酵母培養(yǎng)物等微生態(tài)制劑來降低SARA 的發(fā)生率，但盡管如此，規(guī)?；翀鲋忻谌樵缙诤椭衅谀膛ARA 的發(fā)生率依然在19%～26%［3］。這些結(jié)果說明，SARA 的發(fā)生除與日糧結(jié)構(gòu)有關(guān)外，還與其他因素有關(guān)。近年來一些研究結(jié)果顯示，在高精料飼喂條件下，奶牛的瘤胃pH 值下降幅度明顯不一致，部分奶牛的瘤胃pH 值下降幅度較大，部分則較小，兩者發(fā)生SARA 的嚴重程度不一，這表明奶牛對SARA 的耐受性存在較大的個體差異［4?5］。此外，綿羊和肉牛個體間也存在 SARA 耐受性差異［6?7］。綜上所述，反芻動物對 SARA 的耐受性存在個體差異可能是一種普遍現(xiàn)象，但隱藏在這一表象背后的生物學(xué)機制目前并不十分清楚。

代謝組學(xué)是一門研究生物系統(tǒng)全部代謝物組成及其動態(tài)變化規(guī)律的科學(xué)，通過對內(nèi)源性小分子代謝物（相對分子質(zhì)量＜1500）進行定性或定量分析，其能反映機體在健康或疾病狀態(tài)下代謝活動的變化，因而對于臨床癥狀出現(xiàn)前的動物生理狀態(tài)的評估具有重要意義［8］。目前，代謝組學(xué)技術(shù)已廣泛運用于藥理學(xué)、病理學(xué)和毒理學(xué)等領(lǐng)域［9?10］。近年來，研究者們利用代謝組學(xué)技術(shù)分析了奶牛瘤胃及血液代謝組的組成，發(fā)現(xiàn)SARA 的發(fā)生會造成奶牛瘤胃液中生物胺的濃度顯著增加，且血漿中代謝產(chǎn)物發(fā)生顯著改變［11］。然而，目前尚不清楚對SARA 易感性不同的奶牛血漿和牛乳中代謝物的差異，以及其與SARA 易感程度間的內(nèi)在關(guān)系。

本研究中，擬在相同飼喂條件下，篩選出對SARA 耐受性存在顯著差異的奶牛，利用代謝組學(xué)技術(shù)，同時結(jié)合氣相色譜分析手段，比較研究兩組奶牛血液和乳中脂肪酸及其他代謝物的組成差異，以期篩選出與SARA 耐受性相關(guān)的標(biāo)志物，為奶牛健康養(yǎng)殖及分群飼養(yǎng)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計及動物飼養(yǎng)管理

本試驗選用12 頭體重相近且裝有永久性瘤胃瘺管的泌乳中期荷斯坦奶牛［2～3 胎，泌乳天數(shù)（114±22）d］，栓系飼喂系統(tǒng)，自由采食和飲水。試驗期為35 d，前14 d 為日糧適應(yīng)期，后21 d 為試驗期，試驗期提供精粗比為4∶6 的混合飼糧，飼糧配方及營養(yǎng)水平見表1。分別于每天8：00 和19：00 飼喂，剩料量控制在飼喂量的5%～10%，并于飼喂前擠奶。

表1 飼糧組成及其營養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets（air-dry basis）

1.2 樣品采集

在試驗期的第 20 和 21 天晨飼后 0、2、4、6、8、12 h 測定瘤胃 pH，基于瘤胃 pH 變化情況，進行奶牛分組；在 21 d的早晚收集乳樣，按兩次產(chǎn)奶量的比例進行等比混合，并取5 mL 奶樣，凍存于液氮中，用于乳脂肪酸組成測定及代謝組學(xué)分析；于試驗期的第21 天晨飼后6 h，通過頸靜脈采集血液，制備血漿，用于血漿脂肪酸組成測定及代謝組學(xué)分析。

1.3 血漿及乳脂肪酸組成測定

1.3.1 試劑配制 內(nèi)標(biāo)液：稱取20 mg 十九烷酸甲酯（Sigma H4515，德國），用正己烷定容至100 mL；氯仿/甲醇/2，6-二叔丁基對甲苯（BHT）：氯仿300 mL，甲醇 200 mL，BHT 50 mg；氫氧化鉀/甲醇溶液：28 g 氫氧化鉀，用甲醇定容至 1 L；HIP 溶液：600 mL 正己烷，400 mL 異丙醇，50 mL BHT；甲酯化試劑：1.75 mL 甲醇，0.40 mL 甲醇鈉（Sigma 403067，德國）；終止試劑：稱取 1 g 草酸溶于 30 mL 乙醚中；標(biāo)準(zhǔn)品溶液：將 C4～C24混標(biāo)（Sigma 18919，德國）溶于1 mL 正己烷中。

1.3.2 血漿及乳中脂肪酸提取及甲酯化 血漿中脂肪酸提取及甲酯化參照Sun 等［13］的研究方法。乳中脂肪酸抽提及甲酯化參照王小靜等［14］的研究方法。

1.3.3 氣相色譜分析條件 采用Agilent 7890A 氣相色譜儀（美國），Agilent G4513A 自動進樣器（美國），CP-sil-88 脂肪酸甲酯測定專用毛細管柱（100 m×0.25 mm×0.20 μm，Agilent，美國）。程序升溫條件參照楊炳壯等［15］的研究方法。

1.4 液相色譜?質(zhì)譜聯(lián)用（liquid chromatography?mass spectrometry，LC?MS）代謝組學(xué)分析

1.4.1 血漿及乳樣品預(yù)處理 吸取100 μL 血漿或牛乳樣本于1.5 mL EP 管中；加入300 μL 甲醇，并加入10 μL 內(nèi)標(biāo)液（2.8 mg·mL?1，2-氯苯丙氨酸）；渦旋 30 s，?20 ℃靜置 1 h；置于 4 ℃離心機中，13000 r·min?1離心 15 min；吸取 200 μL 上清液，裝瓶待測。

1.4.2 LC?MS 鑒定條件 采用LC?MS（Thermo，Ultimate 3000LC，Q Exactive，德國）儀器分析平臺，C18色譜柱［Hyper gold C18（100 m×2.1 mm×1.9 μm）］進行鑒定。色譜分離條件：柱溫為40 ℃；流速0.3 mL·min?1；流動相組成A：水+5%乙腈+0.1%甲酸，B：乙腈+0.1%甲酸；進樣量為10 μL，自動進樣器溫度為4 ℃；流動相梯度洗脫程序參考表2。

表2 流動相洗脫程序Table 2 The mobile phase elution procedure

質(zhì)譜參數(shù)正模式：加熱器溫度：300 ℃；鞘氣流速：45 arb；輔助氣流速：15 arb；尾氣流速：1 arb；電噴霧電壓：3.0 KV；毛細管溫度：350 ℃；離子透鏡電壓（SLens RF Level）：30%；負模式：加熱器溫度：300 ℃；鞘氣流速：45 arb；輔助氣流速：15 arb；尾氣流速：1 arb；電噴霧電壓：3.2 KV；毛細管溫度：350 ℃；S-Lens RF Level：60%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 26.0 軟件的獨立樣本t檢驗分析血漿和牛奶中脂肪酸組成數(shù)據(jù)，P＜0.05 表示差異顯著。應(yīng)用 Compound Discoverer 軟件（Thermo）對LC?MS檢測數(shù)據(jù)進行提取和預(yù)處理，并通過SIMCA-P 軟件v.13.0（Umetrics，Umea，Sweden）對數(shù)據(jù)進行多位統(tǒng)計分析。 使用主成分分析（principal component analysis，PCA）和偏最小二乘判別分析（partial least squares discriminant analysis，PLS?DA）預(yù)測樣品間的相互關(guān)系，并描述測得變量對模型的貢獻度的數(shù)值VIP（variable importance in the projection）。通過非參數(shù)（Mann-Whitney）檢驗獲得目標(biāo)代謝物的P值，并將 VIP＞1 和P＜0.05作為篩選差異代謝物的條件。使用MetaboAnalyst Web（http：//www.metaboanalyst.ca）對差異代謝產(chǎn)物進行差異倍數(shù)（fold change，F(xiàn)C）及代謝通路富集分析（pathway analysis）。

2 結(jié)果與分析

如圖1 所示，在相同日糧下，兩組奶牛瘤胃pH 發(fā)生了明顯的變異。本試驗將瘤胃pH 平均值最高（pH=6.11，n=4）和最低（pH=5.76，n=4）的奶牛分為耐受組（tolerant，TOL）和易感組（susceptible，SUS）。

圖1 奶牛晨飼后12 h 內(nèi)瘤胃pH 變化Fig. 1 The change in rumen pH within 12 h after morning feeding of dairy cows（mean±SEM，n=4）

2.1 血漿及牛奶脂肪酸組成

由表3 可知，與TOL 組相比，SUS 組奶牛血漿中C16：0、C17：1、C18：0、C18：2n6t、C18：3n3、C24：1及≤C16：0 的脂肪酸比例顯著較高（P＜0.05），而C6：0、C20：0、C20：1 及 C20：4n6 脂肪酸的比例顯著降低（P＜0.05）。如表 4 所示，與 TOL 組比較，SUS 組奶牛乳中的 C10：0、C11：0 和 C12：0 脂肪酸含量顯著升高（P＜0.05），同時也顯著增加了碳鏈長度≤C16：0 脂肪酸的含量（P＜0.05），而 C16：0、C16：1、C18：0、反 9 C18：1（C18：1n9t）、順 9 C18：1（C18：1n9c）、飽和脂肪酸（saturated fatty acid，SFA）、單 不 飽 和 脂 肪 酸（polyunsaturated fatty acid，PUFA）及碳鏈長度＞C16：0 的脂肪酸含量顯著降低（P＜0.05）。

表3 血漿中脂肪酸的組成Table 3 The fatty acid composition in the plasma of the dairy cows（%，n=4）

表4 牛奶中脂肪酸的組成Table 4 The fatty acid composition in the milk of the dairy cows（g·100 g-1，n=4）

2.2 LC?MS 化合物的鑒定和定量

2.2.1 血漿代謝物鑒定及分析 血漿正模式（ESI+）和負模式（ESI?）中分別鑒定出140 和108 個有效代謝物，除去正、負離子模式中重復(fù)測得的代謝物后，共得到208 種不同的小分子代謝物。使用PLS?DA 模型對兩組樣品進行分析，其 ESI+模式下Y軸方向模型的累積解釋率（R2Y）=0.950，模型的累積預(yù)測率（Q2）=0.705，ESI?模式下R2Y=0.981，Q2=0.561，表明模型的可解釋度與預(yù)測能力良好，SUS 與TOL 組奶牛樣品表現(xiàn)出明顯分離，表明兩組血漿代謝物組成差異明顯。

以 VIP＞1，P＜0.05 為篩選條件，共篩選出 8 個差異代謝產(chǎn)物（表 5）。與 TOL 組奶牛相比，SUS 組 L-苯丙氨酸水平顯著降低（P＜0.05），而MG（18：0/0：0/0：0）、9-HODE、12（13）Ep-9-KODE、煙酰胺、異戊基肉堿、磷酸肌酸及L-谷氨酸水平顯著升高（P＜0.05）。代謝通路富集分析顯示，這些差異代謝物主要富集在氨基酸的生物合成與代謝及氮代謝等10 條代謝途徑中。

表5 SUS 和TOL 組奶牛血漿中差異代謝物變化Table 5 The changes of plasma different metabolites between susceptible and tolerant cows（n=4）

2.2.2 牛奶代謝物鑒定及分析 在正、負離子模式下，分別鑒定出116 和108 種小分子化合物，去除重復(fù)值共鑒定出188 種代謝物。PCA 分析結(jié)果顯示，兩組牛奶樣品并沒有區(qū)分開。使用PLS?DA 模型對兩組樣品進行分析，其 ESI+模式下R2Y=0.883，Q2=0.728，ESI?模式下R2Y=0.997，Q2=0.895，表明模型的可解釋度與預(yù)測能力良好，SUS 與TOL 組奶牛樣品表現(xiàn)出明顯分離，表明兩組奶牛乳中的小分子化合物組成有明顯差異。

以VIP＞1，P＜0.05 為篩選條件，共篩選出16 個差異代謝產(chǎn)物，主要為脂質(zhì)、有機酸、糖類及其衍生物及核苷類等物質(zhì)（表6）。與TOL 組奶牛相比，除1-硬脂酰甘油磷酸絲氨酸和鞘氨醇水平在SUS 組奶牛乳中的含量較高外（P＜0.05），其余14 種化合物的含量均顯著降低（P＜0.05）。這些差異代謝物主要參與脂質(zhì)代謝、泛酸與輔酶A 生物合成及核苷酸代謝等途徑，其中甘油磷脂代謝途徑在SUS 奶牛中顯著下調(diào)（P＜0.05）。

表6 SUS 和TOL 組奶牛乳中差異代謝物變化Table 6 The change of milk different metabolites between susceptible and tolerant cows（n=4）

3 討論

本試驗應(yīng)用氣相色譜分析（gas chromatography，GC）和LC?MS 技術(shù)，比較研究了奶牛血漿及奶中的脂肪酸組成和代謝產(chǎn)物差異，旨在探究對亞急性瘤胃酸中毒耐受性不同的奶牛的機體代謝及乳腺代謝的變異性，為奶牛的健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

3.1 血漿中脂肪酸變化

奶牛腸道中的脂肪酸主要來源于日糧中的過瘤胃脂肪酸、瘤胃微生物細胞壁中的脂肪酸和瘤胃微生物降解日糧脂肪過程中形成的脂肪酸［16］。這些腸道脂肪酸部分在小腸黏膜細胞內(nèi)形成乳糜微粒，而后通過淋巴系統(tǒng)進入血液［17］，部分被吸收進入肝臟，在肝臟中形成極低密度脂蛋白膽固醇，并分泌到血液中［18］。血液中這些脂肪酸與載體蛋白結(jié)合，進而形成可以被乳腺攝取的脂蛋白。由此可見，血液是日糧脂肪酸向乳脂肪酸轉(zhuǎn)變的重要樞紐和通道。本研究中發(fā)現(xiàn)兩組奶牛的飽和脂肪酸（SFA）、單不飽和脂肪酸（MUFA）及多不飽和脂肪酸（PUFA）的比例均沒有發(fā)生變化，但在SUS 組中，碳鏈長度≤C16：0 的脂肪酸的比例顯著升高。碳鏈長度≤C16：0 的脂肪酸主要由短鏈脂肪酸（short chain fatty acid，SCFA）和中鏈脂肪酸（middle chain fatty acid，MCFA）組成，SCFA 和MCFA 主要通過小腸黏膜細胞吸收，經(jīng)肝門靜脈進入血液。趙小偉等［19］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧中添加SCFA 和MCFA 可顯著提高奶牛血液中碳鏈長度≤C16：0 的脂肪酸含量，這一結(jié)果說明SUS 組奶牛血漿中碳鏈長度≤C16：0 的脂肪酸的比例增加可能與瘤胃內(nèi)的SCFA 和MCFA 濃度有關(guān)。同時本研究發(fā)現(xiàn)，與TOL 組奶牛相比，SUS 組奶牛血漿中硬脂酸（C18：0）的比例顯著升高。日糧中不飽和脂肪酸進入瘤胃后在微生物氫化作用下，最終產(chǎn)物為硬脂酸，因此奶牛血漿中硬脂酸的比例增加與瘤胃中微生物氫化作用密切相關(guān)。但據(jù)Latham 等［20］報道，在高精料日糧下，瘤胃pH 下降不利于主要的瘤胃氫化菌?溶纖維丁酸弧菌的生長，從而抑制瘤胃不飽和脂肪酸的氫化過程。Li 等［21］的研究也發(fā)現(xiàn)，對SARA 易感的牛群瘤胃中溶纖維丁酸弧菌的相對豐度降低，瘤胃氫化作用減弱。因此，本研究中SUS 組奶牛血漿中硬脂酸的比例增加這一現(xiàn)象有待進一步研究。

3.2 牛奶中脂肪酸變化

奶牛乳脂中的脂肪酸來源主要有兩種途徑，4～16 碳脂肪酸和50%的C16 在乳腺中通過乳腺上皮細胞以乙酸和少量的β-羥基丁酸為基礎(chǔ)從頭合成［22］，而大于16 碳的長鏈脂肪酸（long chain fatty acid，LCFA）和其余的50%的C16 則來源于血液中循環(huán)的脂肪酸［23］。內(nèi)源合成脂肪酸占總脂肪酸的40%～45%，血液轉(zhuǎn)運直接吸收的脂肪酸占總脂肪酸的55%～60%。在本研究中發(fā)現(xiàn)SUS 組奶牛中的C12：0 和≤C16 的短中鏈脂肪酸含量顯著升高，說明SUS 組奶牛乳腺中從頭合成脂肪酸的能力較TOL 組奶牛強。有趣的是，本研究發(fā)現(xiàn)，盡管SUS 組奶牛血漿中的C16：0 和C18：0 的比例顯著較高，但牛乳中檢測到的C16：0 及C18：0 的含量卻顯著低于TOL 組奶牛。有報道顯示，受到SARA 影響的奶牛血液中的總蛋白及低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）濃度會顯著下降，從而降低了乳腺對血液中LCFA 的攝?。?4］。SUS 組奶牛的血液中C16：0 及C18：0 的含量較低，可能也與此相關(guān)。同時本研究發(fā)現(xiàn)，SUS 組奶牛乳中的 C18：1n9t、C18：1n9c、MUFA 以及碳鏈長度＞C16：0 的長鏈脂肪酸含量顯著較低。在 Kara［25］的研究中，奶牛發(fā)生 SARA 會導(dǎo)致乳中 MUFA 和 PUFA 含量下降，而 Xu 等［26］也在類似的研究中發(fā)現(xiàn)，SARA 會引起乳中LCFA 的含量下降，本研究結(jié)果與此一致。綜上，與TOL 組奶牛相比，SUS 組奶牛乳腺組織增強了乳脂從頭合成能力，而直接從血液中攝取LCFA 的含量降低，這與奶牛的機體健康及血漿中LCFA 的含量下降有關(guān)。

3.3 血漿代謝比較

血漿代謝物組成是動物機體代謝的整體表現(xiàn)，是評價動物機體健康及生理狀態(tài)的重要靶標(biāo)物。本試驗中，對血漿中篩選的差異代謝物進行代謝通路分析顯示，這些物質(zhì)顯著富集到10 條代謝通路中，其中大多與氨基酸代謝相關(guān)，包括精氨酸合成、組氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝等。對這些差異代謝通路進一步注釋發(fā)現(xiàn)，精氨酸合成、組氨酸代謝、精氨酸和脯氨酸代謝等代謝途徑的變化，主要體現(xiàn)在L-谷氨酸的水平差異。L-谷氨酸是合成谷氨酰胺、脯氨酸、精氨酸和賴氨酸幾種條件性必需氨基酸的重要前體物質(zhì)。Zhang 等［27］研究發(fā)現(xiàn)，飼喂高精料日糧時，奶牛瘤胃pH 值顯著下降，L-谷氨酸水平顯著升高，氨基酸代謝活動顯著加強。本試驗中，SUS 奶牛血漿內(nèi)L-谷氨酸水平顯著上調(diào)了6.79 倍，推測SUS 奶牛血漿內(nèi)L-谷氨酸水平升高與低瘤胃pH 值下瘤胃中微生物氨基酸代謝活動增強有關(guān)。此外，在精氨酸、組氨酸等氨基酸代謝過程中會產(chǎn)生與之相對應(yīng)的生物胺，如精胺、亞精胺和組胺等［11］。機體內(nèi)適當(dāng)?shù)纳锇窛舛扔欣诰S持內(nèi)臟功能及免疫系統(tǒng)的代謝活性［28］，但高濃度生物胺損害奶牛腸道功能，導(dǎo)致奶牛發(fā)生疾?。?9］。因此，SUS 組奶牛體內(nèi)氨基酸代謝活動增強，亦可能促進生物胺的釋放，進而損害機體健康。此外，SUS 組奶牛血漿中異戊?；鈮A和磷酸肌酸的水平分別上調(diào)了1.86 和75.60 倍。一些研究發(fā)現(xiàn)，肉堿在血液中的游離脂肪酸進入線粒體氧化分解過程中起著重要作用［30］，SUS 組奶牛血漿中異戊酰基肉堿水平的升高，說明其可能促進更多游離脂肪酸進入線粒體氧化供能。研究表明，磷酸肌酸是一種重要的高能磷酸化合物，是高能磷酸基的短期儲存形式，與機體的能量代謝關(guān)系密切［31?32］。SUS 組磷酸肌酸的水平顯著較高，暗示其能量代謝更為活躍。此外，檢測到SUS 組奶牛血漿中L-苯丙氨酸濃度顯著較低。L-苯丙氨酸是機體發(fā)生炎癥反應(yīng)后免疫應(yīng)答的潛在標(biāo)志物，在Yang 等［33］的研究中，奶牛經(jīng)歷SARA 后，血液中的L-苯丙氨酸濃度顯著增加，本研究結(jié)果與此不盡相同，故SUS 組奶牛血漿中L-苯丙氨酸濃度下降的原因還有待進一步的研究。綜上結(jié)果表明，SUS 組奶牛體內(nèi)的氨基酸和能量代謝活動較強，并可能刺激生物胺釋放，損害胃腸道健康。

3.4 牛奶代謝比較

此前，已有研究利用代謝組學(xué)技術(shù)比較發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒奶牛的乳中代謝物變化，發(fā)現(xiàn)發(fā)生SARA 的奶牛的乳代謝產(chǎn)物與正常奶牛有顯著差異［34］。在本研究中發(fā)現(xiàn)SUS 組奶牛乳中甘油酸磷脂乙醇胺、3-磷酸甘油及肌苷2'，3'-環(huán)磷酸酯水平顯著降低。磷脂是牛奶中一類重要的乳化劑和表面活性劑，它和蛋白質(zhì)都是牛奶中脂肪滴膜的主要成分，約占奶牛乳脂的0.5%～1.0%［35］。SUS 組奶牛較低的磷脂水平暗示其乳腺的乳脂合成能力減弱，在此前的研究中也發(fā)現(xiàn)，SARA 易感奶牛的乳脂合成受到抑制，乳脂率較耐受奶牛下降18%［36］。本研究還發(fā)現(xiàn)，SUS 組牛奶中乳清酸及尿酸等5 種有機酸的含量顯著較低，在這5 種有機酸中，乳清酸是牛奶中一類常見的物質(zhì)，在蛋白質(zhì)合成、糖類及脂類物質(zhì)代謝中都起著非常重要的作用［37］。而尿酸是一類嘌呤核苷酸代謝產(chǎn)物［38］，在此前的研究中表明，奶牛泌乳量與奶中尿酸含量成線性正相關(guān)［39］。盡管在本試驗中兩組奶牛的泌乳量因個體差異較大并未表現(xiàn)出差異，但在Jing 等［40］的研究結(jié)果中，SUS 組奶牛泌乳量相較于TOL 組奶牛下降了15.6%。綜上，本研究中兩組奶牛乳中代謝物組成變化暗示其SUS 組奶牛乳脂合成能力可能下降，與此同時乳中磷脂、乳清酸等營養(yǎng)成分含量顯著降低，乳品質(zhì)發(fā)生改變。

4 結(jié)論

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，SARA 耐受性不同的奶牛的血漿和乳中脂肪酸及代謝物組成存在較大差異。較TOL 組奶牛相比，SUS 組奶牛血液中脂肪酸及代謝物組成發(fā)生變化，氨基酸代謝活動較強，SUS 組奶牛乳腺的乳脂從頭合成能力較強，而從血液中攝取長鏈脂肪酸能力減弱，與此同時，SUS 組牛群乳中磷脂、乳清酸等營養(yǎng)物質(zhì)水平下降，乳品質(zhì)下降。