減少人乳頭瘤病毒實(shí)驗(yàn)復(fù)查率研究

羅金秀,劉冬霞,胡新年,歐陽(yáng)慧

廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院優(yōu)生與遺傳實(shí)驗(yàn)診斷中心,廣東清遠(yuǎn) 511500

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種DNA病毒，高危型HPV感染者如果持續(xù)感染，有可能會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸癌。本實(shí)驗(yàn)室HPV檢測(cè)陽(yáng)性率約為17.70%，其中存在一定的復(fù)查率，HPV檢測(cè)復(fù)查降低了實(shí)驗(yàn)室工作效率，浪費(fèi)人力、物力、財(cái)力，也導(dǎo)致患者治療延誤和承受重新檢測(cè)的痛苦。本研究旨在降低HPV檢測(cè)復(fù)查率，提高實(shí)驗(yàn)室工作效率和質(zhì)量，降低檢測(cè)成本，讓患者能夠準(zhǔn)確及時(shí)地了解自身健康狀況，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年7月9-20日來(lái)廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院進(jìn)行HPV檢測(cè)的229例女性宮頸標(biāo)本和2018年10月30日至11月17日的250例女性宮頸標(biāo)本，年齡23～55歲。第一階段研究時(shí)間段較短，是因?yàn)閺?fù)查率太高，本實(shí)驗(yàn)室及時(shí)查找原因，并很快找到了原因并采取相應(yīng)措施；第二階段研究時(shí)間較長(zhǎng)是為了更好地觀察改進(jìn)措施的成效。為了減少兩個(gè)研究時(shí)段氣溫差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，所有研究對(duì)象均在同溫度空調(diào)房取材，在恒溫PCR實(shí)驗(yàn)室操作。

1.2儀器與試劑 潮州凱普生物有限公司生產(chǎn)的人乳頭瘤病毒21分型檢測(cè)試劑盒、HBNP-4801A自動(dòng)DNA提取儀和HBHM-3000s自動(dòng)雜交儀；美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的Real-time PCR system擴(kuò)增儀。

1.3方法 對(duì)2018年7月9-20日來(lái)廣東省清遠(yuǎn)市婦幼保健院進(jìn)行HPV檢測(cè)的229例女性宮頸標(biāo)本，采用反向點(diǎn)雜交方法檢測(cè)HPV-DNA并分型，對(duì)需要復(fù)查的兩大原因繪制柏拉圖進(jìn)行分析，列出復(fù)查原因匯總表，針對(duì)各復(fù)查原因制訂相應(yīng)對(duì)策，經(jīng)過(guò)兩個(gè)多月的整改后，統(tǒng)計(jì)2018年10月30日至11月17日進(jìn)行HPV檢測(cè)的250例女性宮頸標(biāo)本的復(fù)查率，對(duì)兩階段需要復(fù)查情況列出比較表，繪制柏拉圖。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或百分比表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HPV檢測(cè)復(fù)查原因匯總 2018年7月9-20日229例進(jìn)行HPV檢測(cè)的女性需要復(fù)查的有55例，復(fù)查原因包括6個(gè)，見表1。

表1 HPV檢測(cè)復(fù)查原因匯總表(%)

2.2出現(xiàn)非特異點(diǎn)原因 出現(xiàn)非特異點(diǎn)原因有6個(gè)，見表2。

表2 出現(xiàn)非特異點(diǎn)原因匯總表(%)

2.3相鄰位點(diǎn)間多次出現(xiàn)相同陽(yáng)性位點(diǎn)原因 相鄰位點(diǎn)間多次出現(xiàn)相同陽(yáng)性位點(diǎn)原因有4個(gè)，見表3。

表3 相鄰位點(diǎn)間多次出現(xiàn)相同陽(yáng)性原因匯總表(%)

2.4兩時(shí)段需要復(fù)查情況比較 經(jīng)過(guò)對(duì)2018年7月9-20日需要復(fù)查的55例女性進(jìn)行原因分析并采取應(yīng)對(duì)措施后，2018年10月30日至11月17日復(fù)查率由24.02%降至6.80%，兩時(shí)間段需要復(fù)查率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=129.05，P<0.01)，見表4。

表4 兩時(shí)段需要復(fù)查情況比較(n)

3 討 論

HPV感染率在我國(guó)女性中為16.8%，有70%～80%的女性一生中至少感染過(guò)一次HPV，大部分的HPV感染都是暫時(shí)性的，會(huì)在一定時(shí)間內(nèi)自行消退，一般在2年內(nèi)HPV會(huì)被人體的免疫系統(tǒng)清除掉，感染的平均持續(xù)時(shí)間為8～12個(gè)月[1-2]，年齡越大病毒清除時(shí)間越長(zhǎng)[3]，其中HPV16是我國(guó)女性HPV感染最普遍的型別，感染率與宮頸病變呈正相關(guān)[4]。通過(guò)檢測(cè)HPV16的A4家族基因，可以預(yù)測(cè)HPV16陽(yáng)性的女性患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，從而確定高危人群，給宮頸癌的預(yù)防工作提供幫助[5]。

我國(guó)宮頸癌發(fā)病率在全球女性惡性腫瘤的發(fā)病率中已高居第2位[6],且呈上升趨勢(shì)，并且存在地域差異，這種差異與HPV感染和篩查的普及性有關(guān)，但隨著社會(huì)的進(jìn)步和時(shí)間的推移，這種地域差異將會(huì)逐步縮小[7-8]。HPV分子生物學(xué)檢測(cè)方法是宮頸病變的篩查方法之一，篩查對(duì)于惡性腫瘤的防治具有重要意義，可以認(rèn)為是防治的第一步[9],目前發(fā)現(xiàn)的HPV型別已有200余種[10],HPV-DNA病毒載量檢測(cè)可以作為預(yù)測(cè)宮頸病變的常規(guī)檢查手段和病情追蹤及治療后隨診等工作的預(yù)測(cè)手段，對(duì)于預(yù)防宮頸高度病變具有重要價(jià)值[11]。對(duì)于 25 歲以上的女性，高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)檢測(cè)為初篩方案[12]，但HPV-DNA檢測(cè)中存在一定的復(fù)查率，有些是無(wú)法避免的。本研究為了盡可能減少HPV檢測(cè)的復(fù)查率，找出了多方面的原因，針對(duì)各種原因采取相應(yīng)應(yīng)對(duì)對(duì)策，取得了良好效果。從本研究可知，出現(xiàn)非特異點(diǎn)和相鄰位點(diǎn)間多次出現(xiàn)相同陽(yáng)性位點(diǎn)是需要復(fù)查的兩大重要原因。針對(duì)出現(xiàn)非特異點(diǎn)的原因，本實(shí)驗(yàn)室采取了以下措施。(1)儀器清洗不徹底:對(duì)儀器各部件實(shí)時(shí)清洗消毒，對(duì)儀器器材用次氯酸鈉進(jìn)行浸泡、實(shí)驗(yàn)后5 min之內(nèi)用去離子水至少?zèng)_洗6次、用酒精進(jìn)行浸泡，用潔凈紙對(duì)儀器進(jìn)行全方位擦拭；對(duì)重復(fù)使用的儀器設(shè)備用特定刷子進(jìn)行刷洗，向凱普總公司要求派遣工程師進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)督。(2)操作細(xì)節(jié)不注意：每次實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行陰性質(zhì)控，將須注意的細(xì)節(jié)整理成手冊(cè)進(jìn)行提醒，采取移位加樣，制作操作流程圖，每一步進(jìn)行雙人操作制度。針對(duì)相鄰位點(diǎn)間多次出現(xiàn)相同陽(yáng)性的不同原因，本實(shí)驗(yàn)室采取了以下措施。(1)實(shí)驗(yàn)人員操作不熟練：定期進(jìn)行卷面考試、HPV操作培訓(xùn)，請(qǐng)凱普試劑公司人員進(jìn)行儀器原理和解決簡(jiǎn)單問(wèn)題的培訓(xùn)，定期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)心得和經(jīng)驗(yàn)的交流。(2)氣溶膠污染：每次實(shí)驗(yàn)前后對(duì)生物安全柜紫外消毒0.5 h，每晚實(shí)驗(yàn)室固定消毒1 h，雜交儀試驗(yàn)后紫外消毒1 h。(3)移液槍污染：對(duì)移液槍使用人員進(jìn)行嚴(yán)格培訓(xùn)，配備實(shí)驗(yàn)室專用移液槍，使用后及時(shí)消毒。(4)實(shí)驗(yàn)槽壓片不緊：請(qǐng)工程師對(duì)雜交儀進(jìn)行調(diào)試。對(duì)于無(wú)法避免的影響因素，可采取HR-HPV與液基薄層細(xì)胞試驗(yàn)(TCT)聯(lián)合檢測(cè)提高宮頸癌及癌前病變?cè)\斷的準(zhǔn)確性，TCT檢測(cè)中對(duì)于病理形態(tài)學(xué)診斷的不足可由HR-HPV檢查來(lái)彌補(bǔ)，而TCT可補(bǔ)充HR-HPV在細(xì)胞形態(tài)和治療方案上的認(rèn)知與選擇，二者具有相互補(bǔ)充和完善的作用[13]。

綜上所述，為了減少HPV檢測(cè)的復(fù)查率，必須針對(duì)各影響因素采取相應(yīng)對(duì)策，這樣才能做到對(duì)疾病早發(fā)現(xiàn)早治療，滿足患者和臨床的需要。