張家港地區(qū)14 242例女性人乳頭瘤病毒27種分型檢測(cè)和感染情況分析*

周勤峰，陳媛媛，翟麗華，王 蓉

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬?gòu)埣腋坩t(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇蘇州 215600

宮頸癌是我國(guó)女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，幾乎90%的宮頸癌病例是由人乳頭瘤病毒(HPV)感染引起[1]。HPV幾乎是所有宮頸癌的發(fā)病原因，此外，它還會(huì)引發(fā)其他部位的癌癥，比如陰莖、陰道、外陰、肛門(mén)和口咽等[2]。目前已知的HPV有170多種[3]，根據(jù)其致癌潛力將其分為高危型和低危型兩類[4]。由于宮頸癌發(fā)病率位居高位，HPV的感染率也因地區(qū)和人群而異，因此，制訂完善的防治策略，開(kāi)展HPV分型檢測(cè)的流行病學(xué)分析，對(duì)臨床宮頸癌的防治具有重要指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 標(biāo)本來(lái)源于南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬?gòu)埣腋坩t(yī)院2018年1月至2020年8月婦科、婦產(chǎn)科、皮膚科及體檢中心等的14 242例女性，年齡16～86歲。其中，陽(yáng)性病例共3 187例，根據(jù)患者年齡分為3組，其中<30歲555例；30～45歲1 526例；>45歲1 106例。

1.2儀器與試劑 試劑為上海透景生命科技股份有限公司提供的HPV核酸分型檢測(cè)試劑盒，PCR儀為杭州博日公司生產(chǎn)，多功能流式點(diǎn)陣儀為美國(guó)Luminex公司生產(chǎn)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 醫(yī)護(hù)人員以窺陰器暴露宮頸口，用無(wú)菌棉拭子擦去宮頸口分泌物，將宮頸刷伸入宮頸口處，順時(shí)針輕柔轉(zhuǎn)動(dòng)4～5周，慢慢取出宮頸刷，將其放入裝有細(xì)胞保存液的取樣管中，旋緊管蓋，并保持標(biāo)本取樣管直立放置，立即送實(shí)驗(yàn)室檢查或4 ℃短期保存，或-20 ℃長(zhǎng)期保存。

1.3.2標(biāo)本檢測(cè) 采用HPV核酸分型檢測(cè)試劑盒(流式熒光雜交法)進(jìn)行模板制備。(1)DNA模板的提?。簶?biāo)本振蕩混勻，取200 μL樣本混合液加入1.5 mL EP管內(nèi)，置于高速離心機(jī)內(nèi)14 000 r/min離心5 min，棄上清液。加入200 μL核酸提取液，混勻，100 ℃干浴15 min，14 000 r/min離心5 min，吸取5 μL上清液作為PCR的模板，同時(shí)設(shè)立陰性、陽(yáng)性對(duì)照。(2)PCR反應(yīng)液的配置：每個(gè)PCR反應(yīng)液的總體積為15.8 μL,組成為預(yù)混液10.0 μL、引物混合液5.0 μL，聚合酶0.8 μL，試劑混勻備用。(3)加樣：在PCR反應(yīng)管內(nèi)每孔加入15 μL配置好的PCR反應(yīng)液，再加入相應(yīng)5 μL DNA模板，蓋緊蓋子后瞬時(shí)離心使反應(yīng)液集中在PCR反應(yīng)管的底部。(4)PCR擴(kuò)增：將PCR管放入普通PCR儀器，按照試劑說(shuō)明書(shū)指定的擴(kuò)增反應(yīng)條件溫度進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增。(5)雜交檢測(cè)：加入混勻的22 μL微球雜交液，每個(gè)標(biāo)本吸取3 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并加入到相應(yīng)的雜交孔中，封膜，按照說(shuō)明書(shū)的指示溫度和時(shí)間進(jìn)行變性和雜交過(guò)程。小心將封膜撕下，每孔快速加入鏈霉親和素-藻紅蛋白75 μL。加完后將封模重新貼好，48 ℃繼續(xù)孵育15 min。將微孔雜交板迅速轉(zhuǎn)移至預(yù)熱的多功能點(diǎn)陣儀上進(jìn)行檢測(cè)。(6)結(jié)果判讀：當(dāng)標(biāo)本內(nèi)標(biāo)(Globin)信號(hào)>150，且HPV型別特異性探針信號(hào)>150時(shí)，判斷該探針對(duì)應(yīng)的HPV型別為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS26.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)或百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1張家港地區(qū)HPV27種亞型的陽(yáng)性率和在陽(yáng)性標(biāo)本中所占比例情況比較 14 242份標(biāo)本中檢出HPV陽(yáng)性3 187例，總陽(yáng)性率為22.38%(3 187/14 242)。HPV高危型中，陽(yáng)性率前3位的分別是HPV52、HPV16、HPV58；HPV低危型中，陽(yáng)性率前3位的分別是HPV61、HPV81、HPV44。見(jiàn)表1。

2.2HPV多重感染分布情況 HPV單一感染最多見(jiàn)，其構(gòu)成比為71.16%，二重感染構(gòu)成比為18.45%，三重感染構(gòu)成比為6.97%，四重感染構(gòu)成比為2.73%，五重感染構(gòu)成比為0.56%，五重以上感染構(gòu)成比為0.13%。見(jiàn)表2。

表2 HPV多重感染分布情況(n=3 187)

2.3不同年齡段HPV單一感染和多重感染的分布情況比較 3 187份陽(yáng)性標(biāo)本中，<30歲組共有555份，30～45歲組共有1 526份，>45歲組共有1 106份，3個(gè)年齡段均以單一感染多見(jiàn)，各個(gè)年齡段間單一感染比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P >0.05),各個(gè)年齡段間多重感染比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同年齡段HPV單一感染和多重感染的檢出情況比較[n(%)]

3 討 論

近年來(lái)，宮頸疾病的發(fā)病率越來(lái)越高，且發(fā)病人群也越來(lái)越年輕化。如果沒(méi)有及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸異常，很可能會(huì)造成治療時(shí)機(jī)的延誤。尤其是在宮頸癌疾病的早期，大多數(shù)患者臨床癥狀表現(xiàn)不明顯，給臨床診斷帶來(lái)困難[5]。宮頸癌的進(jìn)展與多種因素相關(guān)，其中最主要的誘因?yàn)?HPV 感染[6]。因此，有效的篩查女性HPV感染分型檢測(cè)及恰當(dāng)?shù)母深A(yù)，對(duì)降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率至關(guān)重要。

根據(jù)與宮頸良惡性腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，HPV感染可分為低危型和高危型，前者常導(dǎo)致低度鱗狀上皮內(nèi)病變及良性生殖器疣，后者能導(dǎo)致高度鱗狀上皮內(nèi)病變及宮頸癌。本研究結(jié)果顯示，張家港地區(qū)女性主要感染的HPV高危亞型是HPV52、HPV58、HPV16、HPV53，在陽(yáng)性標(biāo)本中所占比例分別為16.35%、11.48%、11.48%、10.45%，這與歐陽(yáng)敏秀等[7]報(bào)道的珠海市女性HPV感染的主要高危亞型為HPV52、HPV16、HPV53基本一致，以及與楊怡艷等[8]報(bào)道的廣西梧州女性HPV感染的主要高危亞型結(jié)果相似。

此外，本研究顯示，張家港地區(qū)14 242份標(biāo)本中HPV陽(yáng)性率為總22.38%(3 187/14 242),且HPV感染以單一感染為主，其構(gòu)成比為71.16%(2 268/3 187)。不同年齡段HPV單一感染和多重感染的檢出情況比較發(fā)現(xiàn)，感染人數(shù)最多的年齡段集中于30～45歲，其次為>45歲以上。主要原因有可能為30～45歲女性處于性生活活躍期，而45歲之后，由于女性開(kāi)始進(jìn)入絕經(jīng)期，陰道微生態(tài)變化及自身免疫力開(kāi)始降低，從而導(dǎo)致HPV感染[9]。因此，應(yīng)該重視和倡導(dǎo)不同年齡段女性及時(shí)進(jìn)行HPV基因感染篩查工作，做到早發(fā)現(xiàn)早治療。

HPV感染分型分布情況具有一定的地區(qū)差異性，開(kāi)展HPV感染27種分型檢測(cè)及感染情況分析有助于發(fā)現(xiàn)本地區(qū)HPV感染的主要型別，為臨床治療提供有力依據(jù)，同時(shí)也將會(huì)對(duì)我國(guó)宮頸癌疫苗的研發(fā)具有指導(dǎo)性意義。