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    不同檢測時間對原料乳中嗜冷菌檢測結(jié)果的影響

    2023-02-14 09:46:54張鵬博李智星張逸雪劉文楷
    中國乳業(yè) 2023年1期
    關(guān)鍵詞:牧場間隔梯度

    張鵬博,李智星,魏 勇,張逸雪,劉文楷,蔣 松*

    1 石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子 832000

    2 新疆天潤乳業(yè)股份有限公司,新疆烏魯木齊 832063

    0 引言

    嗜冷菌作為影響牛奶質(zhì)量的一類微生物,其數(shù)量的多少直接影響牛奶的風(fēng)味、口感以及成品乳的保質(zhì)期[1]。牛奶中嗜冷菌數(shù)量最佳的范圍是在1.0×103CFU/mL以下,嗜冷菌超過1.0×103CFU/mL則會與牛奶中的乳蛋白、乳脂肪等作用生成酶,產(chǎn)生凝結(jié)塊及脂肪氫化味[2]。在我國現(xiàn)行的生鮮乳收購標(biāo)準(zhǔn)《GB19301—2010 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 生乳》中規(guī)定,生鮮乳中微生物菌落數(shù)在2.0×106CFU/mL 以下為合格乳。但一些歐美國家則以嗜冷菌在1.0×103CFU/mL以下為生鮮乳的收購標(biāo)準(zhǔn),因此國內(nèi)乳品企業(yè)愈發(fā)地重視嗜冷菌的防控,部分優(yōu)秀乳品企業(yè)提高了嗜冷菌的合格標(biāo)準(zhǔn),以進(jìn)一步保障乳制品的質(zhì)量安全。

    我國乳及其制品中嗜冷菌的菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)測定方法為《NY/T 1331—2007 乳與乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜熱需氧芽孢數(shù)的測定》中的MPC平板計數(shù)法,即取乳樣加入指定培養(yǎng)基后于6.5 ℃條件下培養(yǎng)10 d,該方法計數(shù)結(jié)果準(zhǔn)確[3]。但國標(biāo)檢測方法周期長,追溯問題原因困難,各乳品企業(yè)執(zhí)行的檢測標(biāo)準(zhǔn)不同,對原料乳中嗜冷菌數(shù)量的檢測方法也不同?,F(xiàn)階段有直接熒光過濾法、流式細(xì)胞術(shù)和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)法等直接檢測方法,但也均有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。此外,以上方法的從生鮮乳采樣到檢測之間都會存在一定的時間間隔,間隔時間不同,均會對檢測結(jié)果造成不同程度的影響。因此,本研究對比了《NY/T 1331—2007 乳與乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜熱需氧芽孢數(shù)的測定》中的MPC中平板計數(shù)法在不同檢測時間時,原料乳中嗜冷菌水平差異,為提高原料乳中嗜冷菌檢測的準(zhǔn)確性,制定更加合理的嗜冷菌檢測標(biāo)準(zhǔn)流程提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 主要試劑及設(shè)備

    嗜冷菌培養(yǎng)基,北京陸橋計數(shù)股份有限公司;生化培養(yǎng)箱,上海博遠(yuǎn)醫(yī)藥生物儀器股份有限公司。

    1.2 樣品采集

    本試驗(yàn)采集新疆部分地區(qū)的10個牧場(其中3個現(xiàn)代化牧場、4個傳統(tǒng)牧場、3個養(yǎng)殖小區(qū))的奶罐車生鮮奶樣,共計120 份(現(xiàn)代化牧場39 份、傳統(tǒng)牧場51 份、養(yǎng)殖小區(qū)30 份),奶罐車混合生鮮乳樣本收集前按照奶樣取樣攪拌標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行完全混合,遵守?zé)o菌采樣規(guī)程,選取上中下三等分混合采集于無菌采樣瓶中采樣后搖勻即時放入4 ℃冰箱中保存。

    1.3 檢測方法

    同一份奶樣,在取樣后即時進(jìn)行檢測,之后將樣品放入4℃冰箱中保存,在取樣后12 h和24 h后再次進(jìn)行檢測。

    檢測過程嚴(yán)格按照《NY/T 1331—2007 乳與乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜熱需氧芽孢數(shù)的測定》中的MPC中平板計數(shù)法進(jìn)行檢測。檢測前準(zhǔn)備高溫滅菌后的培養(yǎng)皿、無菌吸管及稀釋液,在無菌環(huán)境下,對樣品分別進(jìn)行10-2和10-3倍稀釋,每個稀釋梯度做3個平行,結(jié)果采取平均值,并以相應(yīng)稀釋液做空白對照,接種于培養(yǎng)皿后,待其凝固后放置6.5 ℃的低溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d。10 d后將培養(yǎng)好的嗜冷菌用平板計數(shù)法計數(shù),粘連菌群不分層記作1,分層另計數(shù),最終統(tǒng)計樣品總數(shù)。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    本試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)使用SPSS19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,并利用Duncan法進(jìn)行多重比較,以P<0.05表示差異顯著;以P>0.05表示差異不顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 10-2稀釋梯度下相同養(yǎng)殖模式牧場不同時間嗜冷菌檢測結(jié)果對比

    由表1可見,在10-2稀釋梯度下,現(xiàn)代化牧場即時檢測結(jié)果和間隔12 h和間隔24 h的檢測結(jié)果差異均顯著(P<0.05)。傳統(tǒng)牧場即時檢測結(jié)果與間隔12 h和間隔24 h的檢測結(jié)果差異顯著(P<0.05);間隔12 h與間隔24 h的檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。而養(yǎng)殖小區(qū)即時檢測結(jié)果與間隔24 h的檢測結(jié)果差異顯著(P<0.05),與間隔12 h的檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05);間隔12 h和間隔24 h檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。

    表1 10-2稀釋梯度下相同養(yǎng)殖模式牧場不同時間嗜冷菌檢測結(jié)果對比

    2.2 10-3稀釋梯度下相同養(yǎng)殖模式牧場不同時間嗜冷菌檢測結(jié)果對比

    由表2可見,在10-3稀釋梯度下,現(xiàn)代化牧場即時檢測結(jié)果和間隔12 h和間隔24 h的檢測結(jié)果差異均顯著(P<0.05)。傳統(tǒng)牧場即時檢測結(jié)果與間隔12 h和間隔24 h的檢測結(jié)果差異顯著(P<0.05);間隔12 h與間隔24 h的檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。而養(yǎng)殖小區(qū)即時檢測結(jié)果與間隔24 h的檢測結(jié)果差異顯著(P<0.05),與間隔12 h的檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05);間隔12 h和間隔24 h檢測結(jié)果差異不顯著(P>0.05)。

    表2 10-3稀釋梯度下相同養(yǎng)殖模式牧場不同時間嗜冷菌檢測結(jié)果對比

    3 討論

    嗜冷菌是一類在低溫條件下仍可以生長的微生物[4]。這就導(dǎo)致了原料乳在4 ℃保存時嗜冷菌仍能生長繁殖。嗜冷菌在牛奶中與其主要營養(yǎng)成分作用生成耐熱酶,并且這些耐熱酶無法通過高溫降解,導(dǎo)致商品乳中營養(yǎng)成分大大的遭到破壞。人們在不斷地追求牛奶品質(zhì)的提升,將原料乳中嗜冷菌菌落總數(shù)控制在合格的范圍內(nèi)即可對牛奶品質(zhì)造成最小的影響。由此,檢測嗜冷菌對牛奶品質(zhì)的判定就顯得尤為重要[5]。

    根據(jù)各牧場的數(shù)據(jù)反饋,牧場實(shí)驗(yàn)室嗜冷菌檢測總數(shù)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于乳品廠實(shí)驗(yàn)室檢測,主要原因有兩點(diǎn):其一,新疆地區(qū)占地面積較大,原料乳在運(yùn)輸中路途遙遠(yuǎn),雖然運(yùn)輸過程會保證奶罐溫度恒定,但原料乳是嗜冷菌良好的培養(yǎng)基,這使得嗜冷菌仍然會生長繁殖[6],而這會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室檢測與牧場自檢的結(jié)果相差甚大。其二,考慮到原料乳中需要檢測的指標(biāo)較多,采樣后不能即時進(jìn)行微生物檢測,樣品需要冷藏,與上述原因同理,導(dǎo)致樣品中嗜冷菌不斷繁殖。本研究結(jié)果表明,在10-2和10-3兩個稀釋梯度下,3個不同模式牧場嗜冷菌結(jié)果均隨著檢測間隔時間的增加而增加,其中現(xiàn)代化牧場和傳統(tǒng)牧場嗜冷菌即時檢測結(jié)果和間隔12 h和24 h的檢測結(jié)果均存在顯著性差異,而由于養(yǎng)殖小區(qū)多為散戶家養(yǎng),管理不統(tǒng)一,導(dǎo)致原料奶的嗜冷菌菌落總數(shù)差異較大,又因平板計數(shù)法統(tǒng)計菌落總數(shù)的局限性,導(dǎo)致養(yǎng)殖小區(qū)嗜冷菌即時檢測和間隔24 h差異顯著(P<0.05),間隔12 h檢測結(jié)果與即時檢測和間隔24 h檢測結(jié)果無顯著差異(P>0.05)。

    由此可見,雖然降低牛奶嗜冷菌數(shù)量的主要任務(wù)在于牧場的嚴(yán)格把控,但數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性在于檢測人員對國標(biāo)法的嚴(yán)格執(zhí)行,因此在不能縮短奶車運(yùn)輸?shù)那疤嵯?,可以縮短采樣至檢測的時間間隔,使數(shù)據(jù)更具有說服力,以確定嗜冷菌污染的真正原因。在4 ℃冷藏原料乳的條件下,嗜冷菌仍能較快的生長繁殖,并逐漸演變成原料乳中的優(yōu)勢菌群,故應(yīng)縮短生鮮乳從擠出的一刻到消殺滅菌的時間,以有效地控制原料乳中嗜冷菌的增長。同時,牧場也應(yīng)對奶廳進(jìn)行嚴(yán)格規(guī)范的衛(wèi)生管理,對工作人員加強(qiáng)培訓(xùn),從根本上解決牛奶中嗜冷菌基數(shù)大的問題[7]。

    4 結(jié)論

    檢測間隔時間對原料乳中嗜冷菌檢測結(jié)果存在影響,樣品檢測間隔時間越久,最終檢測出結(jié)果越大,導(dǎo)致最終結(jié)果不具有準(zhǔn)確性和說服性。

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