貴州白山羊血液生理生化指標(biāo)及免疫球蛋白G測定與分析

鄒明 林漢卿 鄧華成 張?zhí)A 袁子龍 徐雄真 徐義洲 覃廷玉* 汪德生 *

1.貴州省思南縣動物疫病預(yù)防控制中心，貴州銅仁 565100

2.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025

貴州白山羊是一個古老而優(yōu)良的地方山羊品種，1989年被收錄于《中國羊品種志》，屬哺乳綱（Mammalia）偶蹄目（Artiodactyla）?？疲˙ovidae）山羊?qū)伲–apra），主要產(chǎn)于貴州省烏江流域中下游的思南、沿河、務(wù)川等縣。貴州白山羊體型較大、育肥快、抗逆性強(qiáng)、繁殖力強(qiáng)、板皮質(zhì)量好，羊肉肉質(zhì)細(xì)嫩、膻味輕、蛋白質(zhì)含量高、脂肪含量低，屬皮肉兼用型羊品種，1997 年被貴州省科學(xué)技術(shù)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督管理局組織評估鑒定為貴州省地方優(yōu)良品種。

血液生理生化指標(biāo)與動物代謝、營養(yǎng)及健康狀況有著密切聯(lián)系，是及時發(fā)現(xiàn)動物健康異常的重要監(jiān)測手段，可反映不同物種或品種間的種質(zhì)特性，已成為評價畜禽生產(chǎn)性能、疾病診斷和飼養(yǎng)管理的重要參考依據(jù)。試驗(yàn)對不同海拔、不同性別的貴州白山羊血液生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定和比較，以期完善貴州白山羊血液生化常值，揭示貴州白山羊的種質(zhì)特性，為疾病診斷提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物分別在思南縣塘頭鎮(zhèn)（海拔442m）及張家寨鎮(zhèn)（海拔956m）自然放牧羊場隨機(jī)抽取10只健康的貴州白山羊，公母比為1∶1，平均年齡14.3月齡（最大36月齡、最小4月齡），平均體重25.10 kg（最大體重45 kg、最小體重9.50 kg）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 血液樣品的采集和處理20 只健康山羊在空腹?fàn)顟B(tài)下頸靜脈采血，分別用2mL EDTA 抗凝管紫色頭蓋管、5mL普通血清管收集血液。采血后抗凝管放入冷藏箱；普通血清管置于常溫下凝血，在鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站分離血清于血清離心管內(nèi)，將血清離心管與抗凝管樣品一同放入冷藏箱內(nèi)運(yùn)送至農(nóng)業(yè)部動物疫情測報思南測報站獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測為陰性確定健康后，將血液、血清送檢測機(jī)構(gòu)進(jìn)行生理生化指標(biāo)測定，在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室完成IgG 測定并分析。

1.2.2 血液生理指標(biāo)的測定用全自動血液分析儀（BC-6800）測定山羊血液有形成份指標(biāo)，每份血樣重復(fù)測定3 次，取平均值。

1.2.3 血清生化指標(biāo)測定用全自動生化分析儀（日立-7180 型）測定血清生化指標(biāo)，每份血樣重復(fù)測定3 次，取平均值。

1.2.4 血清電解質(zhì)及微量元素測定用全自動電解質(zhì)分析儀（奧迪康公司AC9000 系列）測定血清中的電解質(zhì)，用博暉全血清多元素分析儀BH5300 原子吸收光譜儀測定血清中微量元素含量，同樣做3 個重復(fù)，取平均值。

1.2.5 血清免疫球蛋白（IgG）測定用深圳子科生物科技有限公司生產(chǎn)的山羊免疫球蛋白G（IgG）ELISA 試劑盒（Goat IgG ELISA KIT）測定血清免疫球蛋白，操作過程照說明書進(jìn)行。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 統(tǒng)計軟件分析處理，數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，用Excel 無重復(fù)雙因素分析方法做差異顯著性分析。

2 結(jié)果

2.1 血液生理指標(biāo)測定結(jié)果對20 只貴州白山羊的血液生理指標(biāo)進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。貴州白山羊的紅細(xì)胞（RBC）、淋巴細(xì)胞比率（LYMPH%）測定值明顯低于參考值。經(jīng)差異性分析發(fā)現(xiàn)，貴州白山羊公羊的血紅蛋白（HGB）極顯著高于母羊（P<0.01），其余指標(biāo)公母間無明顯差異（P>0.05）。

表1 貴州白山羊血液生理指標(biāo)測定結(jié)果

2.2 血清生化指標(biāo)測定結(jié)果對20 只貴州白山羊的血清生化指標(biāo)進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。貴州白山羊的堿性磷酸酶（ALP）和肌酸激酶（CK）值明顯高于正常值，淀粉酶（AMY）和肌酐（CRE）值明顯低于參考值，其余指標(biāo)與參考值出入不大。公母羊之間生化指標(biāo)無明顯差異（P>0.05）。

表2 貴州白山羊血清生化指標(biāo)測定結(jié)果

2.3 血清電解質(zhì)及微量元素測定結(jié)果貴州白山羊的血清電解質(zhì)及微量元素測定結(jié)果見表3。鐵含量明顯低于參考值，銅、鉀含量略高于正常值，其余指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)。公母羊之間無明顯差異（P>0.05）。

表3 貴州白山羊血清電解質(zhì)及微量元素測定結(jié)果

2.4 血清免疫球蛋白測定結(jié)果

IgG 測定結(jié)果見表4，編號1 至5 號的羊來自塘頭鎮(zhèn)（海拔442m）某羊場，6 至10 號來自張家寨鎮(zhèn)（海拔956m）羊場。貴州白山羊公母羊之間IgG 值無明顯差異（P>0.05），塘頭鎮(zhèn)羊場的羊IgG 值極顯著高于張家寨鎮(zhèn)羊場（P<0.01）。

表4 貴州白山羊血清免疫球蛋白測定統(tǒng)計表

3 討論

研究測定貴州白山羊公羊的HGB 極顯著高于母羊（P<0.01），說明性別對貴州白山羊血紅蛋白含量存在明顯影響。動物體內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)通常受品種、性別、營養(yǎng)狀況、海拔等因素的影響，海拔高的地區(qū)含氧量低，動物的RBC、HGB 和HCT都會代償性增加。本次試驗(yàn)測定的貴州白山羊RBC值為（0.22±0.07）×1012/L，HGB值為（88.36±12.47）g/L，HCT 值為（1.04±0.30）%。田興貴等人測定的貴州黑山羊母羊HGB 值為（142.34±30.4）g/L，HCT值為（0.22±0.07）%，黃倩等人測定的貴州白山羊RBC、HGB值分別為（11.90±0.72）×1012/L、（82.83±3.22）g/L。張文麗等測定會理黑山羊血液的RBC、HGB 分別為（14.14±2.79）×1012/L、（112.90±12.02）g/L；付志新等測定波爾山羊血液的RBC、HGB 分別為（10.21±1.80）×1012/L、（73.56±10.38）g/L。由以上數(shù)據(jù)可見，此次測定的貴州白山羊HCT 值高于貴州黑山羊，HGB 數(shù)值居中，RBC 值明顯過低，這可能與采樣個體的營養(yǎng)狀況有關(guān)，也可能是受測定方式及血液新鮮程度等因素的影響，采樣時正值炎熱夏季，也可能是造成貧血的原因之一。日后的飼養(yǎng)中應(yīng)適當(dāng)補(bǔ)充飼料營養(yǎng)，注意防暑。

ALP 屬于成骨細(xì)胞分泌的一組磷酸單酯水解酶，主要分布在骨骼和肝臟中，血液中ALP 的含量與心肝的生理功能及骨骼發(fā)育密切相關(guān)。CK 是人體中的重要激酶，在骨骼肌、心臟、腦部的含量較高，與肌肉收縮、神經(jīng)功能、細(xì)胞的能量反饋調(diào)節(jié)、有氧耐力有關(guān)，運(yùn)動后骨骼肌超微結(jié)構(gòu)改變可導(dǎo)致血清CK 增高。貴州白山羊的ALP 和CK 含量明顯高于正常值，原因可能是貴州山區(qū)采用自然放牧的飼養(yǎng)模式，運(yùn)動量充足，骨骼發(fā)育較好。AMY 活性增高是急性胰腺炎的重要標(biāo)志，也可提示腎功能出現(xiàn)嚴(yán)重障礙，AMY 活性降低則可能發(fā)生肝炎、肝硬化等肝臟疾病。CRE 是肌酸的代謝產(chǎn)物，由腎小球排泄，不被腎小管重吸收，因此血清肌酐濃度是評價腎小球?yàn)V過功能的重要指標(biāo)。本次測定的羊AMY 及CRE值較低，提示羊肝腎功能可能出現(xiàn)問題。

微量元素是動物機(jī)體必不可需的一類營養(yǎng)物質(zhì)，參與營養(yǎng)物質(zhì)代謝，有調(diào)節(jié)體內(nèi)滲透壓和酸堿平衡、維持細(xì)胞膜滲透壓及神經(jīng)肌肉興奮性、幫助微生物菌群正常繁殖等作用。本次測定的鐵含量較低，提示抽樣的羊群可能出現(xiàn)缺鐵性貧血?？山o羊群補(bǔ)飼富含蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)、鐵的飼料，也可向圈舍內(nèi)灑些紅土或細(xì)沙。嚴(yán)重時可口服硫酸亞鐵、焦磷酸鐵和乳酸鐵，或注射右旋糖酐鐵、鐵鈷注射液和山梨醇注射液。

IgG 主要是由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞合成，常以Ig 單體形式存在，是動物血清中質(zhì)量濃度最高的免疫球蛋白，約占血清Ig 總量的75%～80%，有抗菌、抗病毒、抗毒素等作用，是評價動物免疫功能的重要指標(biāo)。已有研究表明，海拔對人體體內(nèi)IgG 濃度有明顯影 響，但尚無海拔對畜禽體內(nèi)IgG 濃度影響的研究。本次測定顯示，較低海拔羊場的羊IgG 濃度極顯著高于高海拔羊場（P<0.01），表明海拔對動物體液免疫功能有明顯影響。

4 小結(jié)

已有大量研究對不同品種、年齡的羊生理生化指標(biāo)進(jìn)行測定分析，但性別對貴州白山羊生理生化指標(biāo)的影響及海拔對IgG 濃度的影響尚未見研究。本研究表明，貴州白山羊公羊的血紅蛋白量極顯著高于母羊，其余生理生化指標(biāo)受性別影響不大；低海拔地區(qū)羊的IgG濃度極顯著高于高海拔地區(qū)，性別對IgG 濃度無明顯影響。