食用菌栽培害螨害長頭螨的一種觀察新方法*

蘭清秀 ，柯斌榕 ，馬 璐 ，盧政輝 **，范青海

（1．福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，福建 福州 350014；2．特色食用菌繁育與栽培國家地方聯(lián)合工程研究中心，福建 福州 350014；3．新西蘭第一產(chǎn)業(yè)部植物與環(huán)境保護實驗室，新西蘭 奧克蘭 1140）

害長頭螨（Dolichocybe perniciosa） 隸屬于蛛形綱（Arachnida）蜱螨亞綱（Acari）絨螨目（Trombidiformes） 長頭螨科（Dolichocybidae），是食用菌的重要害螨之一；主要為害金針菇（Flammulina velutipes）、黑木耳 （Auricularia auricula）、毛木耳（Auricularia polytricha）、香菇 （Lentinula edodes）、銀耳 （Tremella fuciformis） 和靈芝 （Ganoderma lingzhi）等木生型食用菌[1]。

我國學(xué)者鄒萍對害長頭螨的形態(tài)特征進行了詳細(xì)描述，并對其生活史、為害習(xí)性和防治方法進行了簡單闡述[2]。害長頭螨屬膨腹型螨類，其生活史與大部分螨類有明顯差別，一生只有卵和成螨2個時期，無幼螨期和若螨期。成螨發(fā)育時后端膨大，形成膨腹體，膨腹體內(nèi)產(chǎn)生數(shù)十粒至數(shù)百粒卵；卵在母體內(nèi)直接發(fā)育為成螨，當(dāng)膨腹體內(nèi)絕大部分成螨從后半體端部鉆出，母體發(fā)育終止[3]。18℃～28℃是害長頭螨較適宜的繁殖發(fā)育溫度。適宜的濕度范圍較廣，溫度25℃，22%～92%相對濕度下，害長頭螨均能完成膨腹繁殖[4]。該螨繁殖速度快，耐寒和耐饑能力強，喜溫暖和潮濕的環(huán)境；當(dāng)環(huán)境干燥時，會轉(zhuǎn)入休眠狀態(tài)，肉眼難以發(fā)現(xiàn)，一旦條件適宜，將會迅速爆發(fā)。該螨的危害貫穿于食用菌栽培整個周期，即可為害栽培種，還能侵染母種和原種[3]。害長頭螨不僅取食菌絲和子實體，還能取食和傳播木霉、黑孢霉、鐮刀菌等雜菌，一旦發(fā)生，常令栽培者束手無策，造成重大經(jīng)濟損失[5-7]。由于害長頭螨喜歡鉆入培養(yǎng)料中取食，形成膨腹體進行繁殖，藥劑不易直接接觸到螨。

針對害長頭螨的防治，目前主要是在菌絲培養(yǎng)階段定時噴施消毒劑，如采用“炔螨特”進行空間消毒，減少蟲源，并在開袋后使用阿維菌素加聯(lián)苯菊酯噴霧等方法進行防治，但藥劑防治常導(dǎo)致菌絲和子實體損傷，防治效果不佳[8-9]。食用菌生產(chǎn)者對該螨的防控處于被動狀態(tài)，害長頭螨的潛在威脅十分突顯，然而我國目前對食用菌膨腹型螨類的生物學(xué)特性研究較少，急需加強有關(guān)膨腹型螨類繁殖發(fā)育規(guī)律和爆發(fā)為害預(yù)防措施的研究。

有關(guān)害長頭螨在不同溫度、濕度和寄主條件下的生長發(fā)育情況、雌成螨膨腹體的形成和壽命、抗逆能力、爆發(fā)性發(fā)生原因等的研究僅見少量報道[1-3]。主要原因在于害長頭螨未膨腹時個體微小，雌螨長約為0.17 mm、寬約為0.10 mm，雄螨長約為0.14 mm、寬約為0.08 mm[1]。害長頭螨形成膨腹體后，輕輕觸碰就可能導(dǎo)致破裂。然而目前未見可行的觀察方法，操作起來非常困難。為找到簡便的觀察方法，經(jīng)過反復(fù)試驗，摸索出了一種便于觀察害長頭螨發(fā)育繁殖過程的新方法切孔法。通過詳細(xì)介紹該方法，旨在明晰害長頭螨的繁殖發(fā)育特征，以及為膨腹型螨類的研究提供技術(shù)參考。

1 試驗材料

1.1 供試螨

害長頭螨，從福建省福州市羅源縣金針菇菌包中獲得，純化后接入長滿金針菇菌絲的玻璃培養(yǎng)皿或試管中，置于25℃、相對濕度為（75±5）%的無光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2 供試食用菌

試驗用金針菇為福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所保存種。將食用菌菌絲接入直徑3 cm、高1 cm，內(nèi)含PDA（馬鈴薯∶葡萄糖∶瓊脂=10∶1∶1） 培養(yǎng)基的塑料培養(yǎng)皿中，置于25℃、相對濕度為（75±5）%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲長滿培養(yǎng)皿，備用。

1.3 試驗方法

先將食用菌菌絲，接入裝有已滅菌的PDA培養(yǎng)基的小培養(yǎng)皿上，待菌絲長滿，在長滿菌絲的培養(yǎng)基中間切一個直徑為1 cm的圓孔，使圓孔壁傾斜30°～45°，然后用經(jīng)過削細(xì)的鴨羽毛尖端（約0.2 mm），輕輕挑取1只或30只害長頭螨雌成螨至圓孔中。培育條件為溫度25℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 害長頭螨個體培養(yǎng)

將1只害長頭螨雌螨接入長有金針菇菌絲的培養(yǎng)皿，重復(fù)20次。害長頭螨雌螨個體培養(yǎng)發(fā)育周期見表1。

表1 害長頭螨雌螨個體培養(yǎng)發(fā)育周期Tab.1 The reproductive cycle of Dolichocybe perniciosa female by individual feeding

從表1可以看出，24 h后超過60%的螨已固定位置取食。其余螨繼續(xù)爬行，少數(shù)螨死亡。第3天，螨的活動趨于穩(wěn)定，固定取食率達90%以上，膨腹率逐漸升高。第10天開始，膨腹體開始產(chǎn)出少量成螨，膨腹率在第15天達最高。溫度25℃，相對濕度為（75±5）%條件，個體培養(yǎng)害長頭螨，以有成螨爬出為標(biāo)準(zhǔn)，完成一代最快為10 d。

2.2 害長頭螨群體培養(yǎng)

溫度25℃，將從同一膨腹體內(nèi)剛爬出的30只害長頭螨雌螨接入內(nèi)含金針菇菌絲，且中間切有小圓孔的培養(yǎng)皿內(nèi)，重復(fù)4次。害長頭螨雌螨群體培養(yǎng)發(fā)育周期見表2和圖1。

表2 害長頭螨雌螨群體培養(yǎng)發(fā)育周期Tab.2 The reproductive cycle of Dolichocybe perniciosa female by group feeding

從表2和圖1可以看出，24 h后，雌螨陸續(xù)開始固定取食，固定在菌絲表面取食，最快48 h開始膨腹；第6天，可清晰觀察到菌絲表面的膨腹體（圖1a）。也可能固定在圓孔環(huán)壁上取食并膨腹，這時后端膨大的膨腹體剛好落在中間小圓孔內(nèi)（圖1b），通過生物顯微鏡便可清晰地觀察到膨腹體內(nèi)卵發(fā)育至成螨的整個過程。試驗條件下，群體培養(yǎng)害長頭螨，完成一代最快需要6 d～7 d[4]。

圖1 害長頭螨膨腹體Fig.1 Physogastric body of Dolichocybe perniciosa

3 討論與結(jié)論

在食用菌栽培過程中，害螨常與害蟲、病菌混合發(fā)生。目前已知對食用菌造成較嚴(yán)重危害的主要有粉螨科（Acaridae）、跗線螨科（Tarsonemidae）、矮蒲螨科（Pygmephoridae）、薄口螨科（Histiostomatidae） 和長頭螨科（Dolichocybidae） 等螨類。其以若螨、成螨直接取食菌絲或子實體，甚至把菌絲吃光，同時傳播大量病菌，造成不發(fā)菌或出現(xiàn)“退菌”現(xiàn)象，蛀食食用菌子實體根部形成空洞，影響鮮菇品質(zhì)，造成重大經(jīng)濟損失。

食用菌上發(fā)生的大部分的螨類一生有卵期、幼螨期、前若螨期、后若螨期和成螨期5個時期。螨類常見的繁殖方式有兩性生殖和孤雌生殖。然而害長頭螨是膨腹型螨類，屬營卵胎生，當(dāng)其膨腹前即固定取食，不再移動位置，這與其他螨類的發(fā)育繁殖方式完全不同[10-12]。

試驗表明，害長頭螨群體培養(yǎng)時完成一代的時間比個體培養(yǎng)時間短，推測害長頭螨喜群體生活，這也符合生產(chǎn)中害長頭螨一旦爆發(fā)就成片為害的特點。如果雌螨不在圓孔的環(huán)壁上取食，可將已固定取食的膨腹體連同菌絲塊一起挑至新的切有上述圓孔培養(yǎng)皿中，繼續(xù)培養(yǎng)，即可清晰地觀察到害長頭螨在膨腹體內(nèi)由卵發(fā)育至成螨的生長發(fā)育全過程，便于得到同一時期的大量螨源。

在實際操作過程中，經(jīng)過重復(fù)驗證，發(fā)現(xiàn)害長頭螨常在環(huán)壁上固定取食，這便于害長頭螨的觀察和試驗統(tǒng)計。然而將1只在菌絲表面已經(jīng)固定取食的害長頭螨膨腹體連同菌絲塊一起挑至新的切有上述圓孔的培養(yǎng)皿中時，有些膨腹體經(jīng)移動后發(fā)育延遲，有些則可正常發(fā)育，由此推斷害長頭螨個體對環(huán)境的變化有不同的敏感度，個體發(fā)育間可能存在差異。同樣的環(huán)境條件下，害長頭螨的膨腹體卻形態(tài)多樣，且個體的膨腹速度不完全一致[13]，導(dǎo)致這些情況的原因還不明確，有待進一步探究。

此外，試驗觀察到害長頭螨取食白色的菌絲后，體色轉(zhuǎn)為白色，按常規(guī)方法將害長頭螨接入到長滿白色菌絲的培養(yǎng)皿或菌袋中，需觀察害長頭螨膨腹體內(nèi)卵至成螨的具體發(fā)育過程很困難，無法準(zhǔn)確判斷膨腹體內(nèi)的卵和成螨的數(shù)量，無法獲得試驗所需的同一時期大量螨源，從而批量挑取成螨。這種觀察新方法突破了這些難點。適用于膨腹型螨類，特別是取食食用菌菌絲的膨腹型螨類，如害長頭螨、申菇長頭螨、木耳盧西螨[14-15]的生物學(xué)特性研究，具有實際應(yīng)用價值。