食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑對(duì)真姬菇栽培的影響*

林勇

（福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 福州 350101）

凝集素具有免疫調(diào)節(jié)和抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，同時(shí)還參與生物體內(nèi)的一些關(guān)鍵生理過(guò)程，是研究生物體內(nèi)分化和分子識(shí)別等生理生化在生命規(guī)律重要功能作用，已成為生物研究的熱點(diǎn)之一[1-4]。

從凝集素的研究來(lái)看，其顯著地抑制人乳腺癌細(xì)胞、人眼成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞的增殖，并且這些抑制是可逆的而且其細(xì)胞學(xué)毒性不明顯[5-9]，這些特殊的活性使其在未來(lái)可能成為治療腫瘤和組織增生的新型藥物。凝集素促進(jìn)菌種菌絲分化扭結(jié)的情況的研究卻很少，國(guó)內(nèi)外對(duì)于食用菌凝集素的研究多在其分離純化與其部分的理化性質(zhì)上進(jìn)行[10-13]，對(duì)其實(shí)際應(yīng)用于菌種自身的研究較少，對(duì)凝集素作用于不同菌種的菌絲分化的則少有研究。主要的研究則針對(duì)的是從食用菌提取的凝集素混合促進(jìn)劑并滴加在不同種菌種上所產(chǎn)生的促進(jìn)菌絲分化的扭結(jié)情況，目的是為了在食用菌凝集素菌絲扭結(jié)劑的促進(jìn)下可以讓菌種提前出菇，從而縮短真姬菇商品化時(shí)間和成本降低[13-16]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

正常袋栽長(zhǎng)滿菌絲的真姬菇菌袋。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 凝集素的分離純化

參照張迪、林勇等分離純化方法[11]，獲得各峰值的凝血活性，然后對(duì)其進(jìn)行冷凍干燥，收集得到雙孢蘑菇2796凝集素純品。

1.2.2 食用菌培養(yǎng)基的制備

固體瓊脂PDA培養(yǎng)基，其冷卻至一定溫度（不能讓其凝固）后開(kāi)始在超凈臺(tái)上倒入PDA，然后等液體凝固后開(kāi)始接種。

1.2.3 菌種接種

在真姬菇菌袋接入真姬菇菌絲菌塊（長(zhǎng)×寬：5 cm×1 cm，2條，接種過(guò)程要全程保持不染菌），放在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待菌絲布滿整袋后，噴灑不同濃度（0、1、3、5、7、9 g/L重復(fù)，5次，即5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，1個(gè)對(duì)照空白組）的凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑，同時(shí)繼續(xù)放在培養(yǎng)室中黑暗培養(yǎng)10 d左右，然后將培養(yǎng)皿分別轉(zhuǎn)移到10～15 ℃條件下，在不同的光源、不同CO2濃度培養(yǎng)料含水量、80%濕度繼續(xù)培養(yǎng)，觀察結(jié)果，每隔3 d拍1次照片記錄過(guò)程。

2.1 凝集素促進(jìn)劑處理真姬菇菌絲扭結(jié)的影響

由圖1可知，通過(guò)食用菌凝集素促進(jìn)劑處理的真姬菇經(jīng)過(guò)20 d的觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)皿在濃度為5 mg/L有出現(xiàn)有扭結(jié)的跡象，菌絲有顏色加深和菌絲加粗的現(xiàn)象，也就說(shuō)明有一定的促進(jìn)扭結(jié)轉(zhuǎn)色的情況發(fā)生。

圖1 真姬菇菌絲的顯微觀察

2.2 食用凝集素促進(jìn)劑真姬菇栽培工藝對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

2.2.1 培養(yǎng)溫度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

溫度試驗(yàn)結(jié)果表明食用凝集素真姬菇的菌絲生長(zhǎng)溫度范圍為10～15 ℃，適宜生長(zhǎng)溫度為13 ℃。

2.2.2 培養(yǎng)料含水量對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

含水量試驗(yàn)結(jié)果：真姬菇的菌袋生長(zhǎng)含水量范圍為50%～65%，適宜生長(zhǎng)含水量為60%。

表1 食用菌凝集素栽培真姬菇溫度試驗(yàn)結(jié)果

表2 食用凝集素栽培真姬菇培養(yǎng)料含水量影響

表3 pH值對(duì)食用凝集素栽培真姬菇的影響

表4 不同光源對(duì)真姬菇的菌袋生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果

表5 真姬菇菌袋在紫光不同強(qiáng)度下的試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 酸堿度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響

酸堿度試驗(yàn)表明食用凝集素栽培真姬菇pH值范圍為4～9，適宜生長(zhǎng)栽培料pH值為6～7。

2.2.4 不同光源同種強(qiáng)度下對(duì)食用凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

不同光源在15 lux條件下試驗(yàn)結(jié)果表明，紫光、綠光比其他光更適合真姬菇，紫光更適合菌絲扭結(jié)。

2.2.5 紫光源不同強(qiáng)度對(duì)食用凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

紫光源在5、10、15、20 lux強(qiáng)度下，食用菌凝集素栽培真姬菇試驗(yàn)結(jié)果表明，15～20 lux條件下，每個(gè)菌袋的扭結(jié)數(shù)量明顯多于其它。

2.2.6 不同CO2濃度對(duì)食用菌凝集素栽培真姬菇菌絲扭結(jié)影響

不同CO2濃度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）下的試驗(yàn)結(jié)果表明，CO2濃度0.5%、1.0%時(shí)每個(gè)菌袋的扭結(jié)數(shù)量高于1.5%、2.0%，說(shuō)明CO2濃度0.5%、1.0%更適合其生長(zhǎng)，出菇數(shù)量比較均勻。

表6 不同CO2濃度時(shí)真姬菇的菌袋生長(zhǎng)的試驗(yàn)結(jié)果

2.2.7 食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑的綜合因素對(duì)真姬菇菌袋的影響

通過(guò)食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑對(duì)真姬菇菌絲平板的菌絲扭結(jié)的營(yíng)養(yǎng)的研究，發(fā)現(xiàn)總共2組6個(gè)重復(fù)中5 g/L以上濃度的凝集素處理點(diǎn)均出現(xiàn)了菌絲扭結(jié)點(diǎn)，6塊平皿中累計(jì)出現(xiàn)了21個(gè)菌絲扭結(jié)點(diǎn)，1 g/L濃度處理點(diǎn)均未出現(xiàn)扭結(jié)點(diǎn)，3 g/L濃度的處理點(diǎn)只有50%出現(xiàn)了扭結(jié)點(diǎn)，且扭結(jié)點(diǎn)較小；5、7、9 g/L處理點(diǎn)出現(xiàn)的扭結(jié)原基大小均衡，未表現(xiàn)出明顯差異。生產(chǎn)應(yīng)用上將5 g/L的雙孢蘑菇凝集素噴劑，待菌包開(kāi)袋后噴灑于袋口菌絲表面，經(jīng)處理后可加快菌絲扭結(jié)，進(jìn)而縮短向子實(shí)體轉(zhuǎn)化時(shí)間3～5 d，產(chǎn)量與未噴灑制劑的無(wú)顯著差異。

由表7可以看出，在開(kāi)袋時(shí)噴灑食用菌凝集素可以明顯縮短真姬菇扭結(jié)時(shí)間，從而縮短生長(zhǎng)時(shí)間。在濃度為1～5 g/L時(shí)，隨著食用菌凝集素濃度的增加真姬菇生長(zhǎng)時(shí)間縮短，但當(dāng)食用菌凝集素再增加時(shí)，真姬菇生長(zhǎng)時(shí)間縮短達(dá)穩(wěn)定水平，縮短時(shí)間不明顯。

表7 食用菌凝集素對(duì)真姬菇生長(zhǎng)時(shí)間的影響

從表8中可以看出，噴灑食用菌凝集素對(duì)真姬菇產(chǎn)量沒(méi)有明顯影響，不會(huì)造成產(chǎn)量下降。因此，在真姬菇開(kāi)袋時(shí)噴灑食用菌凝集素有助于真姬菇菌絲扭結(jié)，縮短生長(zhǎng)時(shí)間，并且最佳的食用菌凝集素噴灑濃度為5 g/L。真姬菇開(kāi)袋時(shí)噴灑5 g/L食用菌凝集素可以縮短生長(zhǎng)時(shí)間3～4 d。

表8 食用菌凝集素（5 g/L）對(duì)真姬菇菌袋產(chǎn)量的試驗(yàn)結(jié)果（每個(gè)菌袋）

3 討論與結(jié)論

⑴ 凝集素(lectin)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的免疫調(diào)節(jié)以及抑制病毒增殖方面得以應(yīng)用，還參與生物體內(nèi)的一些關(guān)鍵生理過(guò)程,且與食用真菌的菌絲發(fā)育和形態(tài)生長(zhǎng)發(fā)育息息相關(guān)[12-16]。

⑵本實(shí)驗(yàn)探討食用菌凝集素菌絲扭結(jié)促進(jìn)劑對(duì)真姬菇工廠化生產(chǎn)的影響，研究不同的溫度、培養(yǎng)料含水量、酸堿度、不同光源、不同CO2濃度對(duì)真姬菇菌絲扭結(jié)影響。機(jī)理研究還待進(jìn)步深入。