• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      慢性化膿性中耳炎的病原學、藥敏試驗及其毒力基因分析

      2021-07-14 08:02:52陶興罡張志遠
      實用臨床醫(yī)學 2021年3期
      關鍵詞:銅綠致病菌毒力

      陶興罡,張志遠

      (1.南昌大學第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科,南昌 330006; 2.復旦大學附屬中山醫(yī)院吳淞醫(yī)院耳鼻咽喉科,上海 200940)

      慢性化膿性中耳炎(chronic suppurative otitis media,CSOM)是一種較為常見的耳科疾病,臨床上患者以耳痛、耳鳴、耳內(nèi)長期反復間斷或持續(xù)性流膿、鼓膜穿孔、伴有或不伴有聽力下降為主要臨床特點。國內(nèi)外很多研究者[1-4]對CSOM分離出的致病菌類型進行了分析,各地區(qū)常見致病菌類型有所差異。隨著抗生素的使用,CSOM的致病菌譜及藥物敏感性也會隨之變化。而關于CSOM的毒力基因研究少有文獻報道。因此,本研究分析CSOM患者的細菌分型及藥物敏感性,并對相關致病菌的毒力基因進行檢測,觀察病原菌譜和耐藥性的變化,為臨床合理治療CSOM提供用藥參考。

      1 一般資料

      選取2020年3月至2021年3月在復旦大學附屬中山醫(yī)院吳淞醫(yī)院就診的CSOM患者166例患者(179只患耳),男76例,女90例,年齡(49.31±12.44)歲,病程2個月~26年,平均21.2個月。

      1.1 病例選取標準

      1)納入標準:①符合慢性化膿性中耳炎的診斷標準;②近期內(nèi)(5 d)未使用過抗菌藥物;③均為化膿性中耳炎活動期。

      2)排除標準:①排除疾病,包括外耳道膽脂瘤、中耳膽脂瘤、中耳膽固醇肉芽腫、結核性中耳炎、中耳癌;②5 d內(nèi)使用過抗生素,包括滴耳液、口服、肌肉、靜脈。

      1.2 研究方法

      1.2.1 試劑與儀器

      由上海伊華醫(yī)學生物提供的血瓊脂培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、念珠菌顯色瓊脂培養(yǎng)基、沙保弱瓊脂培養(yǎng)基等,安圖MS1000質(zhì)譜儀、生物梅里埃公司的Vitec 2微生物鑒定藥敏分析系統(tǒng)和Vitec Densichek比濁儀。北京六一儀器廠生產(chǎn)的DYY-6C電泳儀和DYCP-32B電泳槽用于蛋白電泳實驗。

      1.2.2 病原學和藥敏試驗

      按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[5]中耳分泌物標本進行檢驗操作。用無菌棉簽采集門診或入院確診患者中耳鼓室分泌物,置于無菌試管中立即送檢,進行細菌和真菌培養(yǎng),培養(yǎng)陽性菌株應用安圖MS1000質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜鑒定。

      生物梅里埃公司的Vitec 2微生物鑒定藥敏分析系統(tǒng)和Vitec Densichek比濁儀進行藥敏試驗,補充藥敏試驗采用K-B藥敏紙片擴散法技術,藥敏試驗方案參考全國細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)技術方案(CARSS網(wǎng),http://www.carss.cn),藥敏試驗執(zhí)行標準為2020抗微生物藥物敏感性試驗執(zhí)行標準CLSI M100-30(中國藥師協(xié)會根據(jù)美國臨床和實驗室標準協(xié)會合法授權翻譯印制)。

      1.2.3 毒力基因測試

      依據(jù)GenBank對外公布的毒力基因序列,采用Primer Premier 5引物軟件,根據(jù)相關文獻[6-8],設計金黃色葡萄球菌毒力基因SEA、SEB、TSST-1、HLα、HLβ、PLV和銅綠假單胞菌毒力基因ToxA、ExoT引物。菌株采用酶解法,提取DNA,PCR擴增后瓊脂糖凝膠電泳,成像觀察。毒力基因引物序列,由上海生工生物工程股份有限公司合成,詳見表1。

      表1 基因引物序列

      1.3 數(shù)據(jù)處理

      采用Excel 2010錄入數(shù)據(jù),應用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理。

      2 結果

      2.1 致病菌種類分布

      166例患者(179只患耳)的中耳分泌物標本中,132例患者(143只患耳)培養(yǎng)出致病菌,檢出率為79.89%(143/179)。共培養(yǎng)出167株致病菌,其中24例患耳存在2種致病菌混合感染。

      167株致病菌中,革蘭陽性菌81株(占48.50%),其中金黃色葡萄球菌50株(占29.94%),凝固酶陰性葡萄球菌19株(占11.38%);革蘭陰性菌22株(占13.17%),其中銅綠假單胞菌12株(占7.19%);真菌64株(占38.55%),其中絲狀真菌44株(占26.35%)。見表2。

      表2 致病菌分布及各自比例

      表2(續(xù))

      2.2 致病菌藥敏試驗分析

      對50株金黃色葡萄球菌和12株銅綠假單胞菌進行耐藥分析。真菌未做藥敏試驗。

      金黃色葡萄球菌對青霉素G的耐藥率最高為90.00%。耐藥率超30%的還有紅霉素(32.00%)和氨芐西林(30.00%),見圖1。銅綠假單胞菌耐藥率最高的是環(huán)丙沙星(25.00%)和左旋氧氟沙星(25.00%),見圖2。

      圖1 金黃色葡萄球菌的耐藥情況(n=50)

      圖2 銅綠假單胞菌的耐藥情況(n=12)

      2.3 毒力基因

      金黃色葡萄球菌的毒力基因SEA、SEB、TSST-1、HLα、HLβ、PLV中,HLα的檢出率最高,達100%;銅綠假單胞菌的毒力基因ToxA、ExoT中,ToxA的檢出率最高達100%,見表3。各毒力基因電泳結果見圖3—4。

      表3 金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌毒力基因檢出情況

      1—24:金黃色葡萄球菌;M:marker。圖3 金黃色葡萄球菌各毒力基因電泳結果

      圖3(續(xù))

      1—6:銅綠假單胞菌;M:marker。圖4 銅綠假單胞菌各毒力基因電泳結果

      3 討論

      成年人CSOM的發(fā)病率在國內(nèi)一般為2%~4%[9],占耳鼻喉科新診斷患者的11.7%。常合并慢性乳突炎,中耳腔內(nèi)的膿性分泌物以感染的細菌、白細胞、巨噬細胞等為主,發(fā)病時間通常定義為8周以上。長期的炎癥病理改變會破壞中耳的生理結構,導致聽力損失,甚至破壞周圍的骨質(zhì)。在一定條件下,可出現(xiàn)嚴重的顱內(nèi)、外并發(fā)癥而危及生命[10]。感染、咽鼓管功能障礙及免疫不健全是中耳炎的三大主要發(fā)病病因[11],致病菌感染是引起CSOM的最重要和最直接的外源性病因。

      國內(nèi)外很多研究者對CSOM分離出的致病菌類型進行了分析。上海的金曉杰等[1]研究62例CSOM患者的致病菌,依照實際的檢出占比為銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌等。楊燕珍等[2]收集武漢市92例CSOM患者的中耳炎性分泌物并做細菌培養(yǎng),結果致病菌是綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌和變形桿菌等。王志紅等[3]收集化膿性中耳炎耳道分泌物80例進行細菌培養(yǎng),結果顯示,致病菌為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及銅綠假單胞菌等。韓國學者YEO等[4]回顧性分析1102名罹患CSOM患者致病菌排列為:假單胞菌屬、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌等。提示,CSOM的常見致病菌類型因地區(qū)而異。

      本研究中凝固酶陰性葡萄球菌(頭狀葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、耳葡萄球菌、假中間葡萄球菌等)占11.38%,因其致病性存在爭議[12],故暫不作為致病菌參與比例排序。故排名前三位的致病菌檢出率為金黃色葡萄球菌50株(29.94%)、絲狀真菌44株(26.35%)、銅綠假單胞菌12株(7.19%)。與金曉杰等[1]在2004年提出的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的比例順序已完全不同。其中,金黃色葡萄球菌的檢出明顯增多,且真菌的檢出比例上升到第二位??赡芘c上海處于我國的長江下游地區(qū),環(huán)境溫暖濕潤,適合真菌生長有關。另外,也可能與長期不規(guī)范使用抗生素,造成局部菌群失調(diào)有關。本研究中24例患耳存在2種致病菌混合感染,可能是自行使用抗生素治療各種炎癥,造成局部或全身的菌群紊亂。

      本研究總致病菌的耐藥試驗結果顯示,革蘭陽性菌,特別是金黃色葡萄球菌對青霉素G的耐藥率最高,遠超《抗菌藥物臨床應用指導原則》和《抗菌藥物臨床應用管理辦法》[13-14]的慎重用藥的標準,在金黃色葡萄球菌作為目標細菌的治療中,建議暫停青霉素G。而耐藥率超30%的紅霉素、氨芐西林,也應慎用。革蘭陰性菌,尤其是銅綠假單胞菌,對環(huán)丙沙星和左旋氧氟沙星的耐藥率最高,雖未達到用藥預警,但仍需注意目前對β-內(nèi)酰胺類抗生素、喹諾酮類藥物的耐藥性,有明顯升高。參考“全國細菌耐藥監(jiān)測網(wǎng)(CARSS)”[15],2019年金黃色葡萄球菌對常用抗菌藥物的敏感性表中,耐藥率前五位與此次CSOM分離出金黃色葡萄球菌的耐藥率前五位的結果順序基本一致。2019年銅綠假單胞菌對常用抗菌藥物的敏感性表中,耐藥率前五位與此次CSOM分離出銅綠假單胞菌的耐藥率前五位結果順序基本相近。提示CSOM的致病菌,與全身其他部位的相同致病菌,對抗生素的耐藥效果基本相似。

      細菌致病力的強弱,主要取決于其產(chǎn)生的各種毒力基因。此次實驗中,金黃色葡萄球菌的毒力基因中,HLα基因檢出率最高,達100%。HLα基因,是金黃色葡萄球菌分泌的外毒素——溶血毒素的α毒素,在感染致病過程中,具有破壞宿主細胞免疫屏障的能力,是關鍵因子之一,并參與金黃色葡萄球菌的生物膜生成[16],與其致病性密切相關。而細菌生物膜在CSOM發(fā)病機制中已經(jīng)引起廣泛的關注[17]。生物膜難以根除,還可能導致復發(fā)性感染。此外,生物膜與受損組織,如暴露的骨組織和潰爛的中耳黏膜,或耳科植入物如鼓膜置管,緊密相連,進一步加劇了治療困難[18]。

      銅綠假單胞菌的毒力基因中,ToxA的檢出率最高,達100%。ToxA基因,由Ⅱ型分泌系統(tǒng)產(chǎn)生,其表達的外毒素,細菌毒力極強,可導致宿主細胞蛋白質(zhì)合成障礙。因此,銅綠假單胞菌感染造成的CSOM,比其他致病菌更有致病性。

      盡管各種毒力基因的檢出率各不相同,但是,這些毒力基因共同參與細菌的致病作用。例如,金黃色葡萄球菌的黏附和定植需要表面錨定蛋白和HLβ基因的參與,HLα、HLβ、PVL基因協(xié)同損傷細胞膜,HLα、HLβ基因共同降低纖毛功能,SEA、SEB基因發(fā)揮毒素效應,TSST-1基因增強對毒素敏感性,共同參與CSOM的致病過程。而銅綠假單胞菌的ToxA和ExoT基因,則抑制靶細胞的蛋白質(zhì)合成和細胞分裂,使細胞凋亡[19]和組織壞死。同樣將CSOM的致病力,發(fā)揮到了極致。

      總之,隨著檢測方法的更新,治療藥物的升級,致病菌譜必定會有變化。因此,應動態(tài)監(jiān)測病原學的變化,及時總結致病菌檢出率的排序變化、細菌的耐藥率和耐藥特點等,并且更新使用針對性的抗菌藥物進行治療。臨床盡可能對每位患者進行細菌培養(yǎng)和藥敏試驗,特別是對抗菌治療效果差,或伴有糖尿病、結核病等消耗性疾病的機會性感染患者更是如此。依據(jù)細菌培養(yǎng)與藥敏試驗結果,合理、規(guī)范、有針對性地使用抗生素,不僅可以縮短病程,減少并發(fā)癥,還可以減少耐藥性的發(fā)生。致病菌的培養(yǎng)鑒定、藥敏試驗分析及其毒力基因的檢測,可為臨床合理用藥提供科學參考,進一步促進個體化治療,精準化治療。同時,衛(wèi)生管理部門應繼續(xù)加強對抗菌藥物的管理,加大監(jiān)督和指導的力度;醫(yī)療機構應嚴格控制對抗菌藥物的臨床應用指征;應該通過各種渠道宣傳濫用抗菌藥物的危害,增強遵守醫(yī)囑的自覺性,避免過度使用抗菌藥物。

      致謝:特此感謝劉洋師兄對論文的悉心指導!

      猜你喜歡
      銅綠致病菌毒力
      12種殺菌劑對三線鐮刀菌的室內(nèi)毒力測定
      云南化工(2021年6期)2021-12-21 07:31:04
      阿維菌素與螺螨酯對沾化冬棗截形葉螨的毒力篩選及田間防效研究
      槲皮素改善大鼠銅綠假單胞菌肺感染
      中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:21
      SSEL結合多重PCR同時快速檢測生菜中4種食源性致病菌
      共代謝基質(zhì)促進銅綠假單胞菌降解三十六烷的研究
      食品中致病菌快速檢測方法的探討
      水稻白葉枯病菌Ⅲ型效應物基因hpaF與毒力相關
      獼猴桃采后致病菌的分離及中草藥提取物對其抑菌效果初探
      銅綠假單胞菌金屬酶及整合酶的檢測
      《食品中致病菌限量》(GB29921—2013)解析
      余江县| 宁陵县| 巴林左旗| 进贤县| 兴仁县| 新巴尔虎右旗| 长垣县| 新竹市| 安西县| 收藏| 田阳县| 华坪县| 青铜峡市| 金秀| 阿瓦提县| 湟源县| 泾川县| 九江县| 新巴尔虎右旗| 喀什市| 富平县| 息烽县| 柳江县| 江永县| 垦利县| 郸城县| 普兰店市| 阿克陶县| 莆田市| 东光县| 林周县| 淮滨县| 汽车| 兖州市| 濮阳县| 麻城市| 新河县| 静宁县| 铁岭市| 黄梅县| 广西|