兩種不同原理化學(xué)發(fā)光在HIV 抗體初篩試驗中的可行性驗證

朱華

（江蘇省泰興市第二人民醫(yī)院檢驗科，江蘇 泰興）

0 引言

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染所導(dǎo)致的乙類傳染病。隨著檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展，HIV 抗體檢測試劑、方法越來越多。靈敏度、特異性高的檢測技術(shù)可以大大縮短HIV 檢測的窗口期，對HIV 的早期診斷、早控制、早治療，從而切斷HIV 病毒的傳播具有極大意義。過去十年里本院HIV抗體檢測主要采用ELISA 方法和金標法，但ELISA 方法和金標法受試劑、檢測環(huán)境、檢測人員等多種因素的影響較大，存在諸多的局限性[1]。而化學(xué)發(fā)光技術(shù)具有靈敏度高、干擾少、自動化高、速度快等優(yōu)點，在HIV 抗體篩查實驗室中應(yīng)用也越來越廣泛[2]。本次研究以免疫印跡試驗法作為金標準，對兩種化學(xué)發(fā)光的檢測結(jié)果進行比較，評價兩種檢測方法在HIV 抗體初篩試驗中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019 年1 月至2020 年12 月本院300 例門診皮膚科及住院輸血前體檢高?；颊?，其中男性215 例，女性85 例，年齡18-75 歲，平均45 歲。

1.2 試劑

本次研究電化學(xué)發(fā)光使用希森美康株式會社生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒抗原抗體檢測試劑盒；光激化學(xué)發(fā)光使用博陽生物科技（上海）有限公司生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒HIV（1+2 型）抗體檢測試劑盒。所用試劑均在有效期之內(nèi)。

1.3 儀器

電化學(xué)發(fā)光使用HISCL-5000 全自動免疫分析儀、光激化學(xué)發(fā)光使用LiCA500 自動光激化學(xué)發(fā)光檢測儀。所用儀器性能可靠。

1.4 方法

兩種化學(xué)發(fā)光試驗均嚴格按照各自的試劑使用說明書和儀器標準操作程序(SOP 文件)進行操作和結(jié)果的判讀。對兩種方法檢測結(jié)果不一致者或初篩試驗陽性者，重新采樣，雙份血清（第1 次采集血清和重采樣本血清）、雙試劑復(fù)檢，對任一方法檢測陽性的標本和對照標本都按規(guī)定并利用免疫印跡法進行確診試驗[3]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

利用SPSS20.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用例（%）表示，采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

300 例樣本中，296 例樣本的兩種方法檢測結(jié)果均為陰性,使用免疫印跡法確認HIV 抗體陰性。其余4 例疑似樣本在進一步確診實驗中，電化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果顯示陽性4 例、陰性0 例，光激化學(xué)發(fā)光檢測結(jié)果顯示陽性2 例、陰性2 例。經(jīng)確診實驗證實，電發(fā)光法假陽性2 例，假陰性0 例；光激化學(xué)發(fā)光假陽性0 例，假陰性0 例。見表1、2。電化學(xué)發(fā)光和光激化學(xué)發(fā)光在HIV 抗體初篩試驗中的陽性率對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.417＞0.05)；光激化學(xué)發(fā)光檢測法陽性率為0.67%(2/300)，特異性為100%[298/（298+0）]，靈敏度為100%[2/（2+0）]，電化學(xué)發(fā)光法陽性率為1.33%(4/300)，特異性為99.3%[298/（298+2）]，靈敏度100%[2/(2+0)]。光激化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光的特異性、靈敏度對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）

表1 300 例患者HIV 抗體檢測結(jié)果（n）

表2 光激化學(xué)發(fā)光與電化學(xué)發(fā)光比較（n）

3 討論

電化學(xué)發(fā)光分析是通過電極對含有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的某化學(xué)體系施加一定的電化學(xué)信號(包括電壓和電流)，一直產(chǎn)生某種新物質(zhì)，該物質(zhì)能與體系中存在的化學(xué)物質(zhì)反應(yīng)或自身進行分解反應(yīng)，反應(yīng)不但提供足夠的能量，而且還能產(chǎn)生合適的發(fā)光體并接受該反應(yīng)的釋放能量，形成激發(fā)態(tài)發(fā)光體，不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時便發(fā)出與該發(fā)光體性質(zhì)相一致的發(fā)射光，用光電倍增管等普通光學(xué)手段測量發(fā)光光譜或發(fā)光強度從而對物質(zhì)進行痕量分析。具有靈敏度高、特異性強、線性范圍寬、重現(xiàn)性好、試劑穩(wěn)定、操作簡單、結(jié)果易觀察、部分試劑可重復(fù)利用的優(yōu)點[4]。

光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)使用的是均相體系化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)，參與免疫反應(yīng)的一個抗體上包被了感光珠(sensibead)，內(nèi)含酞菁(魯米諾類化學(xué)發(fā)光物質(zhì))；另一個抗體上包被了發(fā)光珠(chemibead)，內(nèi)含二甲基噻吩衍生物及Eu 螯合物。在目標抗原存在的情況下，可形成夾心免疫復(fù)合物，目標抗原可使兩個抗體上標記的感光珠和發(fā)光珠緊密的連接在一起，在680nm 激發(fā)光下，可完成魯米諾氧途徑化學(xué)發(fā)光過程。整個能量(光)的產(chǎn)生、傳遞和放大過程十分穩(wěn)定，不易受到pH 值、離子強度和溫度的影響。具有反應(yīng)時間更短、靈敏度更高、特異性更強的優(yōu)點[5]。

目前已證實HIV 抗體分為HIV-1 型抗體、HIV-2 型抗體兩種亞型，HIV-1 型流行較廣泛，呈全球性流行趨勢，毒力較強潛伏期較短；HIV-2 型流行性局限，毒力弱，但發(fā)病潛伏期較長，比較隱匿，無論HIV-1 型還是HIV-2 型在進入人體后都主要侵犯人體免疫系統(tǒng)，最終導(dǎo)致機體免疫功能缺陷，從而引起各種機會性感染和腫瘤的發(fā)生。因此，同時篩查HIV-1 型、HIV-2 型抗體會大大提高HIV 抗體檢出率[6]。本次研究中光激化學(xué)發(fā)光的基礎(chǔ)原理是一種均相免疫反應(yīng)，其所用試劑在均相條件下，采用雙抗原夾心免疫光激化學(xué)發(fā)光檢測人血清中的HIV（1+2 型）抗體。而電化學(xué)發(fā)光是一種異相免疫反應(yīng)，采用兩步法的化學(xué)發(fā)光免疫分析法，檢測HIV-1、HIV-2 型抗體和P24 抗原?；颊咄ǔＴ诟腥綡IV 后6-8 周（窗口期）才產(chǎn)生抗體。同時檢測HIV-1、HIV-2 和P24 抗原可縮檢測短窗口期，以滿足臨床的需求。本研究中，光激化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光的特異性、靈敏度對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），均適用于HIV 抗體初篩試驗，電化學(xué)發(fā)光的陽性率稍高于光激化學(xué)發(fā)光，而光激化學(xué)發(fā)光特異性稍高，可能基于兩種方法的原理差異。本次研究中兩種化學(xué)發(fā)光靈敏度均為100%，靈敏度高在HIV 抗體篩查方面更能體現(xiàn)其優(yōu)勢，可以有效降低HIV 漏檢帶來的風(fēng)險。根據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》要求，對HIV 抗體初篩有反應(yīng)的樣本，必須用原試劑雙孔或兩種試劑進行復(fù)檢試驗[7,8]。此研究中兩種化學(xué)發(fā)光均可選作各自的替代方法進行復(fù)檢試驗。