HPLC法測定煙酸片的溶出度

本文目的為建立煙酸片溶出度的高效液相測定方法。方法: 色譜柱為Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為0.1%三乙胺（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速為1.0 mL·min-1，檢測波長263 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果: 煙酸在2.20～39.93 mg·L-1濃度范圍內(nèi)顯良好的線性關(guān)系（r=1）,平均回收率為99.51%（n=9），RSD為0.79%。結(jié)論: 該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于煙酸片的溶出度測定。

煙酸片屬于維生素類藥，煙酸也稱維生素B3，分子式:C6H5NO2，化學(xué)名稱3-吡啶甲酸，耐熱、能升華。煙酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為煙酰胺，再與核糖腺嘌呤等組成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，為脂質(zhì)氨基酸、蛋白、嘌呤代謝，是組織呼吸的氧化作用和糖原分解所必需。多用于預(yù)防和治療煙酸缺乏癥、糙皮病，也用作血管擴(kuò)張藥，治療高脂血癥等[1]，亦可作為食品飲料的添加劑[2]，在食品領(lǐng)域應(yīng)用較廣?！吨腥A人民共和國藥典》2020年版二部，煙酸片溶出度采用紫外分光光度法檢測[3]，近年來未見HPLC法測定煙酸片溶出度的相關(guān)報(bào)道[4-6]。本文研究建立了HPLC法測定煙酸片溶出度的方法，獲得了滿意的結(jié)果。

材 料

儀器Thermo UItiMate3000高效液相色譜儀，DAD3000檢測器；UV2600紫外分光光度計(jì)；2015CCE070溶出儀；梅特勒XPE205DR電子天平（0.01 mg）。

試劑與藥品煙酸對照品（批號：100434-201603，含量：99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，三乙胺、醋酸為分析純，水為去離子水，其它試劑為分析純；煙酸片（均為上海上藥信誼藥廠有限公司，批號：42190701；093170601；093171101規(guī)格：50 mg）。

方法與結(jié)果

色譜條件色譜柱：賽默飛Hypersil Gold C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：0.1%三乙胺（用醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）-甲醇（90:10），流速為1.0 mL·min-1，檢測波長263 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μl，理論塔板數(shù)按煙酸計(jì)算不低于2000。

對照品溶液的制備精密稱取煙酸對照品約10 mg，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度；精取10 mL置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。

溶出度供試品溶液的制備取本品按照溶出度測定法（《中華人民共和國藥典》2020年版二部，通則0931第一法），以水900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r·min-1，依法操作，經(jīng)20 min時(shí)取樣濾過（0.45 μm微孔濾膜），精取續(xù)濾液10 mL置25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，作為溶出度供試品溶液。

陰性對照溶液的制備按煙酸片處方比例配成不含煙酸的片劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

干擾試驗(yàn)按1色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液20 μl注入色譜儀。結(jié)果表明，樣品與對照品色譜圖保留時(shí)間相同，陰性對照溶液在煙酸對照品溶液保留時(shí)間處均無干擾。

方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察 精密稱取煙酸對照品適量，加水溶解配成相應(yīng)的質(zhì)量濃度：2.20,5.18,10.12,14.98,20.06,25.03,3 0.00,39.93 mg·L-1，按1色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖, 峰面積分別為：0.9549，2.3734，4.7284，7.0481，9.4693，11.8369，14.2047，18.9383。以質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程：A=0.4767C-0.0946，r=1，結(jié)果表明，煙酸在2.20～39.93 mg·L-1范圍內(nèi)質(zhì)量濃度與峰面積的線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn) 取上述對照品溶液，按2.1色譜條件，精密連續(xù)進(jìn)樣6次，測得峰面積為11.0400、11.0331、11.0356、11.0438、11.0445、11.0550，平均峰面積為11.0420，RSD=0.07%（n=6），結(jié)果表明該方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn) 按對照品溶液配制方法制備對照品溶液，按2.1色譜條件，分別在0，1，2，4，8，12 h進(jìn)樣，測得平均峰面積9.4533，RSD=0.57%（n=6），結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn) 取樣品（批號：42190701），加水900 mL，超聲20 min，濾過（0.45 μm微孔濾膜），取6份續(xù)濾液，分別加水稀釋制成每1 mL中約含20 μg的溶液，按2.1色譜條件進(jìn)樣測定，測得溶出度為99.1、99.5、99.7、99.2、99.4、99.6，平均溶出度99.4%，RSD為0.23%（n=6）。結(jié)果表明該方法樣品重現(xiàn)性良好。

加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的煙酸片（約相當(dāng)于煙酸50 mg），置1000 mL容量瓶中，加水超聲20 min，冷卻，加水稀釋至刻度。精取5 mL，置25 mL容量瓶中，共取9份分三組，每組再分別精密加入濃度為0.0539 mg·mL-1的對照品溶液4，5，6 mL，制成低、中、高三組濃度的供試品溶液,加水稀釋至刻度。按2.1色譜條件測定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.51%，RSD=0.79%。結(jié)果見表1。

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樣品溶出度測定取3批樣品（批號：42190701；093170601；093171101），按上述溶出度供試品溶液的制備方法制備樣品溶出液。用紫外分光光度法測定3批樣品的溶出度；同時(shí)用HPLC法，按2.1色譜條件測定3批樣品的溶出度。結(jié)果表明紫外分光光度法與HPLC法一致。

討 論

檢測波長的選擇高效液相DAD光譜掃描煙酸對照品溶液最大吸收波長為263 nm；采用UV2600在200～400 nm掃描煙酸對照品溶液，最大吸收波長262 nm。經(jīng)考察高效液相選擇波長263 nm的色譜圖面積大于選擇波長262 nm的色譜圖面積，故高效液相檢測波長選擇263 nm。

流動相的選擇參閱相關(guān)資料[7-9],對多套流動相系統(tǒng)進(jìn)行了考察，采用本文流動相系統(tǒng)，峰型好，重現(xiàn)性高，保留時(shí)間適度，系統(tǒng)穩(wěn)定無干擾。

耐用性考察本文對流動相系統(tǒng)的耐用性進(jìn)行了考察，對流動相中甲醇的比例在7%-13%范圍進(jìn)行了考察；pH值在3.0-4.0范圍進(jìn)行了考察；流速在0.8、1.0、1.2 mL·min-1范圍進(jìn)行了考察；柱溫在25℃、30℃、35℃范圍進(jìn)行了考察；色譜柱使用了超高效色譜柱、Waters高效色譜儀配套專用柱及相應(yīng)的高效液相色譜儀上進(jìn)行了考察，差異均不大，峰型均保持良好，本文流動相系統(tǒng)耐用性較好。

拓展測定比較按處方比例自制三批樣品，采用高效液相法和紫外分光光度法對更多批次煙酸片溶出度進(jìn)行拓展測定比較，并采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法對測定結(jié)果差異進(jìn)行了分析評價(jià)，結(jié)果，高效液相法與紫外分光光度法測定結(jié)果基本一致。