可溶性E-鈣黏連蛋白對(duì)良惡性乳房腫塊的鑒別診斷價(jià)值

閭志堅(jiān) 甘從存 王康翰

乳房腫塊是最常見的乳腺疾病，其診斷、鑒別診斷和處理在乳腺外科診療中具有極其重要的臨床意義。乳腺癌作為女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來，其發(fā)病率及病死率不斷上升，已嚴(yán)重影響婦女的身心健康及生命安全，因此，乳腺癌的早期診療至關(guān)重要。上皮型鈣黏連蛋白(E-cadherin,EC)是上皮細(xì)胞中重要的細(xì)胞黏附因子，參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，通過胰酶作用，EC可以形成1個(gè)分子量約為80 kDa的血清可溶性E-鈣黏連蛋白(soluble E-cadherin,sEC)，該片段作為EC的降解形式，在健康人的外周血中可以檢測(cè)出來，且在腫瘤患者中常為高表達(dá)，并與多種腫瘤的預(yù)后息息相關(guān)。外周血sEC水平升高多見于卵巢惡性腫瘤和胃惡性腫瘤，但關(guān)于乳腺癌患者外周血sEC的有關(guān)研究仍較少。本研究檢測(cè)了120例患有乳房腫塊的女性患者外周血中sEC水平，旨在探討sEC在乳房良惡性患者間的表達(dá)差異及其臨床意義，以期為乳腺癌患者的診斷與治療提供新的思路。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2017年3月至2020年9月在滁州市第一人民醫(yī)院接受診療的120例女性乳房腫塊患者作為研究對(duì)象，回顧性分析患者的臨床資料。根據(jù)《腫瘤病理規(guī)范化診斷標(biāo)準(zhǔn)2018版》，確診為乳腺癌的62例患者作為觀察組，確診為良性乳房腫塊的58例患者作為對(duì)照組。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查明確診斷者；②首次發(fā)病，尚未接受手術(shù)、放療或化學(xué)治療者；③臨床分期為Ⅰ～Ⅲ期者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在手術(shù)禁忌者；②合并其他組織起源的惡性腫瘤者；③惡性腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者；④處于妊娠期或哺乳期者；⑤有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病或免疫系統(tǒng)疾病者。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血清樣本收集與處理 采集兩組患者外周血各3～5 mL，血樣采集后，放入4℃冰箱靜置20 min，然后5 000 r/min離心20 min，分離血清，置于-80℃冰箱儲(chǔ)存。檢測(cè)前冰上融化，12 000 r/min離心20 min，去除雜質(zhì)，檢測(cè)糖類抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)和糖類抗原15-3(carbohydrate antigen 15-3，CA15-3)的表達(dá)水平。

1.3.2 血清sEC的檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清sEC的水平，ELISA定量試劑盒購于美國R&D公司。主要操作步驟如下：①分別向反應(yīng)板中加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋后的血清，室溫孵育2 h，洗板；②分別向反應(yīng)板中加入200 μL辣根過氧化物酶標(biāo)記的重組人EC，室溫孵育2 h，洗板；③分別向反應(yīng)板中加入200 μL四甲基聯(lián)苯胺底物顯色液，避光室溫孵育30 min；④分別向反應(yīng)板中加入50 μL反應(yīng)終止液；⑤在反應(yīng)終止后的30 min內(nèi)，檢測(cè)樣品在450 nm處的吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)吸光度計(jì)算其濃度。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察比較兩組患者血清中sEC、CA125和CA15-3的表達(dá)水平，分析3者對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值，比較乳腺癌患者中sEC的表達(dá)水平與臨床病理特征的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床資料比較 觀察組患者外周血中sEC、CA125和CA15-3的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較

2.2 血液學(xué)指標(biāo)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值 以《腫瘤病理規(guī)范化診斷標(biāo)準(zhǔn)2018版》為金標(biāo)準(zhǔn)，以sEC、CA125和CA15-3為檢驗(yàn)變量，以病理診斷結(jié)果為狀態(tài)變量，制作ROC曲線。結(jié)果顯示，sEC、CA125和CA15-3對(duì)應(yīng)診斷的最佳截?cái)嘀捣謩e為2 154.50 ng/mL、41.50 U/mL和37.50 U/mL，曲線下面積(area under the cure, AUC)分別為0.850(95%CI：0.785～0.915)、0.756(95%CI：0.668～0.844)和0.858(95%CI：0.793～0.922)，靈敏度分別為96.8%、51.6%和87.1%，特異度分別為55.2%、96.6%和67.2%。見表2。

表2 sEC、CA125和CA15-3指標(biāo)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值

2.3 不同sEC水平乳腺癌患者的臨床病理特征比較 根據(jù)ROC曲線結(jié)果，sEC的最佳截?cái)嘀禐? 154.50 ng/mL，將乳腺癌患者分為高水平組(>2 154.50 ng/mL)42例和低水平組(≤2 154.50 ng/mL)20例。結(jié)果顯示，兩組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移構(gòu)成進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

<0.05)，兩組患者的年齡、腫瘤大小、分期和Her-2表達(dá)等進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05)。見表3。

表3 不同sEC水平乳腺癌患者的臨床病理特征比較[例(%)]

3 討論

乳腺彩超、鉬靶和磁共振檢查作為目前乳腺癌的常規(guī)輔助檢查，雖然很大程度上提高了乳腺癌的檢出率，但在早期診斷中仍然存在一定的局限性。如何進(jìn)一步提高乳腺癌患者的早期診斷效率，從而改善患者的預(yù)后，一直是臨床工作的研究熱點(diǎn)。血清學(xué)指標(biāo)具有簡(jiǎn)便、創(chuàng)傷性小、可重復(fù)性較高及可隨訪率高等優(yōu)點(diǎn)，高可信度血清學(xué)指標(biāo)已發(fā)揮出篩查作用，如CA125和CA15-3在乳腺癌的輔助診斷中具有重要地位，但臨床上仍有部分乳腺癌患者呈現(xiàn)出低表達(dá)狀態(tài)。因此，尋找新型腫瘤標(biāo)志物意義重大。

EC是一種跨膜糖蛋白，廣泛分布于上皮組織，是維持細(xì)胞間黏附作用的重要媒介，在乳腺癌等上皮性腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，改變細(xì)胞間的黏附性，促使腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移、浸潤，此外，還有調(diào)節(jié)組織形態(tài)變化和維持上皮細(xì)胞的正常極性和完整性等功能。本研究結(jié)果顯示，觀察組患者外周血中sEC、CA125和CA15-3的表達(dá)水平均高于對(duì)照組，提示sEC具有腫瘤分子標(biāo)志物屬性。EC的表達(dá)受到基因突變、啟動(dòng)子甲基化以及相關(guān)蛋白酶等多種因素的調(diào)控，其在腫瘤組織中表達(dá)降低，可使細(xì)胞間的黏附力下降，腫瘤細(xì)胞容易出現(xiàn)分散，繼而導(dǎo)致腫瘤組織出現(xiàn)浸潤生長、轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，EC可通過限制活性氧介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，而在轉(zhuǎn)錄上，EC的表達(dá)降低可能與轉(zhuǎn)化生長因子-β等介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路相關(guān)基因的上調(diào)有關(guān)，在腫瘤組織中可能存在相關(guān)上調(diào)的基因，導(dǎo)致EC的表達(dá)下降。但目前EC的具體調(diào)控機(jī)制仍未闡明，需進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示，sEC診斷早期乳腺癌的靈敏度為96.8 %，特異度為55.2%，AUC為0.850。CA15-3作為目前公認(rèn)的乳腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物，與患者臨床分期及腫瘤組織狀態(tài)息息相關(guān)，其表達(dá)水平隨著乳腺癌患者病情加重而升高。研究發(fā)現(xiàn)，sEC與患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者sEC表達(dá)水平與患者的年齡、腫瘤大小、分期和Her-2表達(dá)情況均無關(guān)(

P

>0.05)，僅與患者有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(

P

<0.05)?？赡芘c樣本量及樣本來源有關(guān)，有待行多中心、大樣本檢測(cè)予以進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究結(jié)果證實(shí)了sEC在乳腺癌患者中表達(dá)水平升高，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，且相比于傳統(tǒng)血液指標(biāo)CA125和CA15-3，sEC在乳腺癌早期診斷中也具有一定的診斷價(jià)值，這對(duì)提高乳腺癌早期診斷效率意義重大，值得進(jìn)一步研究。