• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    miR-215-5p通過靶向NCOA3基因抑制固始雞腹部前脂肪細胞的增殖和分化

    2021-07-08 01:01:18靳文姣翟彬苑鵬濤范升鑫李遠方閆峰賓孫桂榮田亞東康相濤李國喜
    畜牧與獸醫(yī) 2021年7期
    關(guān)鍵詞:前體脂肪組織分化

    靳文姣,翟彬,苑鵬濤,范升鑫,李遠方,閆峰賓,孫桂榮,田亞東,康相濤,李國喜

    (河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院/河南省家禽種質(zhì)資源創(chuàng)新工程研究中心,河南 鄭州 450046)

    家禽生產(chǎn)中,腹部脂肪組織的特征與雞的經(jīng)濟性狀高度相關(guān)[1]。腹腔內(nèi)脂肪過度沉積常常對肉質(zhì)性能產(chǎn)生負面影響,并增加飼料成本[2-4]。近年來,隨著規(guī)?;B(yǎng)殖的發(fā)展,地方雞種腹脂過度沉積現(xiàn)象也越來越嚴重[5]。地方雞種是我國家禽育種和優(yōu)質(zhì)雞生產(chǎn)的重要素材,因此,理解地方雞腹部脂肪組織發(fā)育的分子機制,將有益于資源的保護和開發(fā)利用。固始雞是主要分布于河南省固始縣境內(nèi)的蛋肉兼用型地方品種,因其肉質(zhì)具有鮮嫩、可口和風(fēng)味獨特的優(yōu)良特征,而經(jīng)常被用作育種和生產(chǎn)的素材。但目前仍然缺乏對固始雞腹部脂肪組織發(fā)育分子機制的理解。

    MicroRNA (miRNA)是一類長度18~24 nt的內(nèi)源性小的非編碼RNA,可與特定mRNA的3′-UTR區(qū)結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因的表達[6],廣泛參與機體發(fā)育、代謝以及細胞增殖、分化、凋亡等生物學(xué)過程的調(diào)控[7-8]。脂肪組織發(fā)育涉及新脂肪細胞的增加(增生)和脂肪細胞中脂類蓄積的增加(肥大)等復(fù)雜的過程[9],許多研究顯示miRNA也參與脂肪細胞增殖、分化和脂類代謝等脂肪組織發(fā)育相關(guān)的許多生物學(xué)過程調(diào)控。例如,bat-miR-33b[10]、miR-21[11]、miR-204[12]、 miR-378[13]、miR-125a-5p[14]、miR-200b[15]等miRNA已被證實可參與脂肪細胞增殖或分化調(diào)控。這說明,miRNA可作為研究動物脂肪組織發(fā)育相關(guān)分子機制的新靶標。但目前的一些研究還僅局限于少數(shù)農(nóng)業(yè)動物。

    有關(guān)雞腹脂發(fā)育相關(guān)miRNA的研究已有報道[16-20]。例如,Huang等[18]通過深度測序,從93日齡慢長型中國地方雞北京油雞(低腹脂)和快長型商業(yè)化肉雞品系科寶雞(高腹脂)的腹脂中鑒定到了230種已知miRNA和83種潛在的新miRNA。Yao等[19]和Wang等[20]分別從雞腹脂衍生前脂肪細胞中檢測到159種已知miRNA和33種差異miRNA。這些研究表明,雞腹脂發(fā)育受許多miRNA的調(diào)控。但先前的研究還主要集中于少數(shù)品種和腹脂發(fā)育特定階段miRNA鑒定,而對特定miRNA在雞腹脂發(fā)育中的作用機制研究還很少。

    前期,我們完成了6、14、22、30周齡固始雞腹脂miRNA的高通量測序,篩選鑒定到507種已知miRNA和53種新的miRNA,發(fā)現(xiàn)miR-215-5p在固始雞腹脂4個發(fā)育階段間高豐度差異性表達[21]。NCOA3基因可與核激素受體互作,與脂類代謝和沉積密切相關(guān)[22]。Wang等[23]研究顯示,NCOA3基因的表達量隨著肌內(nèi)脂肪含量的增加而升高,表明NCOA3基因?qū)χ境练e可能存在正向調(diào)控作用。靶基因預(yù)測表明,在NCOA3基因3′-UTR上,存在miR-215-5p的結(jié)合位點。這表明,miR-215-5p可能通過靶向作用于NCOA3而調(diào)控固始雞腹脂發(fā)育。基于此,本文研究了miR-215-5p對固始雞腹部前體脂肪細胞增殖和分化的影響及其與NCOA3基因的靶向關(guān)系,所得結(jié)果為更好地理解固始雞腹部脂肪組織發(fā)育的分子機制提供新的見解。

    1 材料與方法

    1.1 試驗動物與樣品采集

    選擇14周齡健康固始雞6只,解剖后,取心臟、肝臟、脾臟、胰腺、腿肌、皮脂、腎臟、腹脂等組織,液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱待用,用于miR-215-5p組織表達譜分析。另外,選擇14日齡固始雞雛雞,解剖分離腹部脂肪組織,用于原代前體脂肪細胞分離培養(yǎng)。

    1.2 原代前脂肪細胞分離培養(yǎng)

    取14日齡固始雞雛雞,無菌條件下處死后于75%酒精中浸泡10 min,解剖分離腹部脂肪組織,用含0.8%鏈霉素/青霉素的PBS連續(xù)沖洗3次后剪碎。將剪碎后的組織塊置于含1 mg/mL膠原蛋白酶Ⅱ(9001-12-1,索萊寶)的DMEM(SH30023.01,HyClone)中,37 ℃消化1 h。消化完全后加入紅細胞裂解液,室溫下裂解10 min,隨后分別通過100目、200目和500目的篩網(wǎng)過濾,1 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心濾液5 min。用完全培養(yǎng)基(DMEM+10% 胎牛血清(04-001-1ACS,BI)+1%雙抗(P1400,索萊寶)重懸細胞后,鋪于培養(yǎng)瓶中,在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。前脂肪細胞的誘導(dǎo)分化,于6孔板中進行,當細胞達到90%融合時,用含160 mol/L油酸的完全培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)分化,每隔1 d更換1次培養(yǎng)基,分別在誘導(dǎo)后0、2、4、6、8 d收集細胞樣品。

    1.3 細胞轉(zhuǎn)染試驗

    采用lipofactamine 2000試劑(11668019,invitrogen),按照試劑盒操作說明,將濃度為50 nmol/L 的miR-215-5p mimics(5′-AUGACCUAUGAAUUGACAGCA-3′,5′-CUGUCAAUUCAUAGGUCAUUU-3′)和mimics NC(5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′,5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3′)以及濃度為100 nmol/L的miR-215-5p 抑制劑(5′-GUCUGUCAAUUCAUAGGUCAU-3′)和抑制劑對照 (5′-CAGUACUUUUGUGUAGUACAA-3′)(銳博生物)分別轉(zhuǎn)染到前體脂肪細胞中。試驗在12孔板或96孔板中進行,當細胞融合達到60% ~ 70%(增殖試驗)或70% ~ 80%(分化試驗)時,完成轉(zhuǎn)染;轉(zhuǎn)染后6 h更換為完全培養(yǎng)基,48 h后收集細胞樣品。

    1.4 實時熒光定量RCR(qRT-PCR)分析

    分別采用Primer SeriptTMRT reagent Kit和Mir-XTMmiRNA First-Strand Synthesis試劑盒(R323,R312,諾維贊)對總RNA進行反轉(zhuǎn)錄,獲得mRNA、miRNA所對應(yīng)的cDNA。定量PCR分析,在Roche LightCycler?96儀器上進行;mRNA所用引物序列見表1,由尚亞生物技術(shù)有限公司合成;miR-215-5p和U6的反轉(zhuǎn)錄和定量引物購自銳博生物有限公司,RT-PCR反應(yīng)程序為 :95 ℃預(yù)變性 5 min;95 ℃變性 12 s,60 ℃退火 40 s,72 ℃延伸 30 s,共40個循環(huán)。所有試驗均重復(fù)3次。分別以U6、β-actin作為miRNA和mRNA定量的內(nèi)參基因,采用2-ΔΔCt法計算miRNA或mRNA相對表達量。

    表1 qRT-PCR分析所用引物

    1.5 CCK-8和EdU分析

    通過CCK-8 (MA0218,美侖生物) 和EdU(C10310-1,銳博生物)分析,評價miR-215-5p對前脂肪細胞增殖的影響。當接種細胞生長至60% ~ 70%融合時,將miR-215-5p mimics和mimics NC以及miR-215-5p inhibitors和inhibitors NC轉(zhuǎn)染細胞。對于CCK-8分析,按照試劑盒操作說明在96孔板上進行,分別于轉(zhuǎn)染后12、24、36、48 h,向每孔細胞各加入10 μL CCK-8試劑,置于37 ℃孵育2 h,用酶標儀(波長450 nm處)檢測細胞活力。對于EdU分析,在6孔板上進行,轉(zhuǎn)染后 36 h,用25 μmol/L濃度的EdU溶液孵育細胞4 h,染色后使用熒光倒置顯微鏡拍照。上述試驗各處理均設(shè)置6個重復(fù)。

    1.6 油紅O染色和甘油三酯含量分析

    將前體脂肪細胞接種于12孔板內(nèi),待細胞70%~80%融合,轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics和mimics NC以及miR-215-5p inhibitors和inhibitors NC,并于轉(zhuǎn)染24 h后更換含160 mol/L油酸(112-80-1,索萊寶)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基,誘導(dǎo)分化后24 h,進行油紅O染色和甘油三酯含量分析,以評價脂肪細胞充脂情況。對于油紅O染色,用4%多聚甲醛溶液固定處理細胞30 min后,加油紅O染液,室溫孵育20 min,棄掉染液用PBS清洗細胞3次,熒光倒置顯微鏡下拍照。然后,向每孔染色后的細胞中加入500 μL異丙醇,10 min后用酶標儀在500 nm波長處測量OD值。另外,采用組織細胞甘油三酯(TG)酶法試劑盒 (E1013-105,普利萊) 檢測脂肪細胞內(nèi)甘油三酯含量,細胞裂解后,按照試劑盒操作對裂解后的細胞進行處理,用酶標儀檢測蛋白含量(595 nm處)和甘油三酯含量(550 nm處)。上述試驗各處理均設(shè)置3個重復(fù)。

    1.7 載體構(gòu)建和雙熒光素酶活性分析

    使用正向引物5′-CCGCTCGAGGTGCTGTACAAAAAAGGTCATATTTTTGGC-3′ 和反向引物5′-ATAAGAATGCGGCCGCGGTATTTCAGGGCTGGCTCTAC-3′擴增包含miR-215-5p結(jié)合位點的NCOA3-3′-UTR序列(NCOA3-3′-UTR-WT);使用突變引物(F:5′-CCGCTCGAGGTGCTGTACAAAAAGTTCAGTATTTTTGGC-3′, R:5′-ATAAGAATGCGGCCGCGGTATTT-CAGGGCTGGCTCTAC-3′)擴增包含突變miR-215-5p結(jié)合位點的NCOA3-3′-UTR序列(NCOA3-3′-UTR-Mut), 片段長度均為130 bp。2個片段擴增成功后,進行膠回收,用XhoⅠ、NotⅠ限制性內(nèi)切酶進行雙酶切并分別與T載體連接;隨后再利用XhoⅠ、NotⅠ限制性內(nèi)切酶,對NCOA3-3′-UTR-WT、NCOA3-3′-UTR-Mut和 psiCHECK2空載體進行雙酶切,并將酶切產(chǎn)物連接psiCHECK2載體。最后,對成功連接psiCHECK2載體的菌液進行大量搖菌,提取重組質(zhì)粒,分別命名為WT-NCOA3和MUT-NCOA3。

    熒光素酶活性分析,在雞成纖維細胞系(DF1細胞)上完成,細胞于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。在24孔板內(nèi),當細胞生長至70%融合時,利用lipofactamine 2000試劑,將miR-215-5p mimics與WT-NCOA3或MUT-NCOA3分別共轉(zhuǎn)染DF1細胞。轉(zhuǎn)染后48 h,按照Dual-Luciferase報告基因檢測系統(tǒng)試劑盒 (Promega) 操作說明,對細胞進行裂解并檢測雙熒光素酶活性。

    1.8 統(tǒng)計分析

    所有數(shù)據(jù)均采用“平均值±標準誤”表示,使用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析。P值的計算采用非配對t檢驗,P<0.05表示差異顯著,P<0.01表示差異極顯著。

    2 結(jié)果

    2.1 雞miR-215-5p的表達譜特征

    采用qRT-PCR分析了miR-215-5p在固始雞14周齡8種組織中以及腹部前體脂肪細胞分化過程中的表達情況。結(jié)果顯示,miR-215-5p在腹脂中相對表達量最高,其次為腎臟和皮脂(圖1A),這表明miR-215-5p可能與雞腹部脂肪沉積相關(guān)。另外,在前脂肪細胞分化的前兩天,miR-215-5p表達水平呈遞增趨勢,至第2天達第一個峰值;從前脂肪細胞分化后第4天,miR-215-5p的表達又逐漸上升,到分化后第8天達到峰值(圖1B)。前體脂肪細胞分化前期伴隨著細胞增殖,因此miR-215-5p的這種動態(tài)表達結(jié)果表明,其在雞前體脂肪細胞增殖和分化過程中可能均發(fā)揮作用。

    A. 在不同組織中的表達;B. 在腹部前脂肪細胞分化不同時間點的表達

    2.2 miR-215-5p抑制雞腹部前體脂肪細胞增殖

    分別將miR-215-5p mimics和mimics NC以及miR-215-5p inhibitors和inhibitors NC轉(zhuǎn)染固始雞腹部前體脂肪細胞,以評價miR-215-5p對雞前脂肪細胞增殖的影響。當轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics后,前脂肪細胞中miR-215-5p表達水平提高了350倍(圖2A);相反,轉(zhuǎn)染miR-215-5p inhibitors后,前脂肪細胞中miR-215-5p的表達水平下降了50倍(圖2B)。實時熒光定量PCR分析顯示,轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics的前脂肪細胞中,細胞增殖標志基因(CDK1和PCNA)的表達水平比對照組極顯著下降(P<0.01),而細胞周期阻滯因子(p21)的表達水平比對照組極顯著升高(P<0.01)(圖2C)。相反,在轉(zhuǎn)染miR-215-5p inhibitors的前脂肪細胞中,與對照組相比CDK1和PCNA的表達水平顯著上升(P<0.05),p21的表達水平顯著下降(P<0.05)(圖2D)。EdU分析表明,過表達miR-215-5p可顯著降低EdU陽性細胞比例(圖3A,3B),而抑制miR-215-5p可顯著提高EdU陽性細胞的比例(圖4A,4B)。CCK-8檢測證實,轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics可顯著降低前脂肪細胞總數(shù)(圖3C),而轉(zhuǎn)染miR-215-5p inhibitors可顯著增加前脂肪細胞總數(shù)(圖4C)。這些結(jié)果證明,miR-215-5p可抑制雞腹部前脂肪細胞的增殖。

    A和B分別為miR-215-5p mimics和inhibitors轉(zhuǎn)染后前脂肪細胞中miR-215-5p的表達量;C和D分別是miR-215-5p mimics和inhibitors轉(zhuǎn)染后前脂肪細胞中增殖標志基因的表達量。*P<0.05,**P<0.01。下同

    A.EdU檢測分析;B. EdU陽性細胞占比統(tǒng)計;C. CCK-8分析

    A. EdU檢測分析;B. EdU陽性細胞占比統(tǒng)計;C. CCK-8分析

    2.3 miR-215-5p抑制雞腹部前體脂肪細胞分化

    將miR-215-5p mimics和mimics NC以及miR-215-5p inhibitors和inhibitors NC分別轉(zhuǎn)染固始雞腹部前脂肪細胞并進行誘導(dǎo)分化,以評價miR-215-5p對雞前脂肪細胞分化的影響。結(jié)果顯示,與對照組相比,轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics可顯著抑制脂肪細胞分化標志基因PPARG、CEBPA、FABP4和LPL的表達(圖5A),而miR-215-5p inhibitors處理則得到了相反的結(jié)果(圖5B)。相應(yīng)地,過表達miR-215-5p顯著減少了分化脂肪細胞中脂滴的數(shù)量,降低了脂質(zhì)積累(圖6);抑制miR-215-5p表達則顯著增加了分化脂肪細胞中脂滴的數(shù)量,促進了脂質(zhì)積累(圖7)。同樣,轉(zhuǎn)染miR-215-5p mimics的脂肪細胞中甘油三酯含量極顯著降低(P<0.01),而轉(zhuǎn)染miR-215-5p inhibitors的脂肪細胞中甘油三酯含量則顯著升高 (P<0.05)(圖8)。這些結(jié)果表明,miR-215-5p可抑制雞腹部前體脂肪細胞的分化。

    圖5 過表達(A)/抑制(B)miR-215-5p對脂肪細胞分化標志基因相對表達量的影響

    A.油紅O染色;B.油紅O含量分析(500 nm波長處讀取的OD值)

    A.油紅O染色;B.油紅O含量分析(500 nm波長處讀取的OD值)

    圖8 過表達/抑制miR-215-5p后脂肪細胞內(nèi)甘油三酯

    2.4 miR-215-5p可直接靶作用于NCOA3基因

    為揭示miR-215-5p在雞腹部前脂肪細胞增殖和分化中的作用機制,利用TargetScan在線軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn),雞NCOA3基因3′-UTR存在miR-215-5p種子區(qū)序列的結(jié)合位點(圖9A)。在細胞中過表達miR-215-5p時,可顯著抑制NCOA3基因的表達(P<0.01);相反,抑制miR-215-5p表達時可顯著促進 NCOA3基因的表達(P<0.05)(圖9B)。這表明,在雞腹部前體脂肪細胞增殖和分化過程中,miR-215-5p和NCOA3基因可能存在潛在的靶向互作關(guān)系?;诖耍贒F1細胞上,通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)試驗,驗證了miR-215-5p和NCOA3的直接靶向關(guān)系。結(jié)果顯示,將miR-215-5p mimics和野生型或突變型psiCHECK2-NCOA3-3′UTR載體共轉(zhuǎn)染DF1細胞48 h后,miR-215-5p可顯著抑制野生型載體熒光素酶活性(P<0.01),而miR-215-5p與突變型載體共轉(zhuǎn)染則可解除該抑制效果(圖9C)。結(jié)果表明,miR-215-5p可直接靶作用于NCOA3基因。

    A.miR-215-5p在NCOA3基因mRNA 3′-UTR的結(jié)合位點和突變位點序列;B.過表達/干擾miR-215-5p后脂肪細胞中NCOA3的相對表達量;C.雙熒光素酶報告試驗

    3 討論

    miR-215屬于mir-192基因家族成員,其在物種間高度保守,對維持物種進化具有重要作用[24]。在人類中,miR-215為基因內(nèi)miRNA,與其宿主基因一起轉(zhuǎn)錄;而miR-215宿主基因異亮氨酰tRNA合成酶2(isoleucyl-tRNA synthetase 2,IARS2)為丙氨酰tRNA合成酶的一種,在蛋白質(zhì)合成第一步催化氨基酸與同源tRNA的共價結(jié)合。研究顯示,miR-215和IARS2的表達在Hirschsprung疾病患者中呈正相關(guān)[25]。另外,miR-215位于常見的脆弱位點(common fragile site)FRA1H(1q41-q42.1)內(nèi),而該位點在許多類型的癌癥中缺失[26]。因此,miR-215是人類疾病中被廣泛研究的一個miRNA,尤其是在不同類型的癌癥中作為致癌基因而受到重視[24]。與此相比,有關(guān)雞miR-215的研究報道還很少。Cai等[27]證實,miR-215-5p在雞心臟中可靶作用于CTCF,而硒缺乏可通過直接靶向作用于miR-215-5p/CTCF軸影響心肌發(fā)育和分化;同時,也證明miR-215-5p可通過直接結(jié)合PI3K基因3′UTR,通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT/TOR通路和 ROS-dependent MAPK通路而調(diào)控心肌細胞存活,在調(diào)控反饋環(huán)中發(fā)揮自噬調(diào)節(jié)作用,促進雞心肌自噬[28]。這表明,miR-215在雞組織器官發(fā)育調(diào)控中也發(fā)揮重要作用。在本研究中,我們通過qRT-PCR分析了雞miR-215-5p的表達譜特征,發(fā)現(xiàn)miR-215-5p在雞腎臟組織高表達,這與先前報道的 miR-215在人腎臟正常組織中高度富集的結(jié)果相一致[29]。尤其重要的是,在所檢測的8種組織中,miR-215-5p在雞腹部脂肪組織中表達水平最高,進一步的分析顯示miR-215-5p在雞腹部前脂肪細胞分化過程呈現(xiàn)明顯的時序表達特征。這表明,miR-215-5p與雞腹脂發(fā)育或脂肪沉積密切相關(guān)。

    脂肪組織發(fā)育是新脂肪細胞增生和脂肪細胞肥大的結(jié)果[9],而腹部脂肪塊的大小則由該部位脂肪細胞的數(shù)量和體積決定的。因此,揭示脂肪細胞增殖和分化機理是闡釋雞腹部脂肪組織發(fā)育及相關(guān)性狀形成分子機制的關(guān)鍵。雖然許多miRNA已被證明可參與動物脂肪細胞增殖和分化調(diào)控[10-15],但有關(guān)雞腹脂發(fā)育過程特定miRNA功能研究還很少。先前的許多研究已證實,miR-215在細胞和組織發(fā)育、細胞凋亡、細胞周期和增殖、細胞遷移和侵襲、細胞微環(huán)境和代謝等基本細胞過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用[24]。為此,本研究通過miR-215-5p mimics和mimics NC、miR-215-5p inhibitors和 inhibitors NC轉(zhuǎn)染試驗,闡明了miR-215-5p對腹部前脂肪細胞增殖和分化的影響,以解釋miR-215-5p在雞腹部脂肪組織發(fā)育的作用。在前脂肪細胞增殖方面,我們發(fā)現(xiàn),miR-215-5p mimics處理可提高p21的表達水平,而顯著降低CDK1和PCNA的表達;相反,miR-215-5p innibitors處理顯著降低了p21的表達水平,而顯著提高了CDK1和PCNA的表達水平。已知CDK是細胞周期的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[30],PCNA是DNA聚合酶的一種輔助性因子[31],二者對細胞增殖起著正向調(diào)控的作用;而p21可抑制 CDK家族各成員的活動[32],從而阻滯細胞增殖。因此,上述結(jié)果表明,miR-215-5p可抑制雞前體脂肪細胞增殖,尤其是EdU和CCK-8的試驗結(jié)果也證實了這一結(jié)論。已知PPARG、CEBPA和LPL是前脂肪細胞分化早期標志基因[33-34],而FABP4(aP2)則是脂肪細胞分化后期標志基因[35]。當固始雞腹部前脂肪細胞過表達miR-215-5p時,可顯著抑制這些脂肪分化標志基因的表達,同時脂滴蓄積明顯減少;而抑制miR-215-5p則獲得了相反結(jié)果。這些結(jié)果表明,miR-215-5p可抑制雞腹部前體脂肪細胞分化,這與先前在3T3-L1細胞上的研究結(jié)果相一致[36]。總之,miR-215-5p是雞腹部前脂肪細胞增殖和分化的負調(diào)控因子,其通過抑制前脂肪細胞的增殖和分化而影響雞腹部脂肪組織的發(fā)育。

    miRNA通過與其靶基因mRNA的3′-UTR結(jié)合而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達。因此,靶基因鑒定是揭示miRNA作用機制的關(guān)鍵。許多研究證明,一些miRNA可直接靶作用于脂肪形成相關(guān)基因而影響脂類代謝或沉積,如miR-155可直接靶作用于脂肪形成的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子C/EBPβ[37],miR-200b-3p在3T3-L1細胞中過表達可降低PPARγ的表達水平[38]。已知NCOA3基因可參與脂類和脂蛋白代謝(metabolism of lipids and lipoproteins)、脂類代謝的PPARα調(diào)控(regulation of lipid metabolism by pero-xisome proliferator activated receptor alpha)、白色脂肪細胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控(transcriptional regulation of white adipocyte differentiation)等與脂類代謝相關(guān)的通路調(diào)控。先前的一些研究也證實,NCOA3在調(diào)節(jié)小鼠脂肪蓄積中發(fā)揮關(guān)鍵作用[39-40];并且,敲除NCOA3基因后,小鼠模型的脂肪沉積顯著減少[41-42];此外,NCOA3能與PPARγ相結(jié)合,減少PPARγ-S114磷酸化,促進PPARγ的轉(zhuǎn)錄活性,從而促進脂肪沉積[43]。在豬前脂肪細胞分化過程中,NCOA3可被miR-17-5p靶向作用[22]。這些研究表明,NCOA3是脂類代謝或沉積的一個重要的正向調(diào)控因子。本研究通過過表達試驗和熒光素酶報告基因系統(tǒng)也證明,在雞腹部前脂肪細胞分化過程中,NCOA3是miR-215-5p的一個直接靶基因。因此,miR-215-5p可通過靶作用于NCOA3而負調(diào)控雞腹部脂肪形成。

    生物體內(nèi),一個miRNA能夠調(diào)控許多靶基因。在不同生物學(xué)背景中,miR-215的許多靶基因已經(jīng)被確定。例如,在3T3-L1細胞中,miR-215-5p通過靶作用于III型纖維連接蛋白結(jié)構(gòu)域3B(fibronectin type Ⅲ domain containing 3B,F(xiàn)NDC3B)和連環(huán)蛋白beta互作蛋白1(catenin, beta interactingprotein 1,CTNNBIP1)而負調(diào)控3T3-L1細胞早期脂肪形成[36]。在胃癌中,miR-215可直接靶作用于轉(zhuǎn)錄因子RUNX1(runt-related transcription factor 1)[44],而RUNX1在所有造血部位表達,有助于造血干細胞和祖細胞的形成[45]。然而,miR-215-5p在雞這些基因上都沒有結(jié)合位點。事實上,miRNA與基因mRNA的靶向互作關(guān)系因組織、細胞類型和生理狀態(tài)而不同[46]。因此,我們推測,在雞腹部前脂肪細胞增殖、分化過程中,miR-215-5p可能還存在許多未知的靶基因,它們形成一個復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò),共同參與雞腹脂沉積調(diào)控,下一步將聚焦于雞腹脂形成相關(guān)靶基因的鑒定和互作調(diào)控機制研究。

    猜你喜歡
    前體脂肪組織分化
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    N-末端腦鈉肽前體與糖尿病及糖尿病相關(guān)并發(fā)癥呈負相關(guān)
    高脂肪飲食和生物鐘紊亂會影響體內(nèi)的健康脂肪組織
    中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:49:52
    雙源CT對心臟周圍脂肪組織與冠狀動脈粥樣硬化的相關(guān)性
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    N-端腦鈉肽前體測定在高血壓疾病中的應(yīng)用研究
    Cofilin與分化的研究進展
    白色脂肪組織“棕色化”的發(fā)生機制
    茶葉香氣前體物研究進展
    茶葉通訊(2014年2期)2014-02-27 07:55:40
    苦瓜降低脂肪組織炎性改善肥胖小鼠糖脂代謝紊亂
    黄片无遮挡物在线观看| 看免费成人av毛片| 国产av一区二区精品久久| 国产精品久久久久成人av| 美女福利国产在线| www.精华液| 青春草视频在线免费观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲精品日本国产第一区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜老司机福利剧场| 91精品三级在线观看| 午夜免费观看性视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日韩一区二区三区影片| 在线观看免费高清a一片| 亚洲内射少妇av| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 夫妻性生交免费视频一级片| 在线观看一区二区三区激情| av在线app专区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 在线观看免费高清a一片| 久久青草综合色| 欧美日韩精品成人综合77777| 老熟女久久久| 婷婷色av中文字幕| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产av码专区亚洲av| av网站免费在线观看视频| 久久av网站| 男人爽女人下面视频在线观看| 一级片'在线观看视频| 伦理电影大哥的女人| 丝瓜视频免费看黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 99热国产这里只有精品6| 日韩av不卡免费在线播放| 天天操日日干夜夜撸| 熟女av电影| 亚洲精品国产av蜜桃| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 久久久久精品久久久久真实原创| tube8黄色片| 中国国产av一级| 少妇人妻久久综合中文| 午夜福利在线免费观看网站| 老熟女久久久| 日韩免费高清中文字幕av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲国产精品999| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品在线美女| 晚上一个人看的免费电影| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 少妇人妻精品综合一区二区| 男女午夜视频在线观看| 97在线视频观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲精品第二区| 香蕉丝袜av| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 人体艺术视频欧美日本| 好男人视频免费观看在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一区二区三区乱码不卡18| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久久久久人人人人人| av视频免费观看在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 超色免费av| 国产成人91sexporn| 亚洲内射少妇av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品久久久久久久久免| 国产成人精品一,二区| 国产精品不卡视频一区二区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲成色77777| 国产成人精品久久久久久| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 99香蕉大伊视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 男女边吃奶边做爰视频| 精品国产国语对白av| 欧美日韩av久久| 丝瓜视频免费看黄片| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日韩人妻精品一区2区三区| 色吧在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 秋霞在线观看毛片| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲成色77777| 午夜av观看不卡| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成人漫画全彩无遮挡| av在线播放精品| videossex国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲av在线观看美女高潮| 蜜桃在线观看..| 最近中文字幕2019免费版| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 丰满乱子伦码专区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产成人aa在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 国产成人精品无人区| av免费在线看不卡| 精品午夜福利在线看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成人国语在线视频| 久久99热这里只频精品6学生| 美女国产高潮福利片在线看| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久精品国产a三级三级三级| 久久久欧美国产精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 母亲3免费完整高清在线观看 | 日韩中文字幕视频在线看片| 免费观看无遮挡的男女| 97精品久久久久久久久久精品| 在线观看人妻少妇| 免费大片黄手机在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 日韩三级伦理在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 成年女人在线观看亚洲视频| 九草在线视频观看| 丝袜人妻中文字幕| 久久久国产一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 嫩草影院入口| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲经典国产精华液单| 免费高清在线观看视频在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 观看美女的网站| 久久久精品区二区三区| 国产精品不卡视频一区二区| 桃花免费在线播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 亚洲av男天堂| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲精品美女久久av网站| 女人精品久久久久毛片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久久国产精品麻豆| 大码成人一级视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| av.在线天堂| 久久久久人妻精品一区果冻| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲成人av在线免费| 在线观看三级黄色| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 国产亚洲欧美精品永久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 成人手机av| 9191精品国产免费久久| 久久这里有精品视频免费| 成人黄色视频免费在线看| 在线观看免费高清a一片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 熟女av电影| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 9热在线视频观看99| 国产淫语在线视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 免费黄色在线免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 免费黄频网站在线观看国产| 超色免费av| 久久精品国产综合久久久| 午夜福利一区二区在线看| 国产极品天堂在线| 日韩免费高清中文字幕av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲三区欧美一区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 18禁国产床啪视频网站| 国产97色在线日韩免费| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人精品无人区| 91在线精品国自产拍蜜月| 一级爰片在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 黄色视频在线播放观看不卡| 美女脱内裤让男人舔精品视频| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲成人一二三区av| h视频一区二区三区| 久久久久国产网址| 麻豆av在线久日| 久久99一区二区三区| 亚洲伊人久久精品综合| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久精品久久久久久久性| 丁香六月天网| 久久国产精品大桥未久av| 少妇的丰满在线观看| 国产成人av激情在线播放| 久久人人爽人人片av| 久久久欧美国产精品| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 性色avwww在线观看| 国产野战对白在线观看| 老司机影院毛片| 亚洲av成人精品一二三区| 国精品久久久久久国模美| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲精品一二三| av网站免费在线观看视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久这里有精品视频免费| 日韩一本色道免费dvd| 一级片'在线观看视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 青春草视频在线免费观看| 亚洲av日韩在线播放| 69精品国产乱码久久久| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产精品无大码| 伦理电影免费视频| 久久久精品区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文字幕色久视频| 欧美日韩av久久| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美bdsm另类| 在线观看免费视频网站a站| 99久久人妻综合| 美女福利国产在线| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲精品国产av蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产又爽黄色视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 性少妇av在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久精品区二区三区| 国产成人一区二区在线| 69精品国产乱码久久久| 中文字幕av电影在线播放| 婷婷色av中文字幕| videosex国产| 久久久久久伊人网av| 男女国产视频网站| 在线 av 中文字幕| 九九爱精品视频在线观看| 国产不卡av网站在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 国产高清国产精品国产三级| 免费看av在线观看网站| 亚洲国产日韩一区二区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美97在线视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 两个人看的免费小视频| 国产一级毛片在线| 人体艺术视频欧美日本| av网站在线播放免费| 国产一级毛片在线| 亚洲人成77777在线视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 青春草国产在线视频| 久久久国产精品麻豆| 天堂8中文在线网| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| videos熟女内射| 日韩伦理黄色片| 青春草国产在线视频| 中文天堂在线官网| 国产精品熟女久久久久浪| 老司机影院毛片| 久久久久久久精品精品| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲国产精品一区三区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 精品亚洲成a人片在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 欧美成人精品欧美一级黄| 2022亚洲国产成人精品| 水蜜桃什么品种好| 成年美女黄网站色视频大全免费| 精品少妇内射三级| 大香蕉久久网| xxxhd国产人妻xxx| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 少妇被粗大的猛进出69影院| 高清av免费在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产 一区精品| 一区二区三区乱码不卡18| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 在线观看美女被高潮喷水网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| av一本久久久久| av在线app专区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 狂野欧美激情性bbbbbb| 丝袜美腿诱惑在线| www.精华液| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美人与善性xxx| 午夜av观看不卡| 国产亚洲最大av| 国产片特级美女逼逼视频| 少妇精品久久久久久久| 香蕉丝袜av| 激情五月婷婷亚洲| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 丝袜美腿诱惑在线| 高清av免费在线| 国产精品久久久久久久久免| 大香蕉久久网| 亚洲内射少妇av| 18禁动态无遮挡网站| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品人妻久久久影院| 欧美成人午夜精品| 美女高潮到喷水免费观看| 人人妻人人澡人人看| 又黄又粗又硬又大视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩中字成人| av电影中文网址| 日韩一区二区视频免费看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久热在线av| 18禁观看日本| 女人久久www免费人成看片| 日韩三级伦理在线观看| 飞空精品影院首页| 男女免费视频国产| 伦理电影免费视频| 亚洲图色成人| 91aial.com中文字幕在线观看| 一本大道久久a久久精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 最近最新中文字幕免费大全7| 激情视频va一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 永久免费av网站大全| 日本av免费视频播放| 好男人视频免费观看在线| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 日本av免费视频播放| 午夜老司机福利剧场| 国产一区二区三区综合在线观看| 一级毛片 在线播放| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲综合精品二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产 一区精品| 国产乱来视频区| 成人毛片60女人毛片免费| 国产1区2区3区精品| 久久久a久久爽久久v久久| 国产 一区精品| 水蜜桃什么品种好| 香蕉丝袜av| 各种免费的搞黄视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美精品一区二区大全| 激情五月婷婷亚洲| 国产深夜福利视频在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| av国产精品久久久久影院| 国产日韩欧美在线精品| 观看av在线不卡| 色播在线永久视频| 热99久久久久精品小说推荐| 女人精品久久久久毛片| 激情视频va一区二区三区| 永久网站在线| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜影院在线不卡| 99香蕉大伊视频| 少妇人妻精品综合一区二区| 90打野战视频偷拍视频| 欧美另类一区| 亚洲av综合色区一区| 午夜福利网站1000一区二区三区| 丝袜美足系列| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲内射少妇av| 在线观看人妻少妇| av福利片在线| 蜜桃国产av成人99| 国产精品无大码| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日韩精品有码人妻一区| 丝袜喷水一区| 一边亲一边摸免费视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| av一本久久久久| 亚洲男人天堂网一区| 天堂8中文在线网| 岛国毛片在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| 久久99一区二区三区| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩视频精品一区| 伊人久久国产一区二区| 美女国产视频在线观看| 免费少妇av软件| av又黄又爽大尺度在线免费看| 秋霞伦理黄片| 9色porny在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 看十八女毛片水多多多| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产日韩欧美视频二区| 久久99蜜桃精品久久| 国产爽快片一区二区三区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日本欧美视频一区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产毛片在线视频| 天堂8中文在线网| 国产免费现黄频在线看| 在线 av 中文字幕| 青草久久国产| 国产深夜福利视频在线观看| 大片电影免费在线观看免费| 国产成人一区二区在线| 久久午夜福利片| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久精品夜色国产| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 999精品在线视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 中文字幕制服av| 中国三级夫妇交换| 亚洲人成网站在线观看播放| 高清不卡的av网站| 免费观看在线日韩| 三级国产精品片| 日本色播在线视频| 中文字幕亚洲精品专区| 国产97色在线日韩免费| 午夜免费观看性视频| 国产综合精华液| 久久精品人人爽人人爽视色| a级毛片黄视频| 中文欧美无线码| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 精品久久蜜臀av无| 宅男免费午夜| 色哟哟·www| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 成年人免费黄色播放视频| 国产在视频线精品| 亚洲人成电影观看| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲精品国产av蜜桃| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产又色又爽无遮挡免| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 在线天堂中文资源库| 欧美人与性动交α欧美软件| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲图色成人| 免费av中文字幕在线| 精品人妻熟女毛片av久久网站| av电影中文网址| 婷婷色麻豆天堂久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产精品人妻久久久影院| 尾随美女入室| 亚洲国产最新在线播放| 伊人亚洲综合成人网| 黄色 视频免费看| 一本色道久久久久久精品综合| 另类亚洲欧美激情| 99久久综合免费| 电影成人av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩中文字幕视频在线看片| 午夜福利,免费看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 1024视频免费在线观看| av线在线观看网站| 午夜激情久久久久久久| 在线天堂中文资源库| 老司机亚洲免费影院| 日本av免费视频播放| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲国产精品一区三区| 叶爱在线成人免费视频播放| 最近手机中文字幕大全| 熟女电影av网| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产精品.久久久| 久久韩国三级中文字幕| 看免费成人av毛片| 午夜免费鲁丝| 亚洲久久久国产精品| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲,欧美,日韩| 天美传媒精品一区二区| 国产精品二区激情视频| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 9色porny在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 在线看a的网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 美女大奶头黄色视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 电影成人av| 美女视频免费永久观看网站| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产探花极品一区二区| 精品久久久精品久久久| 街头女战士在线观看网站| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 国产成人av激情在线播放| 国产成人精品久久久久久| 蜜桃国产av成人99| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久人妻熟女aⅴ| 老汉色∧v一级毛片| 日韩伦理黄色片| 精品人妻在线不人妻| 久久久久久久精品精品| 交换朋友夫妻互换小说| 丝瓜视频免费看黄片| 国产人伦9x9x在线观看 | 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久久伊人网av| av视频免费观看在线观看| 99九九在线精品视频| 国产黄频视频在线观看| 一级爰片在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 欧美亚洲日本最大视频资源| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人精品在线电影| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 久久久精品94久久精品| 国产精品一区二区在线观看99| 成年人午夜在线观看视频| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 午夜91福利影院| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品国产av蜜桃| av一本久久久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 999精品在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 99精国产麻豆久久婷婷| 婷婷成人精品国产| 亚洲欧洲日产国产| 欧美日韩综合久久久久久| 最近的中文字幕免费完整| 国产97色在线日韩免费| 久久鲁丝午夜福利片| av电影中文网址| 观看av在线不卡| 国产午夜精品一二区理论片| 久久韩国三级中文字幕| 只有这里有精品99| 美女午夜性视频免费| 大片免费播放器 马上看| 国产精品成人在线| 欧美精品高潮呻吟av久久| 啦啦啦在线免费观看视频4| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 黄色怎么调成土黄色| 久久久亚洲精品成人影院| 伊人久久国产一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品酒店卫生间| 国产亚洲一区二区精品|