細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)結(jié)合HR-HPV在宮頸癌篩查中的應(yīng)用

王建 黃種心

宮頸癌已成為發(fā)展中國(guó)家，僅次于乳腺癌的女性常見(jiàn)惡性腫瘤之一[1]，其發(fā)生率為10.4%～18.2%，死亡率為4.1%～12%[2]。近幾年，隨著工作壓力的增加，環(huán)境污染日益加重等綜合性因素，宮頸癌及癌前病變的患者與日俱增，且日趨年輕化[3]。人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是常見(jiàn)生殖道感染病毒，16和18型則屬于高危型。高危型HPV持續(xù)性感染與多重感染是促使宮頸癌發(fā)生的最主要病因。隨著社會(huì)性觀念的轉(zhuǎn)變，性生活過(guò)早、性伴侶多的現(xiàn)象普遍，年輕女性感染HPV概率高達(dá)80%左右[4]。本研究通過(guò)細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)結(jié)合HR-HPV檢測(cè)，討論兩者結(jié)合的篩查方案在宮頸癌及癌前病變篩查及診斷的臨床意義與應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1—12月醫(yī)院1 000例宮頸細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，年齡20～60歲，均有性生活史，所有患者均做HR-HPV檢測(cè)和DNA倍體分析系統(tǒng)檢測(cè)，將DNA倍體分析系統(tǒng)的結(jié)果結(jié)合HR-HPV檢測(cè)進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2 方法

1.2.1 宮頸標(biāo)本采集 檢查前3～5 d不做陰道沖洗與用藥，經(jīng)婦科醫(yī)師采樣、送檢。采用常規(guī)液基細(xì)胞學(xué)制片方法：制成細(xì)胞涂片，行Feulgen染色，用全自動(dòng)細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)做DNA TBS細(xì)胞定量測(cè)定[5]。

1.2.2 細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng) 染色片用MoticEasyScan數(shù)字切片掃描與應(yīng)用系統(tǒng)和MotiCytometer全自動(dòng)細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)掃描處理。該系統(tǒng)由全自動(dòng)數(shù)碼顯微鏡對(duì)玻片中細(xì)胞核（約12 000個(gè)）進(jìn)行掃描測(cè)定，以標(biāo)本中正常細(xì)胞作為內(nèi)參照，并根據(jù)132個(gè)參數(shù)特征值對(duì)被測(cè)細(xì)胞核進(jìn)行自動(dòng)分類(lèi)和計(jì)數(shù)。細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果如下：（1）陰性：以正常二倍體細(xì)胞為主，未見(jiàn)非整倍體細(xì)胞或增生細(xì)胞占檢測(cè)細(xì)胞總數(shù)＜5%。（2）可疑：DNA倍體異常細(xì)胞1～2個(gè)或可見(jiàn)少量增生（占檢測(cè)細(xì)胞總數(shù)的5%～10%）。（3）陽(yáng)性：出現(xiàn)DNA倍體異常細(xì)胞≥3個(gè)或可見(jiàn)細(xì)胞異常增生（占檢測(cè)細(xì)胞總數(shù)＞10%）或非整倍體細(xì)胞峰者即異倍體峰[6]。對(duì)于部分系統(tǒng)圖像難以確定的細(xì)胞核，需人工復(fù)核辨別，確保準(zhǔn)確性。

1.2.3 采用羅氏Cobas 4 800高危型HPV分型 提取樣本DNA，在Cobas 4 800分析儀中，進(jìn)行PCR擴(kuò)增和熒光檢測(cè)。在陰、陽(yáng)性對(duì)照有效的前提下，可檢測(cè)14種分型，分為16、18及12種其他型別（31、33、35等）3類(lèi)，其中1類(lèi)或以上陽(yáng)性結(jié)果即為HR-HPV陽(yáng)性，不報(bào)告病毒載量[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料如各個(gè)組別陽(yáng)性率結(jié)果表示為（n，%），比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織病理結(jié)果、HR-HPV感染情況及DNA倍體分析結(jié)果

宮頸組織病理結(jié)果炎癥及輕度糜爛476例，CIN I 225例，CIN II 152例，CIN III 92例，SCC 55例。其中HR-HPV陽(yáng)性547例，陰性453例。DNA定量分析結(jié)果：陰性668例、可疑193例、陽(yáng)性139例。

2.2 宮頸組織病理結(jié)果與HR-HPV感染情況

組織學(xué)診斷分別：炎癥及輕度糜爛、CIN Ⅰ、CINⅡ、CIN Ⅲ、SCC各組中，HR-HPV陽(yáng)性數(shù)131例、152例、121例、80例、50例，陽(yáng)性率27.5%、67.6%、79.6%、87.0%、90.9%，各組間陽(yáng)性率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，χ2=2 597）。HR-HPV陽(yáng)性率隨著組織惡性度增加而增加。

2.3 不同級(jí)別的細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果與陽(yáng)性率感染的關(guān)系

細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果：陰性668例，可疑193例，陽(yáng)性139例，相對(duì)應(yīng)HR-HPV陽(yáng)性數(shù)為247例、146例、124例，HR-HPV陽(yáng)性率37.0%、75.6%、89.2%。各組間陽(yáng)性率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，DNA倍體分析結(jié)果陽(yáng)性的HR-HPV陽(yáng)性率高于結(jié)果陰性的HRHPV陽(yáng)性率（P＜0.01，χ2=180.7）。

2.4 宮頸組織病理與細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果的關(guān)系

細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果：陰性668例、可疑193例、陽(yáng)性139例。宮頸組織病理正?；蛎訝€、CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ、SCC對(duì)應(yīng)陽(yáng)性數(shù)及陽(yáng)性率為8/1.68%、12/5.33%、19/12.50%、58/63.04%、42/76.36%。各組間陽(yáng)性率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，惡性度高的陽(yáng)性率高于惡性度低的陽(yáng)性率（P＜0.05，χ2=3 198）。

2.5 細(xì)胞DNA倍體分析結(jié)果、HR-HPV檢測(cè)結(jié)果與組織病理結(jié)果的相關(guān)性

組織病理結(jié)果異常（惡性度由低到高）225例、152例、92例、55例，單獨(dú)進(jìn)行二者檢測(cè)，其陽(yáng)性率5.3%～90.9%不等。如果二者結(jié)合，陽(yáng)性率70.7%～100%（二者聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：兩種檢測(cè)方法的結(jié)果，其中一種方法結(jié)果為陽(yáng)性則為二者結(jié)合陽(yáng)性例數(shù)）。如表1。

表1 DNA倍體分析結(jié)果、HPV檢測(cè)結(jié)果與宮頸活檢病理結(jié)果的相關(guān)性

3 討論

宮頸細(xì)胞學(xué)檢查是宮頸癌及癌前病變篩查常規(guī)且有效的方法，特別是液基薄層制片技術(shù)和宮頸細(xì)胞學(xué)TBS報(bào)告系統(tǒng)的引進(jìn)，很大程度的提升了細(xì)胞學(xué)的診斷水平與檢出率。在篩查中有特殊且重要的作用，無(wú)創(chuàng)，便捷，準(zhǔn)確率高，但篩檢敏感度偏低，受人為主觀因素、技術(shù)人員操作等綜合因素影響，假陰性偏高、存在一定假陽(yáng)性率。目前，全自動(dòng)細(xì)胞DNA倍體分析技術(shù)是通過(guò)高精密的顯微鏡自動(dòng)掃描宮頸液基薄層玻片，利用正常人體體細(xì)胞DNA倍體含量恒定（二倍體），在細(xì)胞發(fā)生癌變或癌前病變的過(guò)程中，DNA含量不規(guī)律增多，DNA倍體發(fā)生一定的改變。通過(guò)分析細(xì)胞核內(nèi)DNA含量與結(jié)構(gòu)變化，判斷細(xì)胞是否產(chǎn)生病變，DNA倍體特殊變化是判斷細(xì)胞良、惡性的重要參考指標(biāo)[8-9]，其敏感度與特異度都很高。大量研究實(shí)驗(yàn)與數(shù)據(jù)證實(shí)，HPV感染與宮頸癌及癌前病變有著千絲萬(wàn)縷的關(guān)系，隨著組織病理癌變級(jí)別越高，感染HPV或多重感染機(jī)率越高，陽(yáng)性率27.5%～90.9%。細(xì)胞DNA倍體分析技術(shù)的運(yùn)用，取材便捷，對(duì)患者身體損傷較小，患者的配合度高，由計(jì)算機(jī)自動(dòng)識(shí)別、篩檢出可疑的異型細(xì)胞，極大的解放人工的成本與工作量，且對(duì)比常規(guī)細(xì)胞學(xué)的準(zhǔn)確率及吻合度很高，細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)檢出宮頸病理組織陽(yáng)性率為5.3%～76.4%不等。如果采用細(xì)胞學(xué)DNA倍體分析系統(tǒng)與HR-HPV檢測(cè)相結(jié)合，則同等條件下，較大的提高了陽(yáng)性檢出率70.7%～100%與準(zhǔn)確率。二者檢測(cè)結(jié)合準(zhǔn)確率與陽(yáng)性率明顯優(yōu)于單種方法學(xué)檢查。宮頸癌及癌前病變的初篩檢查，一次取樣兩種檢測(cè)，極大提高篩查率，降低假陰性和假陽(yáng)性機(jī)率，減少漏診。該技術(shù)在基層一線工作中就早癌篩查得到一定的肯定與常規(guī)運(yùn)用，對(duì)基層的防癌抗癌工作落實(shí)有很大促進(jìn)與幫助[10-11]。

綜上所述，宮頸癌及癌前病變的預(yù)防措施要做到早診斷、早發(fā)現(xiàn)、早治療，可以極大的降低宮頸癌的發(fā)生率與死亡率[12-14]。細(xì)胞DNA倍體分析系統(tǒng)與HR-HPV檢測(cè)結(jié)合，明顯優(yōu)于單獨(dú)檢測(cè)，有效彌補(bǔ)雙方方法學(xué)局限性與不足，很大程度提高宮頸癌敏感性與特異性，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷，可以大力推廣到基層防癌抗癌普查工作中。