• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    5 種蒿屬植物提取物對(duì)馬鈴薯晚疫病的抑菌活性研究

    2021-07-08 08:32:36何彥儀羅雨薇許美瀅竺永金鄭紅宇胡世俊閆曉慧
    關(guān)鍵詞:牛尾餾分晚疫病

    何彥儀 羅雨薇 許美瀅 竺永金 鄭紅宇 胡世俊 閆曉慧

    (1.西南林業(yè)大學(xué)生物多樣性保護(hù)學(xué)院,云南省森林災(zāi)害預(yù)警與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南 昆明 650233;2.西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院,西南地區(qū)生物多樣性保育國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南 昆明 650233)

    馬鈴薯晚疫病是由致病疫霉菌(Phytophtora infestans)引起、對(duì)馬鈴薯(Solanum tuberosum)具有毀滅性的疾病[1]。馬鈴薯晚疫病在全球范圍內(nèi)廣泛傳播、危害大、難防控,已經(jīng)超過(guò)水稻稻瘟病和小麥銹病,被視為國(guó)際第1 大作物病害[2-3]。馬鈴薯晚疫病的防治措施均以化學(xué)防治為主,輔以簡(jiǎn)易的生物防治與物理防治?;瘜W(xué)農(nóng)藥的使用次數(shù)和劑量的增加在一定程度上促使致病菌株產(chǎn)生抗藥性,造成環(huán)境污染與農(nóng)藥殘留等問(wèn)題,導(dǎo)致防治效果降低[4]。植物源農(nóng)藥具有對(duì)生態(tài)環(huán)境安全、非靶標(biāo)生物影響較小、原材料來(lái)源廣泛等優(yōu)點(diǎn),因此從植物中尋找新的殺菌抑菌活性物質(zhì)、研制開(kāi)發(fā)新型植物源農(nóng)藥是當(dāng)下的熱點(diǎn)[5]。

    牛尾蒿(Artemisia dubia)隸屬菊科(Compositae)蒿屬(Artemisia),為中國(guó)特有種,生于海拔3500 m 以下的山坡、草原、疏林及林緣地,主要分布于內(nèi)蒙古、甘肅、四川、云南、西藏等省份[6]。研究表明,蒿屬植物及其活性化合物被認(rèn)為具有抗瘧、抗氧化、驅(qū)蟲(chóng)、神經(jīng)保護(hù)、抗炎和抗微生物等作用[7]。牛尾蒿為我國(guó)傳統(tǒng)藏藥,可作牲畜飼養(yǎng)材料;結(jié)合已有文獻(xiàn)報(bào)道,牛尾蒿具有多種生物活性,如對(duì)煙草甲(Lasioderma serricorne)具趨避活性、抗豬流行性腹瀉病毒等[8–10];目前牛尾蒿在應(yīng)用研究上大多為藥用上的研究,有研究指出牛尾蒿提取物對(duì)人體致病菌,如白色念珠菌(Candida albicans)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、藤黃微球菌(Micrococcus luteus)和大腸桿菌(Escherichia coli)均有不同程度的抑制活性[11]。

    本研究以5 種蒿屬植物的乙醇提取物為供試材料,對(duì)2 株馬鈴薯晚疫病菌進(jìn)行菌絲生長(zhǎng)抑制活性測(cè)定并進(jìn)行活性成分篩選,為深入研究其抑菌活性成分、防治馬鈴薯晚疫病提供了新思路,也為植物源新農(nóng)藥的先導(dǎo)化合物開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)[12-13]。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 植物材料

    植物材料于2018 年5—8 月份采自云南昆明(102°10′~103°40′E,24°23′~26°22′N)、遼寧喀左(119°24′~120°23′E,40°47′~41°33′N)(表1),由西南林業(yè)大學(xué)胡世俊副教授鑒定,植物樣品保存于云南省森林災(zāi)害預(yù)警與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

    表1 供試植物名錄Table 1 List of tested plants

    1.1.2 供試菌株

    馬鈴薯晚疫病菌pn5502 和pn7604 菌株,由云南省農(nóng)科院趙志堅(jiān)研究員提供。

    1.1.3 培養(yǎng)基

    本實(shí)驗(yàn)采用黑麥培養(yǎng)基。按照黑麥60 g、瓊脂18 g、白砂糖15 g、水1000 mL 的比例制作黑麥培養(yǎng)基。

    1.2 儀器與試劑

    N?1100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司,中國(guó))、柱層析硅膠及GF254 薄層層析硅膠板(青島海洋化工廠,中國(guó));72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑(上海杜邦農(nóng)化有限公司,中國(guó)),試劑甲醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿及二甲基亞砜(云南楊林汕滇藥業(yè)有限公司,中國(guó))等試劑均為分析純。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 植物提取物及牛尾蒿提取物不同餾分的制備

    植物材料風(fēng)干粉碎,采用乙醇回流提取法[14],分別提取3 次,每次4 h。合并3 次提取液,再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至浸膏狀,得到乙醇提取物備用。牛尾蒿提取物經(jīng)常壓硅膠柱層析,以石油醚、石油醚?丙酮(V石油醚∶V乙酸乙酯=30∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、0∶1)、氯仿?甲醇(V氯仿∶V甲醇=1∶1)等溶劑系統(tǒng)依次進(jìn)行梯度洗脫,經(jīng)薄層層析檢測(cè),合并相同組分,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮回收溶劑,得到Fr1~Fr1010 個(gè)不同餾分。

    1.3.2 抑菌活性測(cè)定方法

    已純化的馬鈴薯晚疫病菌在無(wú)菌環(huán)境下挑取菌絲接到黑麥培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng),每4~5 d進(jìn)行1 次,直至病菌長(zhǎng)滿平板,在菌落邊緣打菌餅備用[15]。采用帶毒平板法[16-17]測(cè)定5 種蒿屬植物粗提物抑菌活性,將植物提取物用二甲基亞砜(DMSO)配置成100 mg/mL 的母液并采用巴氏消毒法對(duì)母液進(jìn)行滅菌備用,無(wú)菌條件下將一定量的母液加入即將冷卻的已滅菌黑麥培養(yǎng)基中并充分混勻,使提取物最終濃度為1 mg/mL,以含等量DMSO 溶劑的黑麥培養(yǎng)基作為空白對(duì)照(CK),陽(yáng)性對(duì)照為同濃度的霜脲·錳鋅。待培養(yǎng)基凝固后,每皿中央接入1 個(gè)菌餅(Φ=5 mm),每個(gè)處理重復(fù)3 次;28 ℃電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),采用十字交叉法對(duì)菌落進(jìn)行測(cè)量,記錄其平均直徑。按公式(1)~(2)計(jì)算抑制率。

    1.3.3 抑制中濃度(EC50)測(cè)定方法

    將牛尾蒿乙醇提取物餾分Fr1制成0.25、0.125、0.0625、0.03125、0 mg/mL 5 個(gè)濃度的帶毒平板,觀察2 株馬鈴薯晚疫病菌的生長(zhǎng)情況,根據(jù)Fr1在不同濃度下對(duì)2 株菌的抑制效果,分別針對(duì)2 株菌設(shè)定濃度梯度進(jìn)行毒力測(cè)定:1)對(duì)菌株pn7604 濃度為62.5、31.25、15.625、7.8125、0 μg/mL;2)對(duì)菌株pn5502 濃度為1、5、2.5、1.25、0 μg/mL。

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    運(yùn)用SPSS 22.0 軟件統(tǒng)計(jì),采用單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性分析,分別求出各供試組分的毒力回歸方程、EC50值、95%置信區(qū)間和決定系數(shù)(R2)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 5 種植物粗提物的抑菌活性

    由表2 可知,5 種植物提取物在1 mg/mL 下對(duì)2 株供試病原菌有不同程度的抑菌作用,抑菌率為28.08%~89.04%,不同提取物抑菌作用存在極顯著差異(P<0.01),其中牛尾蒿提取物對(duì)供試菌株pn5502、pn7604 的抑菌活性最強(qiáng),抑菌率分別為89.04%和71.38%。

    表2 5 種植物粗提物對(duì)馬鈴薯晚疫病菌菌株pn5502、pn7604 的抑制率Table 2 Results of the antifungal activities of 5 plant crude extracts against pn5502 and pn7604 strains of P. infestans

    2.2 牛尾蒿各餾分對(duì)供試菌株的抑菌活性篩選

    由表3 可知,餾分Fr1在0.5 mg/mL 下對(duì)2 株供試菌有顯著抑菌活性,抑制率均高達(dá)100%,此外餾分Fr2、Fr5、Fr6也顯示出較高的抑菌效果,抑菌率均在50%以上。

    表3 牛尾蒿的不同餾分對(duì)馬鈴薯晚疫病菌菌株pn5502 的抑制率Table 3 Antifungal activity of different fractions of A.dubia against pn5502 of P. infestans

    根據(jù)表4 的活性測(cè)定結(jié)果,擬合出各提取物的毒力方程見(jiàn)表5;陽(yáng)性對(duì)照對(duì)pn5502、pn7604 的EC50分別為273.8000、155.0000 μg/mL;Fr1對(duì)pn5502、pn7604 的EC50分別為7.4733、9.4634 μg/mL,明顯高于陽(yáng)性對(duì)照。

    表4 牛尾蒿餾分Fr1 濃度梯度活性篩選Table 4 Concentration gradient activity screening of A.dubia Fr1

    表5 Fr1、霜脲·錳鋅對(duì)pn5502、pn7604 抑制的回歸分析Table 5 The concentration for 50% of maximal effect of Fr1,cymoxanil·mancozeb on pn5502 and pn7604

    2.3 牛尾蒿提取物對(duì)菌絲形態(tài)的影響

    由圖1 可知,牛尾蒿Fr1餾分處理后的2 株馬鈴薯晚疫病菌與CK 有明顯差異。正常生長(zhǎng)的pn5502、pn7604 菌絲體粗細(xì)均勻、表面光滑、分枝較少、發(fā)育正常、內(nèi)含物豐富且均勻分布,受抑制的菌絲均產(chǎn)生明顯的畸變,F(xiàn)r1(31.25 μg/mL)處理的pn5502、pn7604 菌絲變得粗大分枝較多,且分枝間距密集,菌絲體內(nèi)含物聚集,細(xì)胞壁不光滑,出現(xiàn)明顯畸形。霜脲·錳鋅(250 μg/mL)處理的pn7604 菌絲形態(tài)與Fr1(31.25 μg/mL)處理相似,表明餾分Fr1對(duì)pn5502、pn7604 菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制效果,且活性明顯高于陽(yáng)性對(duì)照。

    圖1 pn5502、pn7604 菌絲生長(zhǎng)情況顯微圖Fig.1 Micrograph of mycelium growth of pn5502 and pn7604

    3 結(jié)論與討論

    目前防治馬鈴薯晚疫病主要依靠培育抗病品種和施用化學(xué)藥劑,由于致病疫霉遺傳變異迅速,已出現(xiàn)能克服現(xiàn)有全部抗病基因的菌株,且致病疫霉屬于卵菌,無(wú)細(xì)胞甲殼素和麥角固醇,單獨(dú)使用殺菌劑防治效果差,難以完全有效地控制該病,且單純依靠傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)防治具有局限性[18-20],因此尋找新的安全的防治方法勢(shì)在必行。近年來(lái),生物防治已成為研究熱點(diǎn),利用植物源提取物和微生物農(nóng)藥防治馬鈴薯晚疫病受到了越來(lái)越多研究者的關(guān)注。已有研究表明知母水提取物、九里香乙醇粗提物對(duì)致病疫霉的生長(zhǎng)和游動(dòng)孢子釋放有顯著的抑制作用,且提取物的抑制作用與濃度呈正相關(guān),EC50值分別為1.91 mg/mL和6.51 mg/mL,地果甲醇提取物濃度為1 mg/mL時(shí)抑菌率達(dá)90%[21-24]。本研究篩選了5 種蒿屬植物提取物對(duì)2 株馬鈴薯晚疫病菌的抑制活性,結(jié)果表明5 種提取物在濃度為1 mg/mL 的濃度下均對(duì)供試菌株具有一定的抑菌活性,其中牛尾蒿提取物對(duì)馬鈴薯晚疫病病菌pn5502 和pn7604 的抑菌活性均為最高,青蒿提取物次之;進(jìn)一步對(duì)牛尾蒿提取物的抑菌活性成分進(jìn)行了追蹤,發(fā)現(xiàn)餾分Fr1具有顯著抑菌活性,在濃度為0.5 mg/mL對(duì)2 株供試菌株的抑菌率均高達(dá)100%,并且呈顯著的劑量效應(yīng),經(jīng)不同濃度梯度測(cè)定餾分Fr1對(duì)pn5502、pn7604 的EC50值分別為7.4733 μg/mL、9.4634 μg/mL 顯著高于陽(yáng)性對(duì)照藥劑霜脲·錳鋅,其對(duì)2 株菌的EC50分別為273.8 μg/mL 和169 μg/mL,顯微觀察發(fā)現(xiàn)被餾分Fr1處理后的菌絲會(huì)出現(xiàn)明顯的畸形,因此有必要進(jìn)一步闡明其抑菌活性成分,及其作用機(jī)制。楊立賓等[25]發(fā)現(xiàn)哈茨木霉發(fā)酵液乙酸乙酯提取物降低了致病疫霉菌體可溶性蛋白含量,降低菌體保護(hù)酶活性,使菌體丙二醛含量升高,提高菌體電導(dǎo)率,降低菌體呼吸速率,致病疫霉系統(tǒng)清除自由基出現(xiàn)障礙、細(xì)胞膜被破壞、電解質(zhì)外露,對(duì)致病疫霉有直接抑制作用。林敏等[26]研究發(fā)現(xiàn)亞磷酸鹽作為新型植物誘抗劑,除直接作用于致病疫霉菌絲的生長(zhǎng)和游動(dòng)孢子的釋放外,還可以通過(guò)刺激植物體內(nèi)抗病物質(zhì)的產(chǎn)生和積累等起到間接防病作用。本研究發(fā)現(xiàn)正常生長(zhǎng)的致病疫霉菌絲體粗細(xì)均勻、表面光滑、分枝較少、發(fā)育正常、內(nèi)含物豐富且均勻分布,而牛尾蒿餾分Fr1處理后病原菌菌絲體出現(xiàn)分枝增多、表面粗糙、內(nèi)含物聚集等現(xiàn)象,與陽(yáng)性對(duì)照藥劑霜脲·錳鋅處理的癥狀類似,表明致病疫霉處于明顯的脅迫條件。上述異常癥狀的出現(xiàn)可能與牛尾蒿餾分Fr1中存在的活性成分破化了菌體的正常代謝,使得菌體細(xì)胞內(nèi)毒性物質(zhì)大量積累,嚴(yán)重破壞了細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致菌絲出現(xiàn)畸形。牛尾蒿是我國(guó)傳統(tǒng)的藏藥,具有很高的藥用價(jià)值[27]。牛尾蒿農(nóng)用研究多為飼喂牲畜、精油化學(xué)成分研究、生物多樣性研究、土壤重金屬修復(fù);目前對(duì)牛尾蒿生物活性的篩選和評(píng)價(jià)大多停留在其精油的殺蟲(chóng)活性[28-31],而對(duì)其化學(xué)成分在殺蟲(chóng)、抑菌等生物農(nóng)藥活性方面報(bào)道相對(duì)較少。本研究發(fā)現(xiàn)了牛尾蒿提取物在離體條件下對(duì)馬鈴薯晚疫病菌良好的抑菌活性,豐富了牛尾蒿生物活性的范疇,后續(xù)我們可以進(jìn)一步進(jìn)行活體實(shí)驗(yàn),評(píng)價(jià)其在田間防治馬鈴薯晚疫病的實(shí)際防效,闡明具體的活性成分及其作用機(jī)制,為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)綠色無(wú)公害、環(huán)境友好型植物源農(nóng)藥[32]提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

    猜你喜歡
    牛尾餾分晚疫病
    全餾分粗油漿在瀝青中的應(yīng)用研究
    石油瀝青(2022年4期)2022-09-03 09:29:46
    臨汾市馬鈴薯晚疫病發(fā)生趨勢(shì)預(yù)報(bào)
    如何防治大棚番茄晚疫病
    馬鈴薯晚疫病發(fā)生趨勢(shì)預(yù)報(bào)
    提高催化裂化C4和C5/C6餾分價(jià)值的新工藝
    文怡拿手菜:白蘿卜牛尾湯
    食品與健康(2018年6期)2018-06-14 02:58:08
    多一項(xiàng)指控
    多一項(xiàng)指控
    從八角茴香油前餾分中單離芳樟醇和草蒿腦工藝研究
    黑龍江省發(fā)現(xiàn)馬鈴薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)A2交配型
    无人区码免费观看不卡| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品久久午夜乱码| 免费在线观看日本一区| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲精品在线观看二区| 精品一区二区三卡| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品美女久久av网站| 91成年电影在线观看| 久久久国产精品麻豆| 久久99一区二区三区| 精品免费久久久久久久清纯| av网站免费在线观看视频| av在线天堂中文字幕 | 精品久久久久久,| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在线观看免费视频网站a站| 免费在线观看完整版高清| 长腿黑丝高跟| 国产有黄有色有爽视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 丝袜人妻中文字幕| 久久精品91无色码中文字幕| 在线观看免费日韩欧美大片| 69精品国产乱码久久久| 成年女人毛片免费观看观看9| 中出人妻视频一区二区| 少妇的丰满在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 一级毛片女人18水好多| 亚洲av片天天在线观看| 一本大道久久a久久精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久人妻av系列| 国产免费男女视频| 一级黄色大片毛片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 超碰成人久久| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲精品国产区一区二| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲国产看品久久| 久久精品国产清高在天天线| 十八禁网站免费在线| 久久香蕉国产精品| 欧美在线一区亚洲| 国产精华一区二区三区| 很黄的视频免费| 在线免费观看的www视频| 国产三级黄色录像| 国产黄a三级三级三级人| 一夜夜www| 午夜免费激情av| 人人妻人人澡人人看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久国产一区二区| 最新美女视频免费是黄的| 男女高潮啪啪啪动态图| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品国内亚洲2022精品成人| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品91蜜桃| 欧美日本亚洲视频在线播放| 午夜福利一区二区在线看| videosex国产| 久久亚洲真实| 精品熟女少妇八av免费久了| 性欧美人与动物交配| 欧美久久黑人一区二区| 精品久久久精品久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| 新久久久久国产一级毛片| 另类亚洲欧美激情| 91成年电影在线观看| 后天国语完整版免费观看| 成人18禁在线播放| 91九色精品人成在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美av亚洲av综合av国产av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一夜夜www| 精品无人区乱码1区二区| 国产欧美日韩一区二区三| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产一区二区在线av高清观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 久久人妻av系列| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久婷婷成人综合色麻豆| 午夜福利欧美成人| www.999成人在线观看| 在线天堂中文资源库| 久久中文字幕人妻熟女| av超薄肉色丝袜交足视频| 性少妇av在线| 黄色a级毛片大全视频| 水蜜桃什么品种好| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 满18在线观看网站| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩欧美在线二视频| 在线国产一区二区在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 嫩草影视91久久| 久热这里只有精品99| 黄色女人牲交| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| www.www免费av| 免费在线观看亚洲国产| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| xxxhd国产人妻xxx| 99精品欧美一区二区三区四区| aaaaa片日本免费| 国产乱人伦免费视频| 两性夫妻黄色片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 中出人妻视频一区二区| 国产激情久久老熟女| 精品第一国产精品| 午夜日韩欧美国产| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲全国av大片| 精品久久久久久,| 亚洲av成人av| 欧美日韩乱码在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人精品一区二区免费| 水蜜桃什么品种好| 免费看a级黄色片| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 少妇 在线观看| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 狠狠狠狠99中文字幕| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产免费男女视频| 男人舔女人的私密视频| 深夜精品福利| 黄片大片在线免费观看| 黑人猛操日本美女一级片| 一本综合久久免费| 亚洲全国av大片| 18禁国产床啪视频网站| 露出奶头的视频| 中文字幕人妻熟女乱码| www.熟女人妻精品国产| 欧美日韩av久久| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 在线播放国产精品三级| 一本大道久久a久久精品| 亚洲专区中文字幕在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 超色免费av| 高清在线国产一区| 国产乱人伦免费视频| 无遮挡黄片免费观看| 成人免费观看视频高清| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲午夜理论影院| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 一区二区三区精品91| 午夜成年电影在线免费观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 好男人电影高清在线观看| 深夜精品福利| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成年女人毛片免费观看观看9| 成人精品一区二区免费| 热re99久久精品国产66热6| 精品一品国产午夜福利视频| 日韩欧美免费精品| 美女 人体艺术 gogo| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久国产乱子伦精品免费另类| 中文字幕人妻丝袜制服| 成人国语在线视频| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产三级黄色录像| 欧美精品亚洲一区二区| 可以在线观看毛片的网站| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲成人免费av在线播放| 宅男免费午夜| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 老司机靠b影院| 天堂动漫精品| 国产精品偷伦视频观看了| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美在线一区亚洲| 欧美成人免费av一区二区三区| 91大片在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲第一av免费看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 大码成人一级视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清激情床上av| 亚洲人成电影观看| 黄片播放在线免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲精品美女久久av网站| tocl精华| 可以在线观看毛片的网站| 久热爱精品视频在线9| 另类亚洲欧美激情| 国产欧美日韩一区二区精品| 脱女人内裤的视频| 嫩草影视91久久| 久久中文字幕一级| 免费不卡黄色视频| 日本vs欧美在线观看视频| 一区二区三区国产精品乱码| 乱人伦中国视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中文字幕色久视频| 成人永久免费在线观看视频| 欧美在线黄色| 欧美在线一区亚洲| 成人影院久久| 在线观看免费视频日本深夜| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 在线观看www视频免费| 黄片小视频在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲色图综合在线观看| 日韩免费av在线播放| 日韩欧美免费精品| 91麻豆av在线| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美激情 高清一区二区三区| 一区在线观看完整版| 9191精品国产免费久久| 波多野结衣av一区二区av| 一夜夜www| 国产精品久久电影中文字幕| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 多毛熟女@视频| 丝袜美足系列| 日本五十路高清| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久久久久免费高清国产稀缺| 免费高清在线观看日韩| 午夜久久久在线观看| 9191精品国产免费久久| 国产av在哪里看| 久久久久久久精品吃奶| 在线播放国产精品三级| 国产精品综合久久久久久久免费 | 999久久久国产精品视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产区一区二久久| 激情在线观看视频在线高清| 1024香蕉在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品一二三| 日本一区二区免费在线视频| a级毛片黄视频| 美女午夜性视频免费| 制服诱惑二区| 丝袜美足系列| 99re在线观看精品视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费在线观看日本一区| 波多野结衣高清无吗| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99国产精品一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 日韩成人在线观看一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 脱女人内裤的视频| 亚洲美女黄片视频| 日韩欧美免费精品| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品高清国产在线一区| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产伦人伦偷精品视频| 国产高清国产精品国产三级| 国产高清视频在线播放一区| 宅男免费午夜| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99精品在免费线老司机午夜| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲人成电影观看| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 18美女黄网站色大片免费观看| 一级毛片高清免费大全| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 女警被强在线播放| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲精品一二三| 欧美中文日本在线观看视频| 一级黄色大片毛片| 俄罗斯特黄特色一大片| 一级片'在线观看视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲七黄色美女视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲国产精品sss在线观看 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 色在线成人网| 久久久久九九精品影院| 精品卡一卡二卡四卡免费| 99re在线观看精品视频| 成年人黄色毛片网站| 国产免费男女视频| 亚洲男人天堂网一区| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 天堂√8在线中文| 成人亚洲精品av一区二区 | 久久这里只有精品19| 中文亚洲av片在线观看爽| 日日干狠狠操夜夜爽| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线观看一区二区三区激情| 久久九九热精品免费| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久人人97超碰香蕉20202| av超薄肉色丝袜交足视频| 美女福利国产在线| 国产在线观看jvid| 成年人黄色毛片网站| 免费日韩欧美在线观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产成人影院久久av| 高清欧美精品videossex| 黄色成人免费大全| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产在线观看jvid| 日本wwww免费看| 精品国产亚洲在线| 欧美在线一区亚洲| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 精品日产1卡2卡| 波多野结衣高清无吗| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲精品国产一区二区精华液| 亚洲成人免费av在线播放| 99久久国产精品久久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲色图综合在线观看| 一区福利在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产激情久久老熟女| 999久久久精品免费观看国产| 精品免费久久久久久久清纯| 国产1区2区3区精品| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 欧美精品一区二区免费开放| 超碰成人久久| 露出奶头的视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品一区二区免费欧美| avwww免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲 欧美一区二区三区| av欧美777| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久久久久久午夜电影 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美精品一区二区免费开放| 高清欧美精品videossex| 国产黄a三级三级三级人| 欧美中文综合在线视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产成人影院久久av| 亚洲精品av麻豆狂野| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 高清毛片免费观看视频网站 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久久国产成人精品二区 | 国产av又大| 麻豆成人av在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久 成人 亚洲| 1024香蕉在线观看| 成人三级做爰电影| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久99一区二区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 制服人妻中文乱码| 自线自在国产av| 欧美日韩乱码在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 一二三四社区在线视频社区8| av天堂久久9| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精品偷伦视频观看了| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲美女黄片视频| 久久这里只有精品19| 999精品在线视频| 一级片免费观看大全| 不卡av一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| av网站在线播放免费| 新久久久久国产一级毛片| 性色av乱码一区二区三区2| 久久国产亚洲av麻豆专区| 天堂√8在线中文| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜老司机福利片| 12—13女人毛片做爰片一| 日韩高清综合在线| 欧美精品亚洲一区二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美性长视频在线观看| 色综合站精品国产| 欧美久久黑人一区二区| 少妇被粗大的猛进出69影院| av网站在线播放免费| 在线观看一区二区三区激情| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲全国av大片| 热99re8久久精品国产| 身体一侧抽搐| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产视频一区二区在线看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产有黄有色有爽视频| 色综合婷婷激情| 五月开心婷婷网| 国产成人av激情在线播放| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 男人舔女人下体高潮全视频| 成人国语在线视频| 亚洲精品一区av在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 男女午夜视频在线观看| 国产麻豆69| 波多野结衣高清无吗| 日本wwww免费看| 午夜免费成人在线视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久久久久人人人人人| 久久久国产成人免费| 超碰97精品在线观看| 国产精华一区二区三区| 亚洲欧美激情在线| 青草久久国产| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 女性生殖器流出的白浆| 精品一区二区三区av网在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产成人av激情在线播放| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日日爽夜夜爽网站| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品电影一区二区三区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 精品国内亚洲2022精品成人| 啦啦啦 在线观看视频| 日日夜夜操网爽| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日日爽夜夜爽网站| 成人亚洲精品一区在线观看| 一级毛片高清免费大全| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲专区字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| 黄色成人免费大全| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 男女下面插进去视频免费观看| 美女国产高潮福利片在线看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 免费日韩欧美在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 一区二区三区精品91| 在线观看www视频免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 韩国精品一区二区三区| 女警被强在线播放| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久9热在线精品视频| 少妇粗大呻吟视频| 黄色视频,在线免费观看| 看片在线看免费视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 美女午夜性视频免费| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲男人天堂网一区| 一级毛片女人18水好多| 五月开心婷婷网| 黑人操中国人逼视频| 91av网站免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲av高清不卡| 后天国语完整版免费观看| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 黑人猛操日本美女一级片| 丰满的人妻完整版| 怎么达到女性高潮| 免费高清在线观看日韩| 日韩国内少妇激情av| 1024视频免费在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久99久视频精品免费| 国产野战对白在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品国产av在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 男女下面插进去视频免费观看| 国产视频一区二区在线看| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美中文综合在线视频| 午夜免费观看网址| 一级毛片精品| 大陆偷拍与自拍| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精华一区二区三区| 神马国产精品三级电影在线观看 | 日韩精品中文字幕看吧| 视频在线观看一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av | 在线视频色国产色| 成人18禁在线播放| 天堂√8在线中文| 亚洲专区字幕在线| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| e午夜精品久久久久久久| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 欧美日韩乱码在线| 少妇 在线观看| 午夜老司机福利片| avwww免费| 一级毛片女人18水好多| 欧美日韩乱码在线| 在线观看免费视频日本深夜| av福利片在线| 国产xxxxx性猛交| 91大片在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产一区二区激情短视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99riav亚洲国产免费| 黄色成人免费大全| 午夜福利在线观看吧| 丝袜在线中文字幕| 国产精品亚洲av一区麻豆| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日日爽夜夜爽网站| 久久99一区二区三区| 国产成人欧美| 成人国语在线视频| 亚洲精品一二三| 亚洲av片天天在线观看| 欧美在线一区亚洲| 丝袜在线中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 黄片小视频在线播放| 9191精品国产免费久久|