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    新疆阿勒泰地區(qū)馬梨形蟲病流行病學(xué)調(diào)查

    2021-07-07 01:25:56瞿業(yè)宏
    中國獸醫(yī)雜志 2021年3期
    關(guān)鍵詞:梨形蟲病貝斯

    瞿業(yè)宏 , 岳 城

    (新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院 , 新疆 烏魯木齊 830052)

    馬梨形蟲病(Equine piroplasmosis)是寄生于馬屬動(dòng)物的淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞內(nèi)的血液原蟲病。該病主要發(fā)生于熱帶和亞熱帶地區(qū),在歐洲、非洲、亞洲等地均有發(fā)生[1],我國甘肅、青海、新疆等是該病的高發(fā)地區(qū)[2]。病原分為馬泰勒蟲(Theileriaequi,T.equi)和駑巴貝斯蟲(Babesiacaballi,B.caballi)。馬泰勒蟲病的病原為馬泰勒蟲(舊名馬巴貝斯蟲),其蟲體小于紅細(xì)胞半徑,呈圓形、逗點(diǎn)形等多種形態(tài)。該蟲體侵襲動(dòng)物后破壞紅細(xì)胞,多表現(xiàn)為稽留熱、呼吸困難、貧血、黃疸等癥狀,如診治不及時(shí),死亡率極高[3-5]。馬駑巴貝斯蟲病的病原為駑巴貝斯蟲,該病原由媒介蜱蟲(革蜱等)攜帶,攜帶有病原的蜱蟲叮咬后,駑巴貝斯蟲隨蜱蟲唾液進(jìn)入馬屬動(dòng)物血液內(nèi),對(duì)馬屬動(dòng)物造成嚴(yán)重的危害[6-7],病畜多呈現(xiàn)貧血、消瘦、黃疸、流產(chǎn)等,嚴(yán)重時(shí)造成死亡[8]。

    本試驗(yàn)對(duì)新疆阿勒泰地區(qū)的富蘊(yùn)縣、福??h、哈巴河縣、清河縣4個(gè)地區(qū)隨機(jī)抽取放牧馬匹進(jìn)行梨形蟲病的檢測,以了解該地區(qū)的疾病感染率,為今后的綜合防控提供部分參考數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品來源 2 697份放牧馬抗凝血樣品,于2018—2019年采自新疆阿勒泰地區(qū)富蘊(yùn)縣(756份)、福??h(831份)、哈巴河縣(513份)、清河縣(597份)4個(gè)地區(qū),每份采集5 mL的血液樣品至EDTA抗凝管,標(biāo)注采集地點(diǎn)與采集時(shí)間,-20 ℃保存。

    1.2 DNA提取 取馬全血200 μL,用DNA提取試劑盒進(jìn)行全血DNA提取,-20 ℃保存,備用。

    1.3 試劑與試劑盒 DNA marker,購自 TaKaRa 公司;2×EasyTaqPCR SuperMix,購自北京全式金生物技術(shù)有限公司;DNA提取試劑盒,購自天根生化科技有限公司。

    1.4 PCR引物的設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)文獻(xiàn)[9-10]中馬泰勒蟲18S rRNA 基因序列與駑巴貝斯蟲BC48基因序列設(shè)計(jì)引物。PCR擴(kuò)增體系:馬泰勒蟲:95 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,30個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min;馬駑巴貝斯蟲:95 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s,56 ℃ 45 s,72 ℃ 30 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

    1.5 產(chǎn)物的回收及序列測定 將PCR擴(kuò)增結(jié)果為陽性的產(chǎn)物進(jìn)行基因目的片段純化后,送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序,利用BLAST在線軟件進(jìn)行同源性分析。

    2 結(jié)果

    2.1 馬泰勒蟲18S rRNA 基因及馬駑巴貝斯蟲BC48 基因的PCR檢測 共采集到2 697份馬匹血液,分別進(jìn)行馬泰勒蟲及馬駑巴貝斯蟲引物擴(kuò)增后,共有246份馬血DNA擴(kuò)增出馬泰勒蟲目的片段,約531 bp,大小符合預(yù)測值(圖1);經(jīng)測序比對(duì),確認(rèn)為馬泰勒蟲。共有271份馬血DNA擴(kuò)增出馬駑巴貝斯蟲目的片段,約452 bp(圖2);經(jīng)測序比對(duì),確認(rèn)為馬駑巴貝斯蟲。

    圖1 馬泰勒蟲PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.1 PCR amplification results of T. equiM:DNA marker 2 000; 1:陰性對(duì)照; 2:陽性對(duì)照; 3~9:樣品的PCR產(chǎn)物M:DNA marker 2 000; 1:Negative control; 2:Positive control; 3-9:PCR product of the sample

    圖2 馬駑巴貝斯蟲PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2 PCR amplification results of B. caballiM:DNA marker 2 000; 1~8:樣品的PCR產(chǎn)物; 9:陽性對(duì)照; 10:陰性對(duì)照M:DNA marker 2 000; 1-8:PCR product of the sample; 9:Positive control; 10:Negative control

    2.2 馬泰勒蟲18S rRNA及馬駑巴貝斯蟲BC48基因序列分析 本試驗(yàn)通過對(duì)結(jié)果進(jìn)行馬泰勒蟲18S rRNA 及馬駑巴貝斯蟲BC48基因序列測序,BLAST進(jìn)行相似性檢索,分別與馬泰勒蟲18S rRNA(531 bp)及馬駑巴貝斯蟲BC48(452 bp)基因序列(GenBank登錄號(hào)分別為:LC431546.1、MN629354.1)的核苷酸一致性為99%、99%,為所需目的片段。

    2.3 馬梨形蟲感染情況分析 阿勒泰地區(qū)共計(jì)采集馬血2 697份,感染馬梨形蟲病樣品為504份,總感染率為18.69%;馬泰勒蟲感染246份,陽性率為9.12%,馬駑巴貝斯蟲感染271份,感染率為10.05%,其中,混合感染13份。哈巴河縣感染率最高,為30.80%;其他地區(qū)分別為富蘊(yùn)縣17.86%、福??h11.6%、清河縣19.10%。經(jīng)SPSS 20.0分析,各地間馬梨形蟲感染率差異顯著(P<0.05),見表1。

    表1 馬梨形蟲病感染情況調(diào)查Table 1 Investigation on the infection of equine piroplasmosis

    2.4 不同年齡段馬感染梨形蟲病感染情況分析 通過分析不同年齡段感染馬梨形蟲病的結(jié)果顯示,馬泰勒蟲的感染數(shù)據(jù)中,X≥6年齡組感染率較高,為10.26%(90/877),而馬駑巴貝斯蟲在2≤X<6年齡組感染率較高,為11.45%(105/917),混合感染中,X<2 年齡組感染率最高,為0.66%(6/903)。各年齡組的總感染率分別為X<2年齡組15.50%(140/903)、2≤X< 6年齡組20.72%(190/917)、X≥6 年齡組19.84%(174/877)。經(jīng)SPSS 20.0分析,不同年齡段馬梨形蟲感染率差異顯著(P<0.05),見表2。

    表2 不同年齡段馬梨形蟲病感染情況調(diào)查Table 2 Investigation on the infection of equine piroplasmosis at different age stages

    2.5 不同放牧季節(jié)馬梨形蟲病感染情況分析 通過分析不同季節(jié)感染馬梨形蟲病的結(jié)果顯示,馬泰勒蟲的春季與秋季感染分別為11.97%(191/1 595)、4.99%(55/1 102),馬駑巴貝斯蟲的春季與秋季感染分別為13.73%(219/1 595)、4.72%(52/1 102),春秋季總感染率分別為25.20%(402/1 595)、9.26%(102/1 102),春季感染明顯高于秋季感染。經(jīng)SPSS 20.0分析,不同放牧季節(jié)馬梨形蟲感染率差異顯著(P<0.05),見表3。

    表3 不同放牧季節(jié)馬梨形蟲病感染情況調(diào)查Table 3 Investigation on the infection of equine piroplasmosis in different grazing seasons

    3 討論

    近年來,馬梨形蟲病的發(fā)病率不斷上升,嚴(yán)重阻礙了各地馬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前,常規(guī)的診斷技術(shù)主要包括臨床診斷和血涂片染色鏡檢、ELISA、LAMP及PCR等,不同方法的應(yīng)用可隨當(dāng)?shù)貤l件、樣品的采集等靈活改變[11-13]。其中,PCR方法具有高敏感性和強(qiáng)特異性,尤其適用一些臨床癥狀不明顯的隱性感染病例。因此,本次調(diào)查采用PCR方法對(duì)阿勒泰4個(gè)地區(qū)的放牧馬進(jìn)行檢測,以期對(duì)該地區(qū)感染有初步的了解,為今后的防治工作提供一定的參考。

    馬梨形蟲病各地區(qū)的發(fā)病略有不同,馬駑巴貝斯蟲的感染區(qū)域涵蓋了歐洲、南非及中東大陸地區(qū)的許多國家,在我國的感染率中吉林省為3.79%~42.4%,廣州市為5.4%,而新疆感染率為2.2%~38.7%[7,14-15]。有部分人認(rèn)為馬泰勒蟲的分布比駑巴貝斯蟲更為廣泛[16]。調(diào)查顯示,感染率不等,吉林省為12.50%、延邊市為26.09%、哈爾濱市為64.62%,新疆為8.33%~36.21%[17-18]。在本試驗(yàn)中,通過對(duì)陽性樣品測序分析,經(jīng)BLAST比對(duì),所測樣品為駑巴貝斯蟲及馬泰勒蟲感染。試驗(yàn)得出馬梨形蟲病感染率為18.69%;其中,馬泰勒蟲感染率為9.12%,馬駑巴貝斯蟲感染率為10.05%,混合感染率為0.48%。不同年齡段馬梨形蟲感染情況差異顯著(P<0.05),不同放牧季節(jié)馬梨形蟲感染率差異顯著(P<0.05),春季感染明顯高于秋季感染。該病的傳播和流行具有顯著的季節(jié)性,可能和當(dāng)?shù)孛浇轵珙惖姆植济芮邢嚓P(guān);阿勒泰地區(qū)地貌類型復(fù)雜多樣,草場豐富,使得當(dāng)?shù)伛R匹受到蜱蟲的侵害,尤其是春季溫度上升,蜱蟲活動(dòng)頻繁,導(dǎo)致春季病情高發(fā)。所以,預(yù)防該病的重點(diǎn)是滅蜱,從根源上阻止梨形蟲病的傳播。

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