小細(xì)胞肺癌患者化療中血小板數(shù)量、形態(tài)及功能變化研究

郭 瑛，李洪結(jié)，張育榮

北京市朝陽區(qū)三環(huán)腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100122

小細(xì)胞肺癌具有增殖迅速、轉(zhuǎn)移早的特征，且易復(fù)發(fā)，5年生存率低[1-2]。近年來隨著化療方案的不斷優(yōu)化，小細(xì)胞肺癌生存期有所延長(zhǎng)，總生存期可達(dá)1～3年[3]。目前，缺少常規(guī)對(duì)小細(xì)胞肺癌預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。小細(xì)胞肺癌的治療手段主要是化療，初始治療緩解率較高，但易復(fù)發(fā)，另外，小細(xì)胞肺癌患者血流動(dòng)力學(xué)差，而且血栓和出血風(fēng)險(xiǎn)高[4]，本研究回顧分析了174例數(shù)據(jù)完整的小細(xì)胞肺癌患者的血小板(PLT)參數(shù)，探討患者化療過程中，PLT數(shù)量、形態(tài)、功能變化規(guī)律，以期為小細(xì)胞肺癌治療過程中出現(xiàn)血栓、出血及腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移甚至死亡提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年8月至2019年9月經(jīng)臨床、CT及病理組織學(xué)確診的小細(xì)胞肺癌且具有完整信息的病例174例患者作為研究對(duì)象，其中男98例、女76例，年齡34～82歲，平均(65.62±16.32)歲。174例研究對(duì)象中根據(jù)腫瘤TNM分期可分為局限期患者83例，廣泛期患者91例。均為入院后首次接受化療治療，化療方案均為依托泊苷加鉑類，21 d為1個(gè)化療周期，觀察截止到第4個(gè)化療周期結(jié)束。排除化療前和4個(gè)化療周期中接受其他治療的患者、其他重大疾病的患者、手術(shù)患者、使用抗凝藥物的患者。對(duì)照組為同期門診體檢人員共102例，男62例、女40例，年齡45～73歲，平均(58.61±9.52)歲。

1.2儀器與試劑 PLT計(jì)數(shù)用sysmex1800i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑，檢測(cè)參數(shù)有大血小板比率(P-LCR)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)；PLT功能參數(shù)檢測(cè)采用北京樂普醫(yī)療科技有限公司的西芬斯CFmsLEPU-8800型彈力圖檢測(cè)儀(TEG)和配套試劑，檢測(cè)PLT參數(shù)主要有血凝塊最大強(qiáng)度(MA)、血小板動(dòng)力學(xué)指數(shù)(TPI)；血小板最大聚集率(MAR)檢測(cè)用Aggrestar PL-11血小板功能儀及配套試劑；PLT形態(tài)學(xué)及計(jì)數(shù)觀察采用上海求精公司牛鮑計(jì)數(shù)板；PLT涂片染色用珠海貝索瑞氏吉姆薩染色。

1.3方法 患者清晨空腹采集靜脈血，PLT檢測(cè)使用乙二胺四乙酸三鉀抗凝管采血2 mL，TEG和MAR檢測(cè)使用枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈血3 mL。按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程完成檢測(cè)。動(dòng)態(tài)觀察患者連續(xù)4個(gè)化療周期PLT參數(shù)、形態(tài)變化和功能變化情況。用0.38 mL PLT稀釋液加入20 μL全血混合后充入牛鮑計(jì)數(shù)板，10倍顯微鏡下觀察。血涂片用5 μL全血統(tǒng)一角度和速度推1.5 cm×3.0 cm血膜，染色后40倍顯微鏡下觀察。

2 結(jié) 果

2.1小細(xì)胞肺癌患者不同化療周期PLT數(shù)量變化情況 根據(jù)小細(xì)胞肺癌患者4個(gè)化療周期的PLT數(shù)量變化趨勢(shì)，將其分為平穩(wěn)變化組、持續(xù)降低組、持續(xù)升高組3組。平穩(wěn)變化組患者占62.44%，該類型起始化療患者的PLT數(shù)量為(252.31±50.63)×109/L；治療過程中PLT數(shù)量變化最大幅度<66.97%，PLT數(shù)量最低值出現(xiàn)在第4個(gè)化療周期，且PLT數(shù)量最低值不低于100×109/L。持續(xù)降低組患者占比為19.89%，該類型起始化療患者的PLT數(shù)量為(210.22±13.20)×109/L，PLT數(shù)量下降點(diǎn)始于第1個(gè)化療周期末，80.32%患者PLT數(shù)量最低點(diǎn)值發(fā)生在第3個(gè)化療周期，PLT數(shù)量為(60.81±16.06)×109/L；其余19.68%患者PLT數(shù)量低于50.00×109/L，PLT數(shù)量為(22.33±9.15)×109/L。持續(xù)升高組患者占比為17.67%，該類型起始化療患者的PLT數(shù)量高于前兩種類型患者，PLT數(shù)量為(358.94±21.34)×109/L，隨著化療周期的進(jìn)行，PLT數(shù)量雖然波動(dòng)變化，但其整體趨勢(shì)仍然持續(xù)增高，PLT數(shù)量最高達(dá)740.00×109/L。見表1。

表1 小細(xì)胞肺癌患者不同化療周期PLT數(shù)量變化情況

2.2各組PLT參數(shù)及形態(tài)變化 各組PLT參數(shù)比較見表2。持續(xù)降低組、持續(xù)升高組PDW與平穩(wěn)變化組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。持續(xù)升高組PDW與持續(xù)降低組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組P-LCR比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組MPV比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 各組PLT參數(shù)比較

顯微鏡下觀察不同化療周期各組PLT大小、折光性、形態(tài)發(fā)現(xiàn)，各組化療前PLT大小一致，密度均勻，每高倍(×40倍)視野可見20～25 個(gè)PLT，折光性均勻且較強(qiáng)，瑞氏染色見著色均勻體積大小均一；化療后，平穩(wěn)變化組光鏡下PLT形態(tài)、大小及分布密度與化療前比較沒有明顯變化，但是其折光性變小，著色變深，說明PLT內(nèi)部成分已發(fā)生變化；光鏡下持續(xù)升高組每視野可見80～90個(gè)PLT，在光鏡下觀察其折光性減弱，體積較一致，但與對(duì)照組比較PLT體積明顯偏小；持續(xù)降低組光鏡下PLT開始出現(xiàn)大小不一的情況，尤其在PLT<50×109/L，PLT分布密度顯著減少，高倍鏡下每視野1～3個(gè)PLT，且折光性強(qiáng)弱不等，體積小的PLT折光弱、深染，體積大的PLT折光強(qiáng)、染色鮮亮。

2.3各組MA、TPI、MAR比較 平穩(wěn)變化組、持續(xù)降低組、持續(xù)升高組TPI與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);持續(xù)降低組、持續(xù)升高組MA與平穩(wěn)變化組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MAR分為阿司匹林和氯吡格雷兩種途徑，抗凝藥物阿司匹林抗PLT聚集原理為花生四希酸(AA)作為誘導(dǎo)劑，在環(huán)氧化酶作用下發(fā)生一系列反應(yīng)促進(jìn)PLT聚集。氯吡格雷是另一種抗PLT聚集藥，以二磷酸腺苷(ADP)作為誘導(dǎo)劑，ADP直接促使PLT釋放顆粒而聚集。兩種途徑測(cè)量所得的MAR，各組MAR都明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組MA、TPI、MAR比較

3 討 論

PLT主要作用是參與凝血塊形成，起到止血作用，化療過程中PLT變化與患者預(yù)后密切相關(guān)[5-7]。PLT參數(shù)的變化反映了內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能的變化，小細(xì)胞肺癌的化療方案中以依托泊苷和鉑類為基礎(chǔ)，化療中觀察到PLT不同的變化情況，可能決定了其治療的效果和預(yù)后[8-9]。多數(shù)病例PLT數(shù)量的變化始于第1個(gè)化療周期末，即從開始化療藥物第1天起到第21天的時(shí)間長(zhǎng)度，這與文獻(xiàn)[10-11]的報(bào)道結(jié)果有所不同。原因可能是由于臨床分期、腫瘤大小、部位、個(gè)性化反應(yīng)不同，以及檢測(cè)時(shí)間不同使然，也可能基礎(chǔ)治療方案基礎(chǔ)上的同步放療而不同[12]。本研究在第1個(gè)化療周期末PLT開始發(fā)生不同走向，一種平穩(wěn)變化，變化幅度較小，另一種PLT數(shù)量變化趨勢(shì)是持續(xù)降低型，PLT數(shù)量的降低可能與骨髓抑制有關(guān)[13]。還有一種是PLT數(shù)量在化療過程中升高，關(guān)于患者在化療過程中PLT數(shù)量仍持續(xù)升高，可能與腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移有關(guān)[14-17]。本研究在未染色和染色的顯微鏡觀察到，化療過程中，體積較大PLT更易出現(xiàn)在PLT數(shù)量降低的情況，可能是化療過程中出現(xiàn)的一種異常形態(tài)而不是新生PLT。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，持續(xù)降低組、持續(xù)升高組MA與平穩(wěn)變化組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各組MAR都明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這說明MA主要取決于PLT數(shù)量，而MAR無論是AA或ADP通路活化PLT使其聚集，均顯示MAR明顯降低，這提示患者在化療過程中，PLT聚集功能發(fā)生變化，MAR降低。有研究者提出，PLT參數(shù)反映了其凝集狀態(tài)[15]。本研究結(jié)果顯示，平穩(wěn)變化組和持續(xù)升高組TPI高于持續(xù)降低組、對(duì)照組，提示其PLT處于高凝狀態(tài)。本研究還觀察了小細(xì)胞肺癌患者化療過程中PLT數(shù)量變化,PLT變化多數(shù)發(fā)生在第1個(gè)化療周期末和第2個(gè)化療周期開始?；熯^程中PLT形態(tài)和功能也發(fā)生變化，主要反映在PLT折光性下降、大小不一等方面。

綜上所述，本研究結(jié)果可能存在未受控變量的影響，包括在4個(gè)化療周期過程中各觀察指標(biāo)檢測(cè)的時(shí)間、患者不同療效反應(yīng)等因素影響，而且數(shù)據(jù)僅限于4個(gè)化療周期之內(nèi)，遠(yuǎn)期的結(jié)果有待于進(jìn)一步分析。