血管內(nèi)皮生長因子與熱休克蛋白90α和胸苷激酶1在肝惡性腫瘤臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值探討

陳丹 陳博 陳涌泉

1中國人民解放軍陸軍第七十三集團(tuán)軍醫(yī)院檢驗(yàn)科，廈門 361003；2安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院檢驗(yàn)科，合肥 238000；3福建醫(yī)科大學(xué)附屬廈門弘愛醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心

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肝惡性腫瘤是臨床最常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率均比較高。研究顯示2018年全球肝惡性腫瘤的發(fā)病率約11.0/10萬，其中我國肝惡性腫瘤的發(fā)病例數(shù)約占全球總發(fā)病數(shù)的46.71%［1］。肝惡性腫瘤患者早期常無特殊臨床表現(xiàn)，或僅類似肝硬化體征而不易被發(fā)現(xiàn)，肝惡性腫瘤的癥狀主要出現(xiàn)在中晚期，如肝臟腫大、腹水和黃疸等體征，嚴(yán)重時(shí)可合并出現(xiàn)并發(fā)癥，如肝癌破裂出血和肝腎衰竭等［2］。臨床上，肝惡性腫瘤主要依賴于病理活檢進(jìn)行確診，但因侵入性操作而不易被患者接受；常用血清腫瘤標(biāo)志物主 要 有 甲 胎 蛋 白（alpha fetoprotein，AFP）、癌 胚 抗 原（carcinoembryonic antigen，CEA）和 糖 鏈 抗 原 199（carbohydrate antigen 199，CA199）等，但其診斷靈敏度和特異性亦不十分理想，因此，尋找新的肝惡性腫瘤血清標(biāo)志物具有重要意義。近年來，血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、熱 休 克 蛋 白90α（heat shock protein 90α，HSP90α）和胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）在肝惡性腫瘤臨床輔助診斷中的價(jià)值逐漸得到了研究者們的關(guān)注，研究顯示VEGF、HSP90α和TK1在肝惡性腫瘤發(fā)展的分子機(jī)制中具有重要作用，其表達(dá)水平與肝惡性腫瘤的臨床分期有關(guān)，VEGF、HSP90α和TK1具有作為肝惡性腫瘤血清標(biāo)志物的潛能［3-5］。因此，本研究擬通過分析肝惡性腫瘤患者和肝良性疾病患者血清VEGF、HSP90α和TK1的表達(dá)水平，探討VEGF、HSP90α和TK1檢測(cè)在肝惡性腫瘤臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究共納入2018年7月至2020年6月安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院收治的肝惡性腫瘤患者32例、肝良性疾?。ㄒ倚透窝祝┗颊?2例和同時(shí)期體檢健康人32例，其中肝惡性腫瘤患者男性23例，女性9例，年齡（47.80±11.78）歲；肝良性疾病患者男性21例，女性11例，年齡（49.24±13.22）歲；體檢健康人群男性22例，女性10例，年齡（48.32±12.65）歲；3組研究對(duì)象在性別和年齡方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），具有可比性。本研究中所有肝惡性腫瘤患者經(jīng)病理確診。本研究采用患者就診時(shí)臨床檢驗(yàn)剩余樣本進(jìn)行研究，研究過程和研究結(jié)果均已隱藏研究對(duì)象相關(guān)信息，豁免知情同意。

1.2 檢測(cè)方法 所有研究對(duì)象于清晨8～10點(diǎn)采集空腹靜脈血3～5 ml（促凝），3 000轉(zhuǎn)/min離心10 min后分離血清，離心半徑為16.77 cm，采用威海威高VEGF測(cè)定試劑盒檢測(cè)血清VEGF水平（化學(xué)發(fā)光法），采用煙臺(tái)普羅吉HSP90α定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清HSP90α水平（酶聯(lián)免疫法），采用深圳華瑞同康細(xì)胞周期分析試劑盒檢測(cè)血清TK1水平（酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法），收集并分析檢測(cè)結(jié)果。研究中所有操作步驟嚴(yán)格按照科室制定的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行，檢測(cè)期間儀器各項(xiàng)指標(biāo)均處于在控狀態(tài)，試劑均在有效期內(nèi)使用。本研究中VEGF、HSP90α和TK1的參考值范圍為分別為0～160.00 pg/ml、0～82.06μg/ml和0～2.00 pmol/L。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，由于肝惡性腫瘤組患者血清VEGF、HSP90α和TK1水平不符合正態(tài)分布，故以均數(shù)和四分位數(shù)對(duì)3組研究對(duì)象血清VEGF、HSP90α和TK1水平進(jìn)行表示；采用Mann-Whitney檢驗(yàn)比較各組間VEGF、HSP90α和TK1水平，采用ROC分析VEGF、HSP90α和TK1對(duì)肝惡性腫瘤和肝良性疾病的鑒別診斷效能；以0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肝惡性腫瘤患者、肝良性疾病患者和健康人群血清VEGF、HSP90α和TK1水平分析 經(jīng)Mann-Whitney檢驗(yàn)，肝惡性腫瘤組VEGF、HSP90α和TK1水平均高于肝良性疾病組和健康對(duì)照組（均P＜0.05），肝良性疾病組和健康對(duì)照組之間VEGF、HSP90α和TK1水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

表1 肝惡性腫瘤組、肝良性疾病組和健康人群組血清VEGF、HSP90α和TK1水平分析[M（P25，P75）]

2.2 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測(cè)對(duì)肝惡性腫瘤的診斷效能分析 繪制VEGF、HSP90α和TK1對(duì)肝惡性腫瘤輔助診斷的ROC，結(jié)果顯示VEGF、HSP90α和TK1均具有一定的輔助診斷價(jià)值（均P＜0.05），當(dāng)VEGF、HSP90α和TK1分別取臨界值198.53 pg/ml、106.16μg/ml和1.88 pmol/L時(shí)獲得最大的診斷效能，ROC曲線下面積（AUC）分別為0.855、0.895和0.811，見表2和圖1。

圖1 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測(cè)輔助肝惡性腫瘤診斷的ROC曲線

表2 血清VEGF、HSP90α和TK1水平檢測(cè)對(duì)32例肝惡性腫瘤患者的診斷效能分析

3 討 論

VEGF是一種具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖和血管形成等重要生理作用的促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，其主要生理作用是促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生［6］。研究顯示，VEGF主要分布于惡性腫瘤血管內(nèi)皮表面以調(diào)節(jié)腫瘤血管和淋巴管的生成，與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；VEGF在惡性腫瘤中通常表現(xiàn)為過度表達(dá)，可特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，通過旁分泌的形式來促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤內(nèi)生成血管，并可以破壞癌細(xì)胞間的連接，促進(jìn)腫瘤的侵襲［7-8］。HSP90α在細(xì)胞內(nèi)一般僅作為分子伴侶發(fā)揮作用，然而當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激反應(yīng)狀態(tài)時(shí)，其在不同組織內(nèi)具有不同的表達(dá)特性，如在某些惡性腫瘤中HSP90α的濃度會(huì)顯著增高，并由腫瘤細(xì)胞主動(dòng)將其分泌至細(xì)胞外［9］。有研究指出，HSP90α參與多種腫瘤細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控過程，具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移和侵襲的能力［10］。管志斌等［4］的研究發(fā)現(xiàn)MHCC97H肝癌細(xì)胞株HSP90α表達(dá)水平明顯高于HepG2肝癌細(xì)胞株，提示HSP90α可能與肝惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。TK1是維持細(xì)胞周期的S期所依賴的酶之一，TK1的含量與細(xì)胞內(nèi)DNA合成速度呈正相關(guān)關(guān)系，在細(xì)胞周期的G1期TK1水平逐漸升高，在S期時(shí)達(dá)到頂峰，之后到G2期開始降低；正常人體細(xì)胞中的TK1極少釋放到外周血液中，但是在異常增殖細(xì)胞中，由于細(xì)胞周期的調(diào)控遭到破壞，使DNA合成增加，此時(shí)TK1呈現(xiàn)高水平，當(dāng)異常細(xì)胞壞死或凋亡時(shí)，TK1釋放到外周血中，引起血清TK1水平升高［11-12］。目前，已有關(guān)于血清TK1應(yīng)用于多種惡性腫瘤的早期診斷的報(bào)道，如乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、骨肉瘤等［13-15］?？梢?，血清VEGF、HSP90α和TK1均具有作為惡性腫瘤篩查和療效監(jiān)測(cè)指標(biāo)的潛力。

在本研究中，肝惡性腫瘤組VEGF、HSP90α和TK1水平均明顯高于肝良性疾病組和健康對(duì)照組（均P＜0.05），而肝良性疾病組和健康對(duì)照組之間VEGF、HSP90α和TK1水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），這表明VEGF、HSP90α和TK1在肝惡性腫瘤患者血清中異常表達(dá)，這可能與腫瘤組織的不斷生長密切相關(guān)。ROC曲線分析顯示，VEGF、HSP90α和TK1均具有一定的輔助診斷價(jià)值（均P＜0.05），且當(dāng)VEGF、HSP90α和TK1分別取臨界值198.53 pg/ml、106.16μg/ml和1.88 pmol/L時(shí)獲得最大的診斷效能，ROC曲線下面積分別為0.855、0.895和0.811，Youden指數(shù)分別為0.648、0.736和0.636，可見，血清VEGF、HSP90α和TK1對(duì)于肝惡性腫瘤的臨床診斷具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，血清VEGF、HSP90α和TK1對(duì)肝惡性腫瘤具有一定的輔助診斷價(jià)值，臨床上可通過開展血清VEGF、HSP90α和TK1項(xiàng)目檢測(cè)，以提高對(duì)肝惡性腫瘤臨床診斷的準(zhǔn)確性。然而本研究也有一些不足之處，由于本研究肝惡性腫瘤患者樣本量相對(duì)較小，故未對(duì)不同分期的肝惡性腫瘤患者進(jìn)行比較分析，數(shù)據(jù)分析可能存在一定偏倚，我們將在后續(xù)的研究中逐漸增加樣本量，以進(jìn)一步探討VEGF、HSP90α和TK1對(duì)肝惡性腫瘤的臨床輔助診斷價(jià)值。

利益沖突：作者已申明文章無相關(guān)利益沖突