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    葡萄柚果醋液態(tài)深層發(fā)酵特性研究

    2021-07-06 04:11:10曹雪丹方修貴
    浙江柑橘 2021年2期
    關鍵詞:果醋葡萄柚液態(tài)

    曹雪丹 方修貴 趙 凱

    (浙江省柑橘研究所 臺州 318026)

    葡萄柚(Citrus paradisiMacf.)是蕓香科柑橘屬植物,為世界柑橘四大類群(甜橙類、寬皮柑橘類、檸檬來檬類、葡萄柚和柚類)之一[1]。其果實風味獨特,果實多汁,營養(yǎng)豐富,深受消費者喜愛。經(jīng)過多年的引種栽培,已逐漸在我國形成了一些具有一定種植規(guī)模的主栽品種。據(jù)分析,每100 g全果含水分89.64 g、蛋白質 0.89 g、脂肪 0.1 g、碳水化合物 9.5 g;鈣18mg、磷17mg、鐵 0.1mg;VB10.06mg、VB20.03mg、VC4 0mg;每升果汁含柚皮苷528~743 mg,可以形成VP,具有清熱退火的功效[2]。而且,葡萄柚汁有助于保持肝臟移植術后患者排斥抑制劑FK506的谷值濃度,提高其生物利用度[3]。對中國主栽的 9個葡萄柚品種的酚類物質組成及其抗氧化活性研究發(fā)現(xiàn),葡萄柚不僅多酚含量極其豐富,而且抗氧化能力也高[4],是具有良好開發(fā)前景的天然抗氧化劑和保健食品原料。

    果醋是以水果或水果加工下腳料為主要原料,經(jīng)微生物酒精發(fā)酵、醋酸發(fā)酵釀制而成的一種營養(yǎng)豐富、風味優(yōu)良且具有抑菌,抗氧化,緩解疲勞,預防飲食型肥胖和高脂血癥等生理功能的酸性調味品[5]。我國傳統(tǒng)釀醋多采用混合菌緩慢發(fā)酵的固態(tài)工藝,生產(chǎn)周期長達 3個月,勞動強度大,生產(chǎn)成本高。采用液態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)果醋具有易操作管理,規(guī)模化標準化生產(chǎn),有利于縮短生產(chǎn)周期[6]。近年來,柑橘類果醋的研究報道大多針對菌種的篩選和發(fā)酵工藝的優(yōu)化等方面。如:劉青娥等[7]以自然酸發(fā)酵的柑橘醋液為菌源,篩選出41株醋酸菌,其中 1株耐溫性能和耐酒精能力均優(yōu)于對照菌株滬釀 1.01;程世春[8]從水果中分離得到 1株高產(chǎn)醋酸菌株可用于常規(guī)液體發(fā)酵法釀造柑橘果醋;王彥安等[9]采用Box-Behnken設計進行柑橘果醋的酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵工藝的響應面優(yōu)化,得出酒精發(fā)酵參數(shù)為:初始糖度為16%、接種量為5%、初始pH為 3.5,醋酸發(fā)酵參數(shù)為:接種量為 8.52%、初始酒精度為 6.02%、發(fā)酵pH為3.3,該工藝下醋酸產(chǎn)量53.11g/L;曹雪丹等[10]對椪柑果醋液態(tài)發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化,并經(jīng)GC-MS分析鑒定出了66種揮發(fā)性物質。

    但是,目前對液態(tài)深層法發(fā)酵葡萄柚果醋的研究并不多見。本試驗以滬釀 1.01醋酸桿菌為研究對象,以葡萄柚為研究試材,對液態(tài)深層發(fā)酵工藝及發(fā)酵特性進行研究,以期為葡萄柚及柑橘類果醋的工業(yè)化發(fā)酵提供基礎數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    葡萄柚采自浙江省柑橘研究所山地試驗站。高活性釀酒干酵母(RV171):安琪酵母股份有限公司。醋酸菌(滬釀 1.01):上海迪發(fā)釀造生物制品有限公司。白砂糖,偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)等均為食品級;氫氧化鈉(NaOH)等常規(guī)試劑均為國產(chǎn)分析純;聚醚砜濾膜(孔徑 0.45μm):美國密理博公司;果膠酶(活力10萬u/ml,液體型):寧夏和氏璧生物技術有限公司;醋酸菌分離培養(yǎng)基:青島海博生物技術有限公司。

    1.2 儀器

    PAL- 3手持式數(shù)字折射儀(日本ATAGO公司);MJ-176NR榨汁/攪拌機(日本松下電器產(chǎn)業(yè)株式會社);SW-CJ- 1FD超凈工作臺(蘇州安泰空氣技術有限公司);ZHWY-2102 C恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司); 5 L試驗型自吸發(fā)酵罐(南京匯科生物工程設備有限公司);雷磁JPB-607 A便攜式溶解氧測定儀(上海儀電科學儀器股份有限公司);FlveGo F2便攜式pH計(上海梅特勒-托利多儀器有限公司);Heal Force HF-151二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱(上海力申科學儀器有限公司);XK97-A菌落計數(shù)器(杭州齊威儀器有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 工藝流程。挑選大小均勻、成熟度一致的新鮮葡萄柚為原料→用自來水流水沖洗果皮后自然晾干→手工剝皮、去籽→將果肉投入榨汁機中破碎取汁→收集果汁并添加 0.5‰果膠酶,常溫(20℃)酶解→添加焦亞硫酸鈉30~50mg/L并經(jīng)100目尼龍紗網(wǎng)粗濾→添加活化后的酵母菌200~400mg/L →常溫(20℃)酒精發(fā)酵 5~ 7 d→低溫( 8℃)靜置48 h以上→吸取上清液移入液態(tài)發(fā)酵罐,測得酒精含量為 4%,添加酵母提取物5‰、葡萄糖 8‰,升溫至36℃后接種滬釀1.01醋酸菌 4‰→調整發(fā)酵罐轉子轉速≥1000rpm,醋酸發(fā)酵→澄清→過濾→灌裝→滅菌→成品。

    1.3.2 醋酸菌分離計數(shù)。平板涂布法。稱取醋酸菌分離培養(yǎng)基55.0 g,用1000ml蒸餾水加熱溶解,分裝并于116℃高壓滅菌20min,冷卻至50℃再加入 3%無水乙醇,搖勻后倒入培養(yǎng)皿,待用。準確吸取發(fā)酵液 1ml,迅速在無菌環(huán)境下按梯度稀釋至109倍,每個梯度吸取 0.1ml接種至培養(yǎng)基上,并用涂布棒快速涂勻,30℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48 h,培養(yǎng)結束后觀察培養(yǎng)基顏色的變化和菌落形態(tài),記數(shù)。

    1.3.3 溶解氧測定。參考HJ 506-2009[11]采用電化學探頭方法。

    1.3.4 pH。采用pH計直接測定。

    1.3.5 滴定酸。采用酸堿測定法測定。

    2 結果與分析

    由圖 1可以看出,滬釀 1.01醋酸菌在葡萄柚果醋發(fā)酵過程中的活菌數(shù)變化具有先升高后降低的趨勢。在發(fā)酵初始階段,醋酸菌計數(shù)為 5.6 2 log CFU/mL,此后的48 h內進入快速增殖階段,醋酸菌數(shù)量最大值達10.7 3log CFU/mL,之后維持在 9.0 log CFU/mL水平并有所下降。通常情況下培養(yǎng) 1 d后為醋酸菌的增殖過程,此時酒精消耗量很小,產(chǎn)酸量并不明顯。培養(yǎng) 2 d后,醋酸菌進入代謝旺盛階段,醋酸菌數(shù)量增加不再明顯,此時產(chǎn)酸速度加快。一般培養(yǎng) 4~ 5 d即可達到產(chǎn)酸量的最大值。

    圖1 葡萄柚醋發(fā)酵過程中醋酸菌計數(shù)的變化

    由圖 2可以看出,在葡萄柚果醋發(fā)酵過程中溶解氧含量的變化呈下降趨勢。在發(fā)酵24 h內,發(fā)酵液中溶解氧含量呈急速下降的趨勢,由 8.0mg/L下降至 0.5mg/L,之后一直維持在較低水平。這可能是因為滬釀 1.01醋酸菌在葡萄柚果醋發(fā)酵初始階段快速增殖,需要消耗大量氧氣。至整個發(fā)酵階段,醋酸菌對氧氣的需求量一直較高,這可能是測得發(fā)酵液溶解氧含量較低的原因之一。

    圖2 葡萄柚醋發(fā)酵過程中溶解氧量的變化

    由圖 3可以看出,在葡萄柚果醋發(fā)酵過程中pH值呈降低趨勢。相比醋酸菌種子培養(yǎng)液(由酵母提取物 1.0%、葡萄糖 4.0%、酒精 4.0%等配制)的pH值≥ 6.5而言,葡萄柚汁的pH值較低,發(fā)酵初始階段僅為 4.0左右,可能會對醋酸菌的增殖速度和產(chǎn)酸能力造成影響。但是最終pH值降低至 3.6左右,接近一般食醋pH值 3.2~3.5水平。

    圖3 葡萄柚醋發(fā)酵過程中pH值的變化

    由圖 4可以看出,葡萄柚果醋發(fā)酵過程中滴定算含量呈增加的趨勢。由發(fā)酵初始階段滴定酸含量 0.5%至發(fā)酵96 h后達 2.4%。按照初始酒精度 4%計算,理論最大產(chǎn)酸量也為 4%。但是考慮深層發(fā)酵罐攪拌、通氣過程中造成約30%左右的酒精逃逸損失,實際的理論產(chǎn)酸量約為2.8%,則產(chǎn)酸率達到85.71%。提高發(fā)酵初始酒精度對產(chǎn)酸率的影響尚待進一步研究。

    圖4 葡萄柚醋發(fā)酵過程中滴定酸含量的變化

    3 結論

    醋酸發(fā)酵是果醋生產(chǎn)的重要階段,發(fā)酵方法的選擇決定了果醋的發(fā)酵風味、發(fā)酵效率,而醋酸菌菌種對果醋品質的影響較大。近年來,關于柑橘果醋發(fā)酵菌種的篩選研究時有報道,但是能否適應液態(tài)深層發(fā)酵工藝尚不明確。本實驗結果表明,滬釀 1.01醋酸菌可用于液態(tài)深層發(fā)酵法釀制葡萄柚果醋,48 h內為該醋酸菌的快速增殖期,發(fā)酵96 hpH值為 3.6,可滴定酸含量 2.4%。但還需進行果醋發(fā)酵工藝條件的優(yōu)化,為液態(tài)深層發(fā)酵柑橘類果醋的應用研究提供一定的理論參考,以促進柑橘果醋的工業(yè)化生產(chǎn)。

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