EV71型IgG、IgM和IgA抗體在手足口病診斷中的意義

賴芳， 溫歡雨， 梁雪燕

手足口病多發(fā)生于年齡<5歲的嬰幼兒，由多種不同的腸道病毒引起，臨床表現(xiàn)為口腔及四肢部位出現(xiàn)斑丘疹、皰疹等，可累及中樞神經(jīng)和呼吸系統(tǒng)，導(dǎo)致神經(jīng)源性肺水腫、無(wú)菌性腦膜炎、腦干腦炎等危重狀況，有傳染性，且致死率及致殘率均較高，為兒童的生命健康帶來巨大的威脅和挑戰(zhàn)[1-2]。腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是手足口病常見的致病病毒，易產(chǎn)生腦干腦炎等嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，疾病進(jìn)展快，病情重，幸存患兒常伴隨顯著的疾病后遺癥[3]?？焖贆z測(cè)病原菌，及早確診，進(jìn)行對(duì)癥治療對(duì)手足口病患兒的預(yù)后非常重要[4]，本研究以2019年3月至2020年3月我院收治的手足口病患兒為研究對(duì)象，探究EV71型IgG、IgM和IgA抗體在手足口病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2019年3月至2020年3月在我院就診的EV71感染的手足口病患兒116例為研究對(duì)象，其中普通型67例和重癥49例。普通型患兒中男32例，女35例；年齡0.4～6歲，平均(2.37±1.68)歲。重癥患兒中男24例，女25例；年齡0.4～6歲，平均(2.66±1.93)歲。普通型患兒和重癥患兒在性別、年齡方面比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照《手足口病診療指南(2018年版)》中手足口病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。輕癥患兒僅發(fā)熱或在口腔或四肢部位出現(xiàn)皮疹，重癥患兒出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)或心肺系統(tǒng)并發(fā)癥。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)符合手足口病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年齡0.4～6歲；(3)病程<5 d的急性期患兒；(4)本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，患兒家屬知情同意。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)近期應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑者；(2)合并結(jié)核等其他病原菌感染者；(3)并發(fā)惡性腫瘤者；(4)合并免疫系統(tǒng)功能異常者。

1.5 方法 取患兒的咽拭子或糞便樣本，加入500 μL HBSS溶液，混勻，8 000 r/min離心5 min(離心半徑10 cm)，取上清提取RNA，使用EV71 RNA檢測(cè)試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)，進(jìn)行EV71的核酸檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)為Ct值<35為陽(yáng)性，Ct值≥35需重復(fù)檢測(cè)，無(wú)Ct值為陰性。清晨采集手足口病患兒空腹?fàn)顟B(tài)下的靜脈血3 mL，3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)，取血清進(jìn)行抗體檢測(cè)。使用EV71-IgM、EV71-IgG、EV71-IgA抗體檢測(cè)試劑盒(上海金標(biāo)生物科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)原理為膠體金免疫層析法，操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行，判定標(biāo)準(zhǔn)為僅對(duì)照區(qū)出現(xiàn)紅線為陰性，僅檢測(cè)區(qū)出現(xiàn)紅線為結(jié)果無(wú)效，需重新檢測(cè)，對(duì)照區(qū)和檢測(cè)區(qū)均出現(xiàn)紅線為陽(yáng)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 手足口病患兒EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況 116例患兒中核酸檢測(cè)陽(yáng)性率為72.41%(84/116)，EV71型IgM抗體陽(yáng)性檢出率為68.10%(79/116)，IgG抗體陽(yáng)性檢出率62.07%(72/116)，IgA抗體陽(yáng)性檢出率60.34%(70/116)，與EV71核酸檢測(cè)陽(yáng)性率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.516，2.818，3.786，P>0.05)。

2.2 不同病情EV71感染手足口病患兒的EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況 重癥手足口病患兒的EV71型IgM、IgG抗體陽(yáng)性率高于普通型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；重癥和普通型手足口病患兒的EV71型IgA抗體陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同病情EV71感染手足口病患兒的EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢出情況[n(%)]

3 討論

手足口病是近年來高發(fā)的兒科急性傳染病，一年四季均可發(fā)病，4～7月發(fā)病率最高，多發(fā)于嬰幼兒，起病急，進(jìn)展快，為患兒家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)生活負(fù)擔(dān)，影響兒童的健康成長(zhǎng)，成為各國(guó)日益關(guān)注的公共衛(wèi)生問題[6-7]。EV71和柯薩奇病毒A16是手足口病的主要致病原，EV71發(fā)現(xiàn)于1969年，基因組為單股正鏈RNA分子，顆粒為球形結(jié)構(gòu)，表面無(wú)突出和包膜，EV71感染在手足口病流行中占比較高，部分患兒并發(fā)中樞神經(jīng)等系統(tǒng)的并發(fā)癥而死亡[8-9]。因此，對(duì)手足口病患兒進(jìn)行早期診斷和對(duì)癥干預(yù)有重要意義。

目前手足口病感染的病原學(xué)診斷金標(biāo)準(zhǔn)為病毒分離培養(yǎng)，但該法操作要求高，耗時(shí)長(zhǎng)且成本高，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)成為病毒診斷的重要方法[10]?；純焊腥綞V71病毒后，機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，在抵抗病毒和自身恢復(fù)過程中發(fā)揮重要作用。IgM抗體是在病毒感染早期即產(chǎn)生的免疫球蛋白，恢復(fù)期血清濃度下降或消失，林威等[11]發(fā)現(xiàn)發(fā)病第1天患兒體內(nèi)即可產(chǎn)生EV71型IgM抗體，發(fā)病5～8 d時(shí)血清濃度達(dá)峰值，在疾病的早期診斷中顯示出較好的效果。IgG抗體則是機(jī)體抗感染的重要部分，可中和有害代謝物、毒素和病原體，疾病恢復(fù)期IgG抗體的血清可達(dá)平時(shí)數(shù)倍；呼吸道分泌型的IgA抗體可預(yù)防局部感染，在防御外來病原體方面有重要作用[12]。

本研究對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢測(cè)對(duì)手足口病患兒的檢出能力進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示和實(shí)時(shí)熒光定量PCR相比，EV71型IgG、IgM和IgA抗體檢測(cè)陽(yáng)性率無(wú)顯著差異，提示核酸檢測(cè)和血清學(xué)檢測(cè)在檢測(cè)能力上相差不大。血清學(xué)檢測(cè)對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備和操作技術(shù)要求較低，檢測(cè)所需時(shí)間短，成本低，逐漸在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣使用。重癥手足口病患兒的EV71型IgM抗體陽(yáng)性檢出率高于普通型，提示EV71感染是引發(fā)重癥的危險(xiǎn)因素，可根據(jù)EV71型IgM抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行快速分疹，做好防護(hù)，進(jìn)行對(duì)癥治療，改善患兒預(yù)后[13]。有研究報(bào)道EV71型IgG3抗體能夠介導(dǎo)抗體依賴性病毒感染增強(qiáng)作用，加重病情，而無(wú)中和病原體的活性[14]，本研究中重癥手足口病患兒的血清EV71型IgG抗體陽(yáng)性檢出率高于普通型，可能與EV71型IgG介導(dǎo)的抗體依賴性增強(qiáng)效應(yīng)參與疾病進(jìn)程，導(dǎo)致更嚴(yán)重的臨床表現(xiàn)有關(guān)，提示可考慮研發(fā)中和抗體的EV71疫苗，以避免潛在的抗體依賴性增強(qiáng)效應(yīng)現(xiàn)象。分泌型IgA抗體發(fā)揮預(yù)防局部感染的作用，有研究顯示和對(duì)照組相比，手足口病患兒的血清IgA抗體降低，降低機(jī)體呼吸道防御能力，更易發(fā)生口腔皮疹[15]。本研究中重癥患兒和輕癥患兒的EV71型IgA陽(yáng)性檢出率無(wú)顯著性差異，提示臨床治療中可適當(dāng)補(bǔ)充免疫球蛋白，增強(qiáng)患兒免疫能力。

綜上所述，EV71型IgM、IgG和IgA抗體檢測(cè)在手足口病診斷中有較好的診斷能力，重癥手足口病患兒的血清EV71型IgM和IgG抗體陽(yáng)性檢出率高于輕癥患兒，進(jìn)行血清學(xué)抗體檢測(cè)對(duì)于手足口病的分診和對(duì)癥治療有重要意義。