產(chǎn)阿魏酸酯酶菌株的篩選與產(chǎn)酶條件優(yōu)化

段曉莉，江波，張濤

(江南大學(xué),食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫，214122)

阿魏酸(ferulic acid，F(xiàn)A)廣泛存在于植物細(xì)胞壁，與多糖、木質(zhì)素間以醚鍵或酯鍵形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[1]，以增強(qiáng)細(xì)胞機(jī)械強(qiáng)度與完整性，同時(shí)降低生物分解率[2]。FA是公認(rèn)安全的抗氧化劑，在歐洲國(guó)家已被列入食品添加劑。此外，研究表明，F(xiàn)A具有紫外吸收、抗菌消炎、防癌降脂等生物活性，在醫(yī)藥、化妝、造紙等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用前景[3]。目前，生產(chǎn)阿魏酸方法有植物提取法、化學(xué)合成法和生物酶法。植物提取法通過(guò)酸堿水解的方式破壞植物內(nèi)其他高價(jià)值化學(xué)成分，同時(shí)副產(chǎn)物增多，產(chǎn)物分離困難，因此能耗大，污染環(huán)境?；瘜W(xué)合成法通過(guò)有機(jī)反應(yīng)合成FA，但反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，環(huán)境污染嚴(yán)重。相比而言，生物酶法則具有反應(yīng)條件溫和，專一性高，產(chǎn)物得率高，對(duì)環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)[4]，這些優(yōu)點(diǎn)使生物酶法成為生產(chǎn)FA的研究熱點(diǎn)。

阿魏酸酯酶(feruloyl esterase，F(xiàn)AE，E.C.3.1.1.73)，屬于羧酸酯酶亞類，可催化水解阿魏酸與多糖、纖維素、木質(zhì)素間的酯鍵或醚鍵，生成阿魏酸[5]。此外，在三元有機(jī)溶劑體系中，阿魏酸酯酶還可通過(guò)酯交換反應(yīng)生產(chǎn)阿魏酰寡糖或羥基肉桂酸酯等衍生物[6]。FAE廣泛分布于植物和微生物中，目前產(chǎn)FAE微生物主要有曲霉屬[7]、青霉屬[8]等絲狀真菌，放線菌[9]、乳酸菌[10]、芽孢桿菌[11]等細(xì)菌。不同來(lái)源FAE其酶學(xué)性質(zhì)、序列同源性、空間結(jié)構(gòu)有較大差異，目前對(duì)黑曲霉來(lái)源的FAE研究較深入。盡管真菌產(chǎn)阿魏酸酯酶能力強(qiáng)，但真菌來(lái)源的FAE分離困難，發(fā)酵酶活力低，耐熱性差等缺點(diǎn)導(dǎo)致其難以規(guī)模化生產(chǎn)[12]，因此發(fā)掘更多細(xì)菌來(lái)源、酶活力高的阿魏酸酯酶成為亟需解決的問(wèn)題并獲得國(guó)內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。

本研究從土壤中分離鑒定得到1株產(chǎn)阿魏酸酯酶的菌株SK52.001；確定了最佳碳源及濃度，最佳氮源和培養(yǎng)基初始pH值；明確FAE是誘導(dǎo)性酶，為更多細(xì)菌來(lái)源的阿魏酸酯酶提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 材料

土壤：在江蘇無(wú)錫貢湖灣濕地和長(zhǎng)廣溪濕地隨機(jī)挑選10個(gè)地點(diǎn)采集土壤下5～10 cm深腐殖質(zhì)土壤。

小麥麩皮：江蘇無(wú)錫歐尚超市。

1.1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1200型高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；Waters ACQUITY UPLC液相色譜串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀，美國(guó)沃特世公司。

1.1.3 培養(yǎng)基

分離培養(yǎng)基(g/L)：馬鈴薯200，蔗糖20，瓊脂15～20；pH值自然，121 ℃滅菌20 min。

種子培養(yǎng)基(g/L)：馬鈴薯200，蔗糖20；pH值自然，121 ℃滅菌20 min。

篩選固體培養(yǎng)基(g/L)：NaNO32，K2HPO4·3H2O 1，KCl 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01，瓊脂15～20；pH值自然，115 ℃滅菌30 min。0.22 μm濾膜過(guò)濾100 mg/L阿魏酸乙酯的N,N-二甲基甲酰胺溶液，添加10%(體積分?jǐn)?shù))阿魏酸乙酯溶液至滅菌培養(yǎng)基中，搖勻至培養(yǎng)基呈均勻的乳白色溶液后倒平板。

基礎(chǔ)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基[13](g/L)：麥麩20，NaNO32，K2HPO4·3H2O 1，KCl 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01；pH值自然，115 ℃滅菌30 min。

LB培養(yǎng)基(g/L)：胰蛋白胨10，酵母提取物5，NaCl 10；pH值自然，121 ℃滅菌20 min。

1.2 菌株篩選

1.2.1 菌株分離

稱取土樣1.0 g加入到10 mL含玻璃珠的無(wú)菌水，于30 ℃，200 r/min振蕩30 min，靜置2 min后取上清液梯度稀釋，并將稀釋懸浮液取100 μL涂布于分離培養(yǎng)基，倒置于30 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)至單菌落長(zhǎng)出。

1.2.2 菌株篩選

將分離培養(yǎng)基的單菌落挑至篩選培養(yǎng)基，利用以阿魏酸乙酯為唯一碳源的篩選平板篩選。于30 ℃ 培養(yǎng)箱倒置24 h，觀察菌落周圍是否有透明圈出現(xiàn)。若有透明圈，則說(shuō)明該菌株具有阿魏酸酯酶活性。

將有阿魏酸酯酶活性的菌落劃線純化，將純培養(yǎng)物接種至種子培養(yǎng)基，30 ℃，200 r/min培養(yǎng)18 h，按5%接種量接種至基礎(chǔ)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基培養(yǎng)7 d，定時(shí)取發(fā)酵液檢測(cè)其是否存在阿魏酸酯酶活性。

1.3 阿魏酸酯酶活力測(cè)定

1.3.1 測(cè)定方法

粗酶液制備：1 mL發(fā)酵液室溫下以10 000 r/min離心10 min，發(fā)酵上清液即為粗酶液。

酶反應(yīng)：1 mL酶反應(yīng)體系中含250 μL粗酶液和750 μL濃度為0.003 mol/L 阿魏酸甲酯(溶解在0.050 mol/L Tris-HCl緩沖溶液，pH值8.0)。酶反應(yīng)體系在50 ℃水浴鍋反應(yīng)15 min后立即煮沸滅酶10 min ，終止酶反應(yīng)，12 000 r/min離心2 min，取上清液制樣。以加入等量蒸餾水代替粗酶液為空白對(duì)照，其他操作相同。

酶活力單位定義：一定溫度下，1 min水解阿魏酸甲酯生成1 μmol阿魏酸所需要的酶量為1個(gè)酶活力單位(1 U)。

1.3.2 高效液相色譜檢測(cè)條件

色譜條件參照文獻(xiàn)[14]的方法，并加以改進(jìn)。Agilent 1200型高效液相色譜儀；色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18(Agilent，4.6 mm×150 mm，3.5 μm)；紫外檢測(cè)器；流動(dòng)相A：1%乙酸溶液，流動(dòng)相B：甲醇；流速1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)320 nm，梯度洗脫程序如表1所示。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program

1.4 酶反應(yīng)產(chǎn)物L(fēng)C-MS鑒定

色譜條件：Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×150 mm，1.7 μm)；Waters ACQUITY PDA檢測(cè)器；流動(dòng)相A：0.1% 甲酸，流動(dòng)相B：乙腈；梯度洗脫分離條件：0～40 min，100%～70% A；40～45 min，70%～20% A；45～50 min，20%～0% A；50～55 min，0%～100% A；流速0.3 mL/min；柱溫45 ℃。

質(zhì)譜條件：錐孔電壓30 V；毛細(xì)管電壓3.5 V；ESI陰離子電離噴霧源；脫溶劑汽溫度400 ℃；脫溶劑汽流量700 L/h；離子源溫度100 ℃；錐孔汽流量50 L/h；質(zhì)量掃描范圍20～2 000m/z。

1.5 目標(biāo)菌株鑒定

1.5.1 菌株形態(tài)鑒定

目標(biāo)菌株純培養(yǎng)物劃線于LB平板，觀察菌落形態(tài)和顏色；并進(jìn)行革蘭氏染色及菌株個(gè)體形態(tài)觀察。1.5.2 生理生化特征

參照《伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》[15]及《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[16]進(jìn)行目標(biāo)菌株生理生化特征檢測(cè)。

1.5.3 分子生物學(xué)鑒定

菌株16S rRNA 基因測(cè)序由天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司完成。將16S rRNA序列在NCBI(National center for Biotechnology Information)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析，并采用MEGA 7.0軟件繪制系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1.6 發(fā)酵產(chǎn)酶條件優(yōu)化

發(fā)酵條件采用以下方式：挑取單菌落至50 mL LB培養(yǎng)基于30 ℃，200 r/min 培養(yǎng)18 h后，按5%接種量接種至發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基，30 ℃，200 r/min培養(yǎng)26 h，250 mL錐形瓶裝液量為25 mL，測(cè)定發(fā)酵結(jié)束的菌體生長(zhǎng)量及發(fā)酵上清液酶活力，每次優(yōu)化的結(jié)果均用于之后的實(shí)驗(yàn)中。

1.6.1 碳源種類及濃度

去淀粉小麥麩皮[17]：麩皮浸沒(méi)于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.3%的醋酸鉀溶液中，95 ℃水浴1 h，其間不斷攪拌，去離子水反復(fù)沖洗至淀粉完全去除，105 ℃烘干至恒重。

以10 g/L葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、D-木糖、木聚糖、可溶性淀粉、小麥麩皮(wheat bran，WB)、去淀粉小麥麩皮(destarched wheat bran，DSWB)作為唯一碳源確定最佳碳源。改變最佳碳源濃度，分別為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50 g/L，確定最佳碳源濃度。

1.6.2 復(fù)合碳源

額外添加5 g/L葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、D-木糖和木聚糖為復(fù)合碳源，以45 g/L WB為對(duì)照[18]。

1.6.3 氮源種類

以5 g/L胰蛋白胨、大豆蛋白胨、魚(yú)粉蛋白胨、酵母提取物、硫酸銨、尿素、硝酸鈉為唯一氮源，以不加入氮源為對(duì)照。

1.6.4 初始pH值

分別調(diào)節(jié)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基初始pH值為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，確定菌株生長(zhǎng)的最適初始pH值。

1.7 發(fā)酵產(chǎn)酶曲線測(cè)定

將種子液分別接種至誘導(dǎo)性碳源(45 g/L麩皮)，非誘導(dǎo)性碳源(45 g/L葡萄糖)，以非誘導(dǎo)性碳(45 g/L葡萄糖)預(yù)培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期后添加45 g/L麩皮的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，于30 ℃，200 r/min搖床培養(yǎng)，每隔一定時(shí)間取樣測(cè)定OD600值和發(fā)酵酶活力。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株篩選結(jié)果

土樣經(jīng)分離和篩選后，共獲得105株菌，其中8株產(chǎn)阿魏酸酯酶，發(fā)酵酶活力見(jiàn)表2。3號(hào)菌株的阿魏酸酯酶活力最高，達(dá)195 U/L，因此命名3號(hào)菌株為SK52.001，作為后續(xù)研究菌株。

表2 菌株產(chǎn)酶活力測(cè)定 單位：U/L

2.2 酶反應(yīng)產(chǎn)物L(fēng)C-MS結(jié)果

由圖1-a全離子色譜圖可知，目標(biāo)產(chǎn)物阿魏酸在3.64 min出單峰。在負(fù)離子模式一級(jí)質(zhì)譜圖中，相同保留時(shí)間的是[M-H]-分子離子峰，因此由質(zhì)譜圖1-b中相對(duì)豐度最高的碎片m/z=193可知，目標(biāo)產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量為194，與阿魏酸單體的相對(duì)分子質(zhì)量一致。

a-色譜圖；b-質(zhì)譜圖圖1 酶反應(yīng)產(chǎn)物L(fēng)C-MS圖譜Fig.1 Result of SK52.001 product by LC-MS

2.3 菌種鑒定

2.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定

該菌株在LB固體平板上的菌落為圓形，較薄，中間呈淺黃色，邊緣微白，表面黏稠濕潤(rùn)，邊緣凹凸不整齊(圖2)。細(xì)胞呈短桿狀，兩端鈍圓，具有典型的芽孢桿菌的形態(tài)特征，屬于革蘭氏陽(yáng)性菌。

2.3.2 生理生化特征

菌株SK52.001生理生化鑒定結(jié)果如表3所示。

2.3.3 分子生物學(xué)鑒定

測(cè)序結(jié)果顯示，SK52.001的16S rRNA基因序列含1 404個(gè)堿基，經(jīng)NCBI在線數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，其與多種芽孢桿菌屬菌株同源性達(dá)100%，結(jié)合該菌株生理生化試驗(yàn)與形態(tài)學(xué)特征，最終確定SK52.001為短小芽孢桿菌。為進(jìn)一步確定目標(biāo)菌株與已知芽孢桿菌屬菌株間親緣關(guān)系，采用MEGA 7軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，采用Neighbor-Joining分析法[19]，通過(guò)1 000次步長(zhǎng)檢驗(yàn)得到系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，如圖3所示。

圖3 利用Neighbor-Joining法構(gòu)建菌株SK52.001的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of strain SK52.001 constructed by method of Neighbor-Joining 注：★為本研究菌株

2.4 發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

2.4.1 碳源種類與濃度

當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中碳源種類不同時(shí)，菌體生長(zhǎng)量及阿魏酸酯酶活力存在顯著差異，見(jiàn)圖4-a。以葡萄糖等簡(jiǎn)單糖為碳源時(shí)，F(xiàn)AE發(fā)酵酶活力低，這與SHIN等[20]研究結(jié)果基本一致。以麩皮和DSWB為碳源時(shí)，菌體生長(zhǎng)量較高，一方面可能是麩皮中含多種蛋白質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如尼克酸、硫胺酸等，可以滿足菌體生長(zhǎng)需求[21]，另一方面FAE為誘導(dǎo)酶[22]，麩皮與DSWB含有阿魏酸酯鍵可誘導(dǎo)生產(chǎn)大量FAE提高酶活力。其中，以麩皮為碳源時(shí)FAE酶活力最高，可能是由于DSWB中水溶性物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)成分流失。

以麩皮為碳源時(shí)，探究了不同濃度對(duì)FAE酶活力的影響(圖4-b)。當(dāng)麩皮質(zhì)量濃度低于45 g/L時(shí)，F(xiàn)AE酶活力隨著麩皮濃度的增加而提高，當(dāng)麩皮質(zhì)量濃度在45 g/L時(shí)，F(xiàn)AE酶活力最高，隨后酶活力呈現(xiàn)下降趨勢(shì)?？赡苁且?yàn)檫^(guò)高的麩皮濃度使培養(yǎng)基中水分含量和空氣通量減少[23]，菌體的FAE合成能力下降；同時(shí)，麩皮不斷被分解利用使培養(yǎng)基中球形顆粒增多，濁度增加，因此在600 nm處的光密度增加。

2.4.2 復(fù)合碳源

本實(shí)驗(yàn)還探究了當(dāng)麩皮質(zhì)量濃度為45 g/L時(shí)，添加其他糖共發(fā)酵對(duì)酶活力影響(圖4-c)。研究表明，簡(jiǎn)單糖的存在一定程度上抑制FAE的生產(chǎn)，這與之前研究相同[18]，該現(xiàn)象可能是菌體生長(zhǎng)產(chǎn)酶過(guò)程中，簡(jiǎn)單糖與麩皮作為碳源相互競(jìng)爭(zhēng)，過(guò)多碳源抑制微生物生長(zhǎng)，進(jìn)而減少FAE表達(dá)分泌。因此，選擇質(zhì)量濃度為45 g/L麩皮為唯一碳源時(shí)，F(xiàn)AE酶活力最高。

2.4.3 氮源種類

氮源是菌體生長(zhǎng)和細(xì)胞代謝的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，SK52.001利用不同氮源生長(zhǎng)產(chǎn)酶情況不同(圖4-d)。麩皮作為天然化合物包括淀粉、蛋白質(zhì)、纖維素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也可作為氮源，因此選用不額外添加氮源的培養(yǎng)基作為對(duì)照組。結(jié)果顯示，有機(jī)氮源酶活力普遍高于無(wú)機(jī)氮源，可能是由于有機(jī)氮源中的小分子肽更易于菌體吸收利用，而無(wú)機(jī)氮源轉(zhuǎn)化率低，降低菌體生長(zhǎng)代謝速率，造成產(chǎn)酶量減少[24]。麩皮作為氮源，其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，氮源提供不足，菌體利用率低使生長(zhǎng)受抑制，產(chǎn)酶量少。當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)基含5 g/L胰蛋白胨時(shí)，F(xiàn)AE酶活力最高，大豆蛋白胨次之。然而，與早期報(bào)道[25]結(jié)果不同，有機(jī)氮源如酵母提取物蛋白胨不支持阿魏酸酯酶的生產(chǎn)，主要是由于產(chǎn)酶菌株對(duì)氮源的利用率不同。

a-碳源種類；b-麩皮濃度；c-復(fù)合碳源；d-氮源種類圖4 產(chǎn)酶培養(yǎng)基成分優(yōu)化Fig.4 Optimization in the medium for the FAE production

2.4.4 初始 pH值

培養(yǎng)基pH值直接影響菌體代謝及產(chǎn)酶，過(guò)酸過(guò)堿的生長(zhǎng)環(huán)境都抑制菌體生長(zhǎng)代謝。由圖5可知，在pH值為6.0時(shí)FAE酶活力達(dá)421 U/L。曹艷等[26]研究顯示，溜曲霉FD-8(Aspergillustamarii，F(xiàn)D-8)發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基最適pH值為6.0，在該pH值下，菌體生長(zhǎng)量最多，可合成更多的FAE，進(jìn)而提高FAE酶活力。

圖5 初始pH值優(yōu)化Fig.5 Optimization of initial pH values

2.5 發(fā)酵產(chǎn)酶曲線

分別考察以葡萄糖為碳源，以麩皮為碳源，以葡萄糖為碳源培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期加麩皮誘導(dǎo)產(chǎn)酶在不同發(fā)酵時(shí)間的OD600和發(fā)酵酶活力(如圖6所示)。當(dāng)以葡萄糖為碳源時(shí)，菌株生長(zhǎng)16 h進(jìn)入穩(wěn)定期，而FAE酶活力極低，且?guī)缀鯚o(wú)變化，說(shuō)明葡萄糖僅供菌株維持基本生長(zhǎng)代謝。當(dāng)以麩皮為碳源時(shí)，菌株培養(yǎng)24 h進(jìn)入穩(wěn)定期，隨后隨OD600緩慢增加酶活力也不斷升高，培養(yǎng)至32 h時(shí)FEA酶活力最高。當(dāng)以葡萄糖為碳源預(yù)培養(yǎng)8 h后添加麩皮誘導(dǎo)產(chǎn)酶44 h時(shí)，F(xiàn)AE酶活力顯著提高至808 U/L，說(shuō)明麩皮的添加可誘導(dǎo)菌株生產(chǎn)FAE，前期葡萄糖提供菌株生長(zhǎng)所需碳源，之后補(bǔ)加麩皮，一方面提供產(chǎn)酶誘導(dǎo)物，另一方面進(jìn)一步補(bǔ)充供微生物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以菌體量與產(chǎn)酶量均高于僅用麩皮或葡萄糖為碳源的產(chǎn)量。以上結(jié)果表明，該菌株所產(chǎn)FAE是誘導(dǎo)型表達(dá)，只有當(dāng)培養(yǎng)基中存在誘導(dǎo)物時(shí)，F(xiàn)AE才能大量表達(dá)。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)外報(bào)道生產(chǎn)阿魏酸酯酶的不同菌株發(fā)酵產(chǎn)酶條件和酶活力見(jiàn)表4。本研究中短小芽孢桿菌來(lái)源的阿魏酸酯酶在國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，且發(fā)酵酶活力可達(dá)808 U/L，在工業(yè)中有巨大的潛在應(yīng)用價(jià)值。

表4 阿魏酸酯酶發(fā)酵酶活力Table 4 Enzyme activity of FAE

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)從江蘇無(wú)錫貢湖灣濕地和長(zhǎng)廣溪濕地土壤中分離出1株產(chǎn)阿魏酸酯酶的菌株，通過(guò)對(duì)此菌株進(jìn)行形態(tài)學(xué)特征觀察、生理生化試驗(yàn)及分子生物學(xué)鑒定，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)后確定該菌株為短小芽孢桿菌BacilluspumilusSK52.001。其酶反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)過(guò)LC-MS后可確定該酶為阿魏酸酯酶，利用該菌株在30 ℃，200 r/min條件下，當(dāng)接種量為5%時(shí)，在45 g/L麩皮，5 g/L胰蛋白胨，培養(yǎng)基初始pH值為6.0時(shí)，發(fā)酵培養(yǎng)26 h，發(fā)酵液中的阿魏酸酯酶活力達(dá)到421 U/L，比原始酶活力(195 U/L)提高115%。當(dāng)菌株在以45 g/L葡萄糖為碳源的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)8 h，加入45 g/L麩皮誘導(dǎo)產(chǎn)酶44 h時(shí)，發(fā)酵液中阿魏酸酯酶活力最高，達(dá)到808 U/L。研究結(jié)果表明，篩選得到的菌株B.pumilusSK52.001是一種具有工業(yè)化生產(chǎn)能力的阿魏酸酯酶生產(chǎn)菌。