E6/E7mRNA+TCT檢測(cè)對(duì)宮頸癌診斷符合率的影響

劉 超

(焦作市第二人民醫(yī)院，河南 焦作 454000)

宮頸癌(Cervical cancer，CC)是臨床常見女性惡性腫瘤疾病，多發(fā)于30～55歲群體，但近年其發(fā)病有年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重危害女性健康[1]。目前CC尚無(wú)特異性治療手段，早期診斷、早期治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。液基薄層細(xì)胞檢測(cè)(TCT檢測(cè))是臨床診斷CC常用方法，其操作簡(jiǎn)便，但檢測(cè)結(jié)果易受取材、檢測(cè)者主觀因素影響[2]。近年相關(guān)研究指出，E6mRNA、E7mRNA是HPV主要致癌基因，通過(guò)檢測(cè)其表達(dá)水平對(duì)評(píng)價(jià)CC發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、惡性程度具有重要價(jià)值[3]。但任何檢測(cè)方法單一應(yīng)用均存在敏感性低或特異性差等弊端，本研究旨在通過(guò)受試者工作特征曲線(ROC)分析E6/E7mRNA、TCT檢測(cè)聯(lián)合檢測(cè)CC的價(jià)值，為臨床完善檢測(cè)方案提供參考?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年4月～2020年8月焦作市第二人民醫(yī)院CC患者69例作為觀察組，同期單純HPV感染患者93例作為對(duì)照組。觀察組年齡23～56歲，平均(39.46±6.44)歲，孕次0～4次，平均(1.96±0.33)次，產(chǎn)次0～3次，平均(1.51±0.22)次。對(duì)照組年齡22～58歲，平均(40.38±5.91)歲，孕次0～5次，平均(2.02±0.31)次，產(chǎn)次0～3次，平均(1.49±0.21)次。兩組年齡、孕次、產(chǎn)次基礎(chǔ)資料均衡可比(P>0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理診斷、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確診為CC或單純HPV感染；無(wú)子宮切除史或?qū)m頸手術(shù)史；入組前3d內(nèi)無(wú)性生活史及陰道沖洗操作；知情理解簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期女性或近期有妊娠意愿者；陰道內(nèi)放置藥物者；無(wú)性生活史或性生活史不足1年者。

1.2 方法

TCT檢測(cè)：以TCT專用取樣刷取材，置入宮頸管內(nèi)與鱗柱上皮交界部位經(jīng)宮頸外口順時(shí)針旋轉(zhuǎn)動(dòng)5周，取樣刷置盛ThinPrep細(xì)胞保存液的取樣瓶?jī)?nèi)，孝感奧華醫(yī)療科技有限公司AZP-B型自動(dòng)液基薄層細(xì)胞制片機(jī)制作薄層涂片，固定，巴氏染色，參考TBS細(xì)胞分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，具體為NILM：未見上皮內(nèi)瘤變(0級(jí))；LSIL：低度鱗狀上皮內(nèi)病變(1級(jí))；ASC-US：未明確意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞(2級(jí))；HSIL：高度鱗狀上皮內(nèi)病變(3級(jí))；ASC-H：非典型鱗狀上皮細(xì)胞不排除高度鱗狀上皮病變(4級(jí))；AGC：非典型性腺上皮細(xì)胞(5級(jí))；SCC：鱗狀細(xì)胞癌(6級(jí))。

E6/E7mRNA檢測(cè)：采取PCR反向點(diǎn)雜交技術(shù)，以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心分離所取標(biāo)本(離心半徑10 cm)，舍上清液，加2 mL蒸餾水清洗，加細(xì)胞裂解液，以1∶800比例混合溶解液、蛋白酶；水浴30 min(65℃)獲取裂解液；加2.5 mol/L氫氧化鈉溶液，水浴30 min(55℃)，加終止液。雜交捕獲E6/E7mRNA，信號(hào)放大，發(fā)光反應(yīng)，Quanti VirusTM冷光儀測(cè)E6/E7mRNA表達(dá)量。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)。對(duì)比不同CC分期患者E6/E7mRNA表達(dá)量。分析E6/E7mRNA表達(dá)量與CC分期間關(guān)系。分析E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)單獨(dú)與聯(lián)合診斷CC的價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩組E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)(見表1)

表1 對(duì)比兩組E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)

2.2 分析E6/E7mRNA表達(dá)量與CC分期間關(guān)系

經(jīng)Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析，E6/E7mRNA表達(dá)量與CC分期間呈正相關(guān)(r=0.60，P<0.05)。

2.3 對(duì)比不同CC分期患者E6/E7mRNA表達(dá)量(見表2)

表2 對(duì)比不同CC分期患者E6/E7mRNA表達(dá)量

2.4 分析E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)單獨(dú)與聯(lián)合診斷CC的價(jià)值

根據(jù)E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)繪制診斷CC的ROC，得到AUC值分別為0.736、0.682；采用Logistic二元回歸模型對(duì)E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)進(jìn)行擬合，返回預(yù)測(cè)概率logit(p)作為獨(dú)立檢驗(yàn)變量，得到聯(lián)合診斷CC的AUC值為0.844。見表3。

表3 E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)單獨(dú)與聯(lián)合診斷CC的價(jià)值

3 討論

病理活檢屬當(dāng)前診斷CC的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但操作復(fù)雜，而TCT檢測(cè)盡管可直接觀察宮頸細(xì)胞形態(tài)學(xué)以判定病變類型，但受主觀因素影響較大[2-4]。HPV持續(xù)性感染是CC發(fā)病的首要病因，其中E6/E7mRNA在CC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[2，3]。本研究發(fā)現(xiàn)，CC患者E6/E7mRNA表達(dá)量、TCT檢測(cè)分級(jí)高于單純HPV感染患者(P<0.05)，說(shuō)明E6/E7mRNA表達(dá)量與TCT檢測(cè)分級(jí)在CC病變變化規(guī)律相似，或可為臨床早期診斷CC提供參考。本研究還對(duì)不同CC分期患者E6/E7mRNA表達(dá)量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，隨CC分期升高，E6/E7mRNA表達(dá)量呈升高趨勢(shì)，分析主要是因E6/E7mRNA轉(zhuǎn)錄蛋白與多種蛋白質(zhì)結(jié)合可誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞凋亡并改變DNA表達(dá)途徑增加惡變風(fēng)險(xiǎn)，而E6/E7mRNA表達(dá)量越高此種惡變風(fēng)險(xiǎn)越高，同時(shí)意味著CC病情可能越嚴(yán)重。進(jìn)一步Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析顯示，E6/E7mRNA表達(dá)量與CC分期間呈正相關(guān)(P<0.05)，證實(shí)E6/E7mRNA表達(dá)量與CC進(jìn)展關(guān)系密切，可作為臨床診斷、病情評(píng)價(jià)的工具。但有研究顯示，E6/E7mRNA檢測(cè)診斷CC的敏感度、特異度尚不足80%，尤其是早期癌變患者易漏診[2，3]。本研究經(jīng)ROC分析顯示，E6/E7mRNA+TCT檢測(cè)診斷CC的AUC值為0.844，大于二者任一方法單獨(dú)診斷，對(duì)應(yīng)敏感度為92.76%，特異度為88.54，說(shuō)明聯(lián)合方案可提高對(duì)CC的診斷價(jià)值。

綜上可知，E6/E7mRNA+TCT檢測(cè)在CC診斷中具有較高價(jià)值，可為臨床診斷、完善治療方案提供參考。