一種基于微芯片電泳平臺(tái)的級(jí)聯(lián)化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大策略用于HIV-DNA的高靈敏檢測(cè)

鐘 潔，趙書(shū)林

(廣西師范大學(xué) 化學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，藥用資源化學(xué)與藥物分子工程省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 桂林 541004)

人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)即艾滋病病毒，它通過(guò)破壞輔助性的T淋巴細(xì)胞，并使體內(nèi)的多種免疫細(xì)胞受到損害，最終引起各種機(jī)會(huì)性感染和腫瘤的發(fā)生。艾滋病(ADIS)也稱為獲得性免疫缺陷綜合征，HIV不僅僅會(huì)侵蝕細(xì)胞，無(wú)視抗體甚至?xí)l(fā)癌變奪走人的生命，所以，艾滋病是目前全球范圍內(nèi)造成人類死亡的主要病因之一[1]。自HIV被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，它已經(jīng)吸引了越來(lái)越多的科學(xué)家致力于如何預(yù)防和治療艾滋病。

HIV感染可通過(guò)檢測(cè)病毒的抗體、抗原、核酸確定，其中HIV抗體或抗原檢測(cè)是最常用的檢測(cè)方法，它是診斷艾滋病病毒感染和艾滋病的主要指標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)項(xiàng)目。常見(jiàn)的HIV抗體或抗原檢測(cè)有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)[2-3]、免疫熒光分析[4-6]和ADIS測(cè)試紙[7-10]等。人感染HIV病毒后，會(huì)在體內(nèi)不斷復(fù)制并產(chǎn)生大量HIV病毒，該過(guò)程要先于體內(nèi)對(duì)HIV的識(shí)別和產(chǎn)生免疫反應(yīng)(抗體抗原的產(chǎn)生等)。因此，在3～12周的窗口期間很難通過(guò)上述方法準(zhǔn)確檢測(cè)HIV抗體或抗原，這將會(huì)導(dǎo)致病毒的傳播與惡化，使患者在不知道感染的情況下錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)間[11]。對(duì)于絕大多數(shù)HIV感染者，只要HIV病毒在體內(nèi)開(kāi)始復(fù)制(6～14 d)，血液中就會(huì)有相應(yīng)的病毒基因存在，通過(guò)核酸檢測(cè)方法即可檢出。與檢測(cè)HIV抗體、抗原相比，艾滋病病毒基因(HIV-DNA)可以更早地檢出[12]，從而較早獲得艾滋病的陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果。目前，用于HIV-DNA檢測(cè)的分析方法有電化學(xué)[13-15]和熒光[16-18]分析方法等，但由于HIV感染初期的含量非常低，這些方法難以準(zhǔn)確測(cè)定。為了更早更準(zhǔn)確獲得檢測(cè)結(jié)果，構(gòu)建靈敏、快速、有效的HIV-DNA檢測(cè)方法對(duì)于艾滋病早期診斷具有重要意義。

本研究基于微芯片電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)(MCE-CL)平臺(tái)，建立了一種高靈敏檢測(cè)HIV-DNA的新方法，與其它HIV-DNA檢測(cè)方法[19-21]相比，該方法具有更高的靈敏度，將其用于實(shí)際人血清中痕量HIV-DNA的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

實(shí)驗(yàn)所用DNA片段和標(biāo)記HRP的DNA序列，以及標(biāo)記FAM的DNA序列均為自行設(shè)計(jì)并由大連寶生物公司合成，合成的DNA均為HPLC純級(jí)，序列設(shè)計(jì)如下：HIV-DNA：5′-ACTGCTAGAGATTTTCCACAT-3′；P1：5′-ATGTGGAAAATCTCTGAGTCTTCCAGTGTGAAAA-3′；P2：5′-TTTTTTTTCACACTGGAAGACTC-3′；2-HRP：HRP-DNA-GAGTCTTCCAGTGTGTGGGTTTTGGATTTT-3′；FAM-DNA：5′-FAM-GAGTCTTCCAGTGTGTGGGTTTT GGATTTT-3′；T1：5′-ACTGCTAGAGATTTTCCAGAT-3′；T2：5′-ACTGCTAGAGATTTTCCTGAT-3′；T4：5′-ACTGCTAG AGTTTATCCTGAT-3′；Tn：5′-CAGTAGCTGTCGGCGATAAGC-3′。

MCE-CL檢測(cè)系統(tǒng)為實(shí)驗(yàn)室自制[22-23]，微流控芯片購(gòu)自大連拓微芯片技術(shù)有限公司，為玻璃/玻璃雙T型化學(xué)發(fā)光檢測(cè)芯片，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。芯片面積為8.5 cm×2.6 cm，通道頂部寬為70 μm(柱后氧化試劑傳輸通道和檢測(cè)通道為250 μm)，深度為25 μm，截面為弧形，有效分離通道長(zhǎng)為5.0 cm。S為樣品池，SW為樣品廢液池，S與SW兩池距離分離通道均為5 mm，B為電泳緩沖液池，距離雙T交叉點(diǎn)為5.0 mm，雙T型交叉處的間隔為60 μm。

圖1 玻璃/玻璃雙T型化學(xué)發(fā)光檢測(cè)芯片的構(gòu)造示意圖Fig.1 Structure of glass/glass double T chemiluminescence detection chipS:sample reservoir(樣品池),B:electrophoresis buffer solution reservoir(電泳緩沖液池),SW:sample waste reservoir(樣品廢液池),BW：buffer waste reservoir(緩沖廢液池)，R:post-column oxidizer reservoir(柱后氧化劑池)

1.2 溶液配制

DNA儲(chǔ)備液：將裝有DNA凍干粉的離心管置于離心機(jī)中，以12 000 r/min離心5 min。離心結(jié)束后將DNA鏈溶于1.0×10-2mol/L Tris-EDTA(pH 8.0)中制備終濃度為5.0×10-5mol/L的儲(chǔ)備液，于冰箱內(nèi)在4 ℃環(huán)境下靜置24 h后分裝到各小離心管中，于-20 ℃冷凍儲(chǔ)存。

Tris-HCl緩沖溶液：2.5×10-2mol/L Tris-HCl溶液(pH 7.4)，含2×10-2mol/L KCl及0.2 mol/L NaCl。

電泳緩沖溶液：3×10-2mol/L的Na2B4O7溶液(pH 9.3)，含2×10-2mol/L十二烷基硫酸鈉(SDS)和1.2×10-3mol/L魯米諾。

柱后氧化試劑溶液：3.5×10-2mol/L NaHCO3緩沖溶液(pH 9.5)，含0.12 mol/L H2O2和1.0×10-3mol/L 對(duì)碘苯酚(PIP)。

1.3 信號(hào)放大反應(yīng)

在反應(yīng)管中加入2 μL P1/P2復(fù)合物(1.0×10-7mol/L)、1 μL HIV-DNA、1 μL 10×Buffer4 和6 μL H2O，于37 ℃恒溫振蕩水浴鍋中反應(yīng)1 h，隨后加入2 μL HRP-DNA(2.0×10-7mol/L)和3 μL T7Exo(10 U/μL)。混合均勻后，將其于37 ℃恒溫振蕩水浴鍋中反應(yīng)1 h后繼續(xù)反應(yīng)80 min。酶切輔助靶標(biāo)雙循環(huán)反應(yīng)結(jié)束后，加入35 μL Tris-HCl緩沖溶液定容至50 μL，供MCE-CL分析。

1.4 血清樣品制備

正常人血清樣品取自桂林市第五人民醫(yī)院。檢測(cè)HIV-DNA時(shí)，將溶于水的HIV-DNA加至血清中作為陽(yáng)性樣品，然后按“1.3”方法進(jìn)行信號(hào)放大反應(yīng)。

1.5 微流控芯片電泳化學(xué)發(fā)光檢測(cè)

電泳芯片首次使用前依次用1 mol/L NaOH溶液和去離子水沖洗30 min，每次實(shí)驗(yàn)前需對(duì)芯片進(jìn)行活化處理，兩次電泳之間分別用0.1 mol/L NaOH溶液清洗8 min，去離子水清洗5 min。采用夾流方式進(jìn)樣，進(jìn)樣階段在S池上施加500 V電壓，SW池接地，B池和BW池分別施加250 V和400 V電壓，R池懸空，進(jìn)樣時(shí)間20 s；隨后進(jìn)入分離階段切換各路電壓，B池施加2 400 V作為分離電壓，S和SW各施加1 500 V電壓作為反拉電壓，而B(niǎo)W池接地，同時(shí)R池中施加500 V電壓。利用電壓驅(qū)動(dòng)進(jìn)樣，再通過(guò)電滲流的作用使得樣品組分在分離通道中以不同的速率遷移至Y型交叉處，與發(fā)光試劑混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，利用PMT收集化學(xué)發(fā)光信號(hào)，最終光信號(hào)經(jīng)光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換后由計(jì)算機(jī)記錄。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的設(shè)計(jì)與原理

基于微芯片電泳的在線分離功能，可在極其短時(shí)間內(nèi)有效分離待測(cè)物的特點(diǎn)，將HRP催化魯米諾-H2O2化學(xué)發(fā)光，PIP增敏和T7Exo輔助信號(hào)放大技術(shù)聯(lián)用，設(shè)計(jì)了一種基于MCE-CL平臺(tái)的T7Exo輔助雙循環(huán)化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大方法，原理如圖2所示。

首先將P1、P2兩條DNA單鏈按照1∶1的比例在95 ℃下加熱5 min，再自然冷卻至室溫形成穩(wěn)定的P1/P2雙鏈復(fù)合物。當(dāng)靶標(biāo)不存在時(shí)，由于P1/P2雙鏈復(fù)合物的熔鏈溫度設(shè)計(jì)高于P2與HRP-DNA雜交的熔鏈溫度，HRP-DNA不能將P1置換下來(lái)，因此，此時(shí)不能形成P2/HRP-DNA雙鏈，即使加入T7Exo酶后體系中也不存在HRP標(biāo)記的單核苷酸片段。但當(dāng)靶標(biāo)HIV-DNA存在時(shí)，可形成P1/P2/HIV-DNA三元復(fù)合物，此時(shí)P1的5′末端(綠色部分)形成平末端，加入T7Exo可以特異性地沿5′→3′方向降解P1/P2/HRP-DNA三元復(fù)合物雙鏈，釋放的HIV-DNA序列則重新與P1/P2雙鏈復(fù)合物雜交，T7Exo繼續(xù)降解切割三元復(fù)合物，并釋放P2單鏈(藍(lán)色部分)。P2單鏈與HRP-DNA可以部分雜交形成P2/HRP-DNA雙鏈，加入T7Exo后，探針DNA(HRP-DNA)鏈被降解，而與其雜交的P2序列重新與HRP-DNA雜交，T7Exo繼續(xù)降解。如此循環(huán)，靶標(biāo)HIV-DNA可產(chǎn)生大量信號(hào)分子，經(jīng)過(guò)雙循環(huán)過(guò)程可實(shí)現(xiàn)超靈敏的目標(biāo)信號(hào)放大。由于加入的HRP-DNA過(guò)量，因此整個(gè)循環(huán)反應(yīng)結(jié)束后，體系中存在大量HRP標(biāo)記的單核苷酸片段和過(guò)量的HRP-DNA，兩者均可催化H2O2氧化魯米諾反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。為實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)分子的信號(hào)放大，利用MCE-CL對(duì)HRP標(biāo)記的單核苷酸片段和過(guò)量的HRP-DNA進(jìn)行分離。由于兩者分子量不同，在電泳圖中產(chǎn)生一前一后兩個(gè)峰，根據(jù)HRP標(biāo)記的單核苷酸片段峰高的變化，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)HIV-DNA的定量分析。

為了驗(yàn)證方法原理的可行性，實(shí)驗(yàn)對(duì)3種含有不同組分的試樣進(jìn)行了MCE-CL分析。結(jié)果顯示：當(dāng)樣品溶液中不含靶標(biāo)HIV-DNA時(shí)，電泳圖中僅出現(xiàn)一個(gè)電泳峰。存在靶標(biāo)HIV-DNA時(shí)，電泳圖中出現(xiàn)了兩個(gè)電泳峰。隨著HIV-DNA濃度的增加，切割并釋放HRP標(biāo)記的單核苷酸片段的量也隨之增多，其HRP標(biāo)記的單核苷酸片段的相應(yīng)峰高也隨著增加。由此證明了出現(xiàn)在上游的峰為HRP標(biāo)記的單核苷酸片段的電泳峰，根據(jù)該峰的峰高或峰面積可實(shí)現(xiàn)HIV-DNA的定量分析。

2.2 凝膠電泳分析

為了進(jìn)一步考察方法可行性，證實(shí)P1/P2雙鏈復(fù)合物與HIV-DNA的結(jié)合以及加入T7 Exo后所引發(fā)的鏈剪切反應(yīng)，設(shè)計(jì)了相應(yīng)的凝膠電泳實(shí)驗(yàn)(圖3)。通道1和2中的樣品分別為HIV-DNA和HRP-DNA。由于HRP標(biāo)記DNA改變了DNA的凝膠遷移速率，因此通道2出現(xiàn)了HRP-DNA停留在點(diǎn)樣孔的拖尾色帶。通道3中樣品為P1/P2的反應(yīng)產(chǎn)物，亮度較亮是因?yàn)閮烧呓Y(jié)合形成新的復(fù)合物，而熒光染料SYBR Green I與雙鏈DNA的親和力非常高導(dǎo)致染色效果明顯。由于HRP分子量比P1/P2雙鏈復(fù)合物大，條帶移動(dòng)較慢，所以HRP-DNA的條帶位置比該復(fù)合物滯后。通道4中的樣品為P1/P2復(fù)合物和HRP-DNA的混合溶液，條帶的移動(dòng)情況與通道3基本一致，表明HRP-DNA并不能把P1從P1/P2中置換出來(lái)。通道5中的樣品為P1/P2/HIV-DNA復(fù)合物，發(fā)現(xiàn)其條帶位置稍微后移。由于兩者分子質(zhì)量相差不大，所以條帶的位置和亮度變化并不大。通道6中的樣品為T(mén)7Exo、HRP-DNA和P1/P2雙鏈復(fù)合物的混合溶液，由于HRP-DNA滯留在點(diǎn)樣孔，未觀察到明顯條帶，P1/P2雙鏈復(fù)合物條帶仍然存在說(shuō)明T7Exo不能與P1/P2復(fù)合物作用。通道7中為HIV-DNA存在的情況下，T7Exo、HRP-DNA、P1/P2 和HIV-DNA的反應(yīng)混合物的條帶，發(fā)現(xiàn)T7Exo不能與P1/P2作用，而能與P1/P2/HIV-DNA復(fù)合物作用，即HIV-DNA觸發(fā)了整個(gè)循環(huán)放大反應(yīng)，但反應(yīng)后的HIV-DNA與P1都不能呈現(xiàn)明顯的色帶。

圖3 瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.3 Agarose gel electrophoresis1.HIV-DNA;2.HRP-DNA;3.P1/P2 double-stranded complex(P1/P2雙鏈復(fù)合物);4.HRP-DNA+P1/P2 double-stranded complex;5.P1/P2 double-stranded complex+HIV-DNA;6.T7Exo+HRP-DNA+P1/P2 double-stranded complex；7.T7Exo+HRP-DNA+P1/P2 double-stranded complex+HIV-DNA；8.HIV-DNA；9.FAM-DNA；10.P1/P2 double-stranded complex；11.FAM-DNA+P1/P2 double-stranded complex；12.P1/P2 double-stranded complex+HIV-DNA；13.T7Exo+HRP-DNA+P1/P2 double-stranded complex；14.T7Exo+HRP-DNA+P1/P2 double-stranded complex+HIV-DNA;concentrations of HIV-DNA,HRP-DNA,P1,P2 and AM-DNA were 3.0×10-6 mol/L,the amount of T7 Exo was 80 U(HIV-DNA、HRP-DNA、P1、P2和FAM-DNA濃度均為3.0×10-6 mol/L,T7 Exo用量為80 U)

為進(jìn)一步驗(yàn)證整個(gè)體系的鏈結(jié)合和酶切循環(huán)情況，將HRP-DNA的HRP換成FAM，即FAM-DNA。通道8中的樣品為HIV-DNA，通道9中的樣品為FAM-DNA，兩通道的電泳結(jié)果與通道1相同，均未呈現(xiàn)明顯的色帶。通道10為P1/P2雙鏈復(fù)合物，通道11為FAM-DNA和P1/P2雙鏈復(fù)合物的混合樣品，兩者的電泳結(jié)果基本相同，均為P1/P2雙鏈復(fù)合物的色帶。通道12為P1/P2雙鏈復(fù)合物與HIV-DNA的混合樣品，由于形成了P1/P2/HIV-DNA復(fù)合物，導(dǎo)致色帶位置稍微后移。通道13為T(mén)7Exo、FAM-DNA和P1/P2的混合物，電泳圖中也僅呈現(xiàn)P1/P2雙鏈復(fù)合物的條帶，說(shuō)明T7Exo不與P1/P2復(fù)合物作用。這是由于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的P1/P2復(fù)合物中P2的5′端是伸出的末端，不能被T7Exo切割。通道14為HIV-DNA、T7Exo、FAM-DNA、P1/P2和HIV-DNA混合物，通道中未呈現(xiàn)明顯的色帶說(shuō)明T7Exo不與P1/P2復(fù)合物作用，但可與P1/P2/HIV-DNA復(fù)合物作用，即HIV-DNA觸發(fā)了整個(gè)循環(huán)放大反應(yīng)，而反應(yīng)后的HIV-DNA與P1均未見(jiàn)明顯的色帶。凝膠電泳分析結(jié)果進(jìn)一步證明了本研究方法原理的可行性。

2.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

為了實(shí)現(xiàn)基于MCE-CL平臺(tái)對(duì)HIV-DNA的高靈敏準(zhǔn)確定量，對(duì)影響電泳分離和化學(xué)發(fā)光的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，電泳分離電壓對(duì)于MCE的分離影響較大，分離電壓過(guò)大時(shí)，會(huì)產(chǎn)生焦耳熱，溶液出現(xiàn)大量氣泡而呈現(xiàn)干擾峰，且基線不平穩(wěn)。但如果電壓過(guò)小，分離時(shí)間變長(zhǎng)，且電泳峰展寬嚴(yán)重。為獲得最佳的分離度(Rs)，同時(shí)避免產(chǎn)生基線噪音和峰展寬及干擾峰等現(xiàn)象，優(yōu)化后的分離電壓為2 400 V。

羥丙基甲基纖維素(HPMC)、吐溫-80和SDS等可作為添加劑改善MCE的分離效果。在本實(shí)驗(yàn)中，雖然HPMC分離效果更佳，但因HPMC粘度較大，清洗不完全易堵塞芯片通道，而使用吐溫-80作為添加劑時(shí)，出現(xiàn)出峰時(shí)間不穩(wěn)定的現(xiàn)象，因此采用SDS為添加劑以改善分離效果，優(yōu)化的SDS濃度為2×10-2mol/L。另外，采用硼砂溶液為電泳緩沖劑溶液時(shí)，其濃度和pH值分別為3×10-2mol/L和9.3時(shí)，可獲得最佳分離效果。

實(shí)驗(yàn)還考察了化學(xué)發(fā)光反應(yīng)和信號(hào)放大反應(yīng)的反應(yīng)條件。結(jié)果表明，在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，魯米諾、H2O2和PIP的濃度分別為1.2×10-3、0.12、1.0×10-3mol/L，柱后氧化劑溶液pH值為9.5時(shí)，體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度最大。在信號(hào)放大反應(yīng)中，HRP-DNA 的濃度和T7Exo的用量分別為8×10-8mol/L和30 U，反應(yīng)時(shí)間為140 min時(shí)，放大反應(yīng)的效果最好，靈敏度最高。

2.4 HIV-DNA檢測(cè)的校準(zhǔn)曲線、線性范圍及靈敏度

優(yōu)化條件下對(duì)一系列不同濃度的HIV-DNA標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，HIV-DNA的信號(hào)峰強(qiáng)度(Y)與HIV-DNA濃度的對(duì)數(shù)值(X)在1.0×10-14～5.0×10-9mol/L范圍內(nèi)呈良好的線性，線性方程為Y=2.191 5X+12.693 2，相關(guān)系數(shù)(r2)為0.997 5。以3倍信噪比(S/N=3)計(jì)算得HIV-DNA的檢出限(LOD)為1.6 ×10-15mol/L。

2.5 特異性考察

分別對(duì)單堿基錯(cuò)配的DNA(T1)、雙堿基錯(cuò)配的DNA(T2)、四堿基錯(cuò)配的DNA(T4)、全部堿基錯(cuò)配的DNA(Tn)(濃度均為5×10-10mol/L)和靶標(biāo)HIV-DNA(8×10-8mol/L)序列進(jìn)行檢測(cè)，以評(píng)估方法的選擇性。結(jié)果顯示，僅靶標(biāo)HIV-DNA存在時(shí)，HRP標(biāo)記的單核苷酸峰高(化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度)才顯著增強(qiáng)，而在相同實(shí)驗(yàn)條件下，全部堿基錯(cuò)配的DNA未能引起HRP標(biāo)記單核苷酸的峰高發(fā)生明顯變化，其余堿基錯(cuò)配DNA的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度隨錯(cuò)配堿基數(shù)的增多而降低，表明本方法具有較高的特異性。

2.6 血清樣品分析

采用本方法對(duì)采集自桂林市第五醫(yī)院的正常人血清樣品進(jìn)行HIV-DNA測(cè)定，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)(圖4)。結(jié)果顯示，正常人血清樣品的電泳圖(曲線a)中僅出現(xiàn)一個(gè)電泳峰，表明樣品中不含有HIV-DNA；添加一定量HIV-DNA后，電泳圖中出現(xiàn)一個(gè)新的信號(hào)峰(曲線b)，且隨著HIV-DNA濃度的增大而增高(曲線c)。在0.10、0.25、1.0、10(×10-12mol/L) 4個(gè)加標(biāo)濃度下，HIV-DNA的回收率為93.0%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.50%～3.7%，表明本方法具有良好的準(zhǔn)確度，具有應(yīng)用于艾滋病早期診斷的潛力。

圖4 正常人血清中HIV-DNA加標(biāo)測(cè)定的電泳圖Fig.4 Electropherograms for the detection of added HIV-DNA in normal human serum1:HRP-DNA;2:electrophoretic peak for HRP labeled single nucleotide fragment(HRP標(biāo)記的單核苷酸片段的電泳峰);a:electropherogram for normal human serum(正常人血清電泳圖);b:electropherogram for normal human serum added 1×10-13 mol/L HIV-DNA(正常人血清添加1×10-13 mol/L HIV-DNA電泳圖);c:electropherogram for normal human serum added 1×10-11 mol/L HIV-DNA(正常人血清加入1×10-11 mol/L HIV-DNA電泳圖)

3 結(jié) 論

本研究建立了一種基于微芯片電泳平臺(tái)的級(jí)聯(lián)化學(xué)發(fā)光信號(hào)放大策略用于HIV-DNA高靈敏檢測(cè)的分析方法。通過(guò)對(duì)靶標(biāo)HIV-DNA的信號(hào)進(jìn)行雙循環(huán)放大，實(shí)現(xiàn)了對(duì)HIV-DNA的超靈敏檢測(cè)。將信號(hào)放大反應(yīng)體系引入MCE-CL平臺(tái)可在短時(shí)間(60 s)內(nèi)對(duì)反應(yīng)后的混合物進(jìn)行快速有效分離。本方法具有儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、靈敏度高、特異性好和操作方便等優(yōu)點(diǎn)，可用于復(fù)雜生物樣品中微量HIV-DNA的檢測(cè)，為發(fā)展高靈敏度的MCE-CL方法提供了一種新途徑，并具有應(yīng)用于艾滋病早期診斷的潛力。