• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    熱激聯(lián)合牛蒡抗熱保護(hù)劑對(duì)益生菌奶粉中益生菌噴霧干燥活性的影響

    2021-07-01 09:59:24崔莉李瑩馮進(jìn)柴智
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年10期
    關(guān)鍵詞:牛蒡奶粉益生菌

    崔莉 李瑩 馮進(jìn) 柴智

    摘要:提高益生菌抗熱性的研究一直是工業(yè)化噴霧干燥生產(chǎn)益生菌奶粉的熱點(diǎn)與難點(diǎn),研究益生菌 FM-LP-4 的熱激預(yù)處理?xiàng)l件,優(yōu)化菌體經(jīng)熱激預(yù)處理后使用牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑的噴霧干燥工藝。結(jié)果表明,適宜進(jìn)行熱激的益生菌培養(yǎng)時(shí)間段為10~11 h,最適熱激溫度為55 ℃,熱激時(shí)間為25 min。噴霧干燥的最優(yōu)工藝為:出口溫度80 ℃,進(jìn)口溫度170 ℃,進(jìn)料速率0.8 L/h,此時(shí)活菌數(shù)為4.64×109 CFU/mL。熱激菌體加牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑經(jīng)優(yōu)化的噴霧干燥工藝獲得益生菌奶粉,其中益生菌活菌數(shù)比對(duì)照提高約1個(gè)數(shù)量級(jí)。

    關(guān)鍵詞:牛蒡;益生菌;熱激;噴霧干燥;奶粉

    中圖分類(lèi)號(hào):TS252.51 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A ?文章編號(hào):1002-1302(2021)10-0166-04

    中國(guó)已經(jīng)趕超日本、美國(guó)成為全球第一大奶粉消費(fèi)國(guó)。隨著人們營(yíng)養(yǎng)保健意識(shí)的不斷提高和消費(fèi)觀念的轉(zhuǎn)變,具有營(yíng)養(yǎng)保健功能的高端乳制品日益成為新的消費(fèi)引擎。益生菌奶粉為含有益生菌的奶粉,具有改善人體腸道宿主環(huán)境的作用。目前,我國(guó)市場(chǎng)上高檔的功能性益生菌乳制品已出現(xiàn),然而,大多以發(fā)酵乳的形式出現(xiàn),需冷鏈運(yùn)輸,且保質(zhì)期短。功能性益生菌奶粉的研制,突破了運(yùn)輸壁壘,擴(kuò)大消費(fèi)區(qū)域,具有廣闊的市場(chǎng)化前景。

    益生菌奶粉常采用將奶粉和凍干益生菌粉混合的方法制備,冷凍干燥的高成本是其瓶頸。若能采用噴霧干燥1次制備益生菌奶粉,則有望大幅降低成本。噴霧干燥過(guò)程對(duì)益生菌帶來(lái)脫水、氧化和熱損傷,造成活菌數(shù)大量下降。有學(xué)者提出,多種方法來(lái)提升噴霧干燥益生菌的活性,主要有加強(qiáng)對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的保護(hù)、提升益生菌的外界應(yīng)激抗性,優(yōu)化噴霧干燥參數(shù),篩選應(yīng)用抗熱保護(hù)劑等[1]。益生菌在外界應(yīng)激下會(huì)生成應(yīng)激蛋白用于修復(fù)受損細(xì)胞,提升菌體應(yīng)激抗性。熱激處理是利用上述特性,通過(guò)模擬外界應(yīng)激條件以增加菌體對(duì)應(yīng)激環(huán)境的耐受能力,是一種較常用的提升菌體耐熱能力的途徑。

    噴霧干燥抗熱保護(hù)劑的篩選已成為相關(guān)學(xué)者關(guān)注熱點(diǎn),合適的保護(hù)劑能有效提高益生菌在干燥、儲(chǔ)藏和體內(nèi)消化過(guò)程等嚴(yán)苛環(huán)境下的存活率。Chaikham等研究發(fā)現(xiàn),益生元(菊糖、木糖和低聚果糖等)對(duì)益生菌的耐熱性有保護(hù)作用[2]。牛蒡塊根富含菊糖、酚酸、黃酮、牛蒡苷及多種維生素等營(yíng)養(yǎng)功能成分?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明,牛蒡具有抗氧化、抑菌、抗疲勞、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)肝臟[2-3]、促進(jìn)益生菌生長(zhǎng)等多種功效[4-5]。雷張騰將菊糖作為保拉迪酵母的復(fù)合凍干保護(hù)劑成分,并認(rèn)為菊糖中的羥基通過(guò)與細(xì)胞膜磷脂和蛋白質(zhì)以氫鍵結(jié)合,對(duì)菌體起到保護(hù)作用[6]。崔莉等通過(guò)單因素和正交設(shè)計(jì)優(yōu)化獲得FM-LP-4牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑配方(豐縣牛蒡粉2.0%、葡萄糖4%、沛縣牛蒡粉2.0%),菌體在復(fù)合保護(hù)劑保護(hù)下經(jīng)75 ℃熱處理10 min后活菌數(shù)為2.12×106 CFU/mL[7]。本研究在獲得保護(hù)劑配方的基礎(chǔ)上,探討熱激處理和噴霧干燥工藝參數(shù)優(yōu)化對(duì)益生菌奶粉中益生菌FM-LP-4的耐熱保護(hù)作用。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    副干酪乳桿菌FM-LP-4為研究室保藏。試驗(yàn)時(shí)間為2019年7月12日至8月17日。明膠,用PBS溶解后滅菌備用,使用前水浴加熱溶解。蔗糖和甘油:需經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾。陸橋MRS肉湯培養(yǎng)基。MRS固體培養(yǎng)基,在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入1.5%瓊脂。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SW-CJ-ID 型凈化工作臺(tái),蘇州凈化設(shè)備有限公司;上海第三分析儀器廠;高壓蒸汽滅菌鍋,上海申安醫(yī)療器械廠;H1850R型高速冷凍離心機(jī),長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋,國(guó)華電器有限公司;HYG-A全溫?fù)u瓶柜,太倉(cāng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠;FW100高速萬(wàn)能打粉機(jī),天津市泰斯特儀器有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌種活化及擴(kuò)大培養(yǎng) 將副干酪乳桿菌 FM-LP-4 凍干菌種接入液體培養(yǎng)基中,34 ℃振蕩培養(yǎng)24 h,活化2~3次?;罨玫姆N子液以5%的接種量接種于MRS 液體培養(yǎng)基中,同樣條件擴(kuò)大培養(yǎng)后菌液離心取菌泥,用無(wú)菌生理鹽水或牛奶沖洗,制成活菌數(shù)為1010 CFU/mL的菌懸液。

    1.3.2 活菌數(shù)測(cè)定 按照GB 4789.35—2010,采用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法。

    1.3.3 牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑的制備 牛蒡超微粉的制備:將豐縣和沛縣牛蒡于60 ℃下干燥4 h,至水分6%以下,經(jīng)粉碎機(jī)超低溫粉碎,過(guò)325目篩得牛蒡超微粉。牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑配方為豐縣牛蒡粉2.0%、葡萄糖4%、沛縣牛蒡粉2.0%。

    1.3.4 抗氧化能力的測(cè)定

    1.3.4.1 DPPH自由基清除能力的測(cè)定 參考Shen 等的方法[8],略做改進(jìn)。1 mL經(jīng)熱激預(yù)處理菌液溶解到9 mL 95% 乙醇溶液,取2 mL樣品混合溶液加 2 mL 0.16 mmol/L DPPH 溶液,25 ℃ 水浴加熱 0 min,在517 nm處測(cè)試樣吸光度(Di),用蒸餾水代替上述體系中樣品混合溶液測(cè)得空白吸光度(D0),用 95% 乙醇代替上述體系中 DPPH 溶液。測(cè)得樣品本底吸光度(Dj),清除率=1-(Di-Dj)/D0×100%,其中D0取0.552。

    1.3.4.2 OH自由基清除能力的測(cè)定 參考Shen等的方法[8],略做改進(jìn)。1 mL經(jīng)熱激預(yù)處理菌液溶解到9 mL 95%乙醇溶液,取4 mL樣品混合溶液加入8.8 mmol/L H2O2、9 mmol/L FeSO4 和 9 mmol/L水楊酸各 0.5 mL,混勻,37 ℃水浴加熱30 min,在 510 nm 處測(cè)定吸光度(Di′),用蒸餾水代替體系中樣品混合溶液,測(cè)得空白吸光度(D0′),用蒸餾水替代HO溶液,測(cè)得樣品本底吸光度(Dj′),清除率=1-(Di′-Dj′)/D0′×100%,其中D0′取0.602。

    1.3.4.3 Fe3+還原力的測(cè)定[9] 1 mL經(jīng)熱激預(yù)處理菌液溶解到9 mL 95% 乙醇溶液。取2 mL樣品混合溶液加入10 g/L鐵氰化鉀溶液和 0.2 mol/L 磷酸鹽緩沖液(pH值6.6)各2 mL,于50 ℃ 保溫 20 min,加入2 mL 1 g/mL 三氯乙酸溶液,混勻,3 000 r/min 離心10 min,取 2 mL 上清液,加入 2 mL 蒸餾水和 0.4 mL 1 g/L 三氯化鐵溶液,室溫反應(yīng)10 min,于700 nm 處測(cè)定吸光度。

    1.3.5 熱激條件

    1.3.5.1 熱激菌體培養(yǎng)時(shí)間的選擇 根據(jù)FM-LP-4生長(zhǎng)曲線,選擇對(duì)數(shù)期菌數(shù)較多的時(shí)間段作為熱激菌體培養(yǎng)最佳時(shí)間段。

    1.3.5.2 耐熱曲線 選擇45、50、55、60 ℃為熱處理溫度,將益生菌液在上述溫度下水浴,每隔5 min測(cè)定活菌數(shù),以熱處理時(shí)間為橫坐標(biāo)、活菌數(shù)為縱坐標(biāo)繪制其耐熱曲線。

    1.3.5.3 不同熱激條件對(duì)菌體抗氧化活性的影響 在選定的熱激條件下對(duì)FM-LP-4熱激處理,測(cè)定抗氧化活性變化,選擇菌體抗氧化活性較高的熱激條件。

    1.3.6 噴霧干燥條件對(duì)益生菌奶粉中益生菌活菌數(shù)的測(cè)定的影響 經(jīng)熱激預(yù)處理菌液離心得菌泥,溶解于不同濃度含牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑無(wú)菌牛奶中,采用正交試驗(yàn)L9(34)對(duì)出口溫度(A)、進(jìn)口溫度(B)、進(jìn)料速率(C)3項(xiàng)噴霧干燥工藝參數(shù)對(duì)益生菌奶粉中益生菌活菌數(shù)的測(cè)定的影響進(jìn)行檢測(cè),正交試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,以篩選出最佳噴霧干燥條件。

    1.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 用Microsoft Excel 1997—2003進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和作圖分析,采用SAS V8統(tǒng)計(jì)進(jìn)行方差分析,并應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行樣品間的顯著性差異分析(P<0.05)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 FM-LP-4亞致死熱激條件確定

    2.1.1 最佳耐熱時(shí)間的選擇 從圖1可以看出,10~12 h 的FM-LP-4生長(zhǎng)速率最快,此時(shí)LA達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,并在培養(yǎng)12 h的時(shí)候達(dá)到了菌數(shù)的最大值,Corcoran等認(rèn)為,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體較穩(wěn)定生長(zhǎng)期的菌體可塑性強(qiáng),應(yīng)對(duì)脅迫情況提升抗逆性好,可以很快調(diào)整體內(nèi)代謝途徑以適應(yīng)不利環(huán)境[10-11]。張書(shū)猛等研究比較嗜酸乳桿菌在不同菌體生長(zhǎng)期的耐熱性,提出其在穩(wěn)定期即培養(yǎng)11 h時(shí),抗熱性能較優(yōu)[12]。結(jié)合相關(guān)研究,選擇10~12 h 為熱激菌體培養(yǎng)最佳時(shí)間段。

    2.1.2 FM-LP-4耐熱曲線 從圖2可以看出,F(xiàn)M-LP-4在60 ℃條件下處理15 min基本失活。在45、50、55 ℃條件下,處理25 min時(shí),菌數(shù)均有較明顯的下降,但依然保持較好的存活率。胡榴榴研究發(fā)現(xiàn),干酪乳桿菌1.12.8 在50 ℃熱處理25 min后,活菌數(shù)下降不到1個(gè)數(shù)量級(jí);60 ℃熱處理 25 min,菌體數(shù)量下降了約1個(gè)數(shù)量級(jí)[13],因此確定60 ℃ 25 min 為其熱激處理?xiàng)l件。

    L. plantarum 299v在噴霧干燥前經(jīng)過(guò)49.5 ℃的亞致死溫度處理30、60 min于室溫下貯藏180 d,其存活性顯著增強(qiáng),并推測(cè)熱應(yīng)激引起的保護(hù)作用有可能是生成了熱休克蛋白[14]。L.acidophilus以 50 ℃、L. rhamnosus以 52.5 ℃亞致死預(yù)處理12 min后,均能夠耐受隨后的92 ℃的噴霧干燥出口溫度,而通常乳酸菌能夠耐受的溫度為 85~90 ℃[15]。經(jīng)過(guò)亞致死溫度(52 ℃,15 min)預(yù)處理后再?lài)婌F干燥將使L. casei Nad、L. plantarum 8329的菌數(shù)下降0.16、0.49 lg(CFU/mL),而未經(jīng)預(yù)處理直接噴霧干燥其菌數(shù)下降0.85、0.95 lg(CFU/mL)[16]。

    2.1.3 不同熱激溫度對(duì)抗氧化活性的影響 從表2可以看出,F(xiàn)M-LP-4在55 ℃條件下處理25 min時(shí),各項(xiàng)抗氧化指標(biāo)均高于50 ℃。張書(shū)猛等選取40、45、50、55、60 ℃進(jìn)行30 min熱激處理,研究其熱激后的菌數(shù)變化,發(fā)現(xiàn)在45 ℃時(shí)菌體具有較高的活菌數(shù),存活率也較高,并且具有較好的發(fā)酵性能[12],所以選擇45 ℃作為熱激溫度。從圖2、表2可以看出,F(xiàn)M-LP-4在55 ℃條件下的存活率較高,而且抗氧化活性最高,推測(cè)其經(jīng)熱激休克后產(chǎn)生了熱適應(yīng),故選擇55 ℃處理25 min為最佳熱激條件。

    2.2 含F(xiàn)M-LP-4 奶粉的噴霧干燥工藝確定

    2.2.1 噴霧干燥正交試驗(yàn) 含F(xiàn)M-LP-4 奶粉的噴霧干燥工藝參數(shù)L9(34)正交試驗(yàn)因素水平取值及結(jié)果見(jiàn)表3。經(jīng)直觀分析比較3個(gè)因素的極差R值可知各因素對(duì)噴霧干燥后菌存活的影響程度為A>B>C,由各因素的均值大小可知最佳組合為A1B3C3,即噴霧干燥工藝參數(shù)為:出口溫度 80 ℃,進(jìn)口溫度170 ℃,進(jìn)料速率0.8 L/h。

    2.3 熱激、牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑和噴霧干燥工藝優(yōu)化及聯(lián)合對(duì)益生菌抗熱性能的影響

    從表4可知,牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑可以提升益生菌的存活率近2倍,熱激聯(lián)合牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)劑則可以將益生菌的活菌數(shù)提高約1個(gè)數(shù)量級(jí)。

    3 結(jié)論

    FM-LP-4適宜進(jìn)行熱激的培養(yǎng)時(shí)間段為 10~11 h,最適熱激溫度為55 ℃,熱激時(shí)間為 25 min。含F(xiàn)M-LP-4益生菌奶粉噴霧干燥的最優(yōu)工藝為:出口溫度80 ℃,進(jìn)口溫度170 ℃,進(jìn)料速率0.8 L/h,熱激聯(lián)合牛蒡復(fù)合抗熱保護(hù)處理益生菌經(jīng)噴霧干燥后活菌數(shù)比對(duì)照提高約1個(gè)數(shù)量級(jí)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]傅 楠,陳曉東. 益生菌在噴霧干燥過(guò)程中的活性變化與保護(hù)策略[J]. 化工進(jìn)展,2018,37(5):1633-1645.

    [2]Chaikham P,Kemsawasd V,Seesuriyachan P. Spray drying probiotics along with maoluang juice plus Tiliacora triandra gum for exposure to the in vitro gastrointestinal environments[J]. LWT,2017,78:31-40.

    [3]Irene A R,Ethel E P,Genovese D B,et al. In vitro prebiotic activity of inulin-rich carbohydrates extracted from Jerusalem artichoke (Helianthus tuberosus L.) tubers at different storage times by Lactobacillus paracasei[J]. Food Research International,2014,62:59-65.

    [4]Velázquez-Martínez J R,González-Cervantes R M,Hernández-Gallegos M,et al. Prebiotic potential of agave angustifolia Haw fructans with different degrees of polymerization[J]. Molecules,2014,19(8):12660-12675.

    [5]Moro T M A,Celegatti C M,Pereira A P A,et al. Use of burdock root flour as a prebiotic ingredient in cookies[J]. LWT,2018,90:540-546.

    [6]雷張騰. 保拉迪酵母菌粉的制備及穩(wěn)定性研究[D]. 西安:陜西科技大學(xué),2017:17-18.

    [7]崔 莉,潘 超,張曉曉,等. 益生菌抗熱牛蒡復(fù)合保護(hù)劑篩選優(yōu)化研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2020,48(18):211-214.

    [8]Shen Y,Zhang H,Cheng L,et al. In vitro and in vivo antioxidant activity of polyphenols extracted from black highland barley[J]. Food Chemistry,2016,194:1003-1012.

    [9]Benzie I F,Strain J J. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of “antioxidant power”:the FRAP assay[J]. Analytical Biochemistry,1996,239(1):70-76.

    [10]Corcoran B M,Ross R P,F(xiàn)itzgerald G F,et al. Enhanced survival of GroESL-overproducing Lactobacillus paracasei NFBC 338 under stressful conditions induced by drying[J]. Applied and Environmental Microbiology,2006,72(7):5104-5107.

    [11]Corcoran B M,Ross R P,F(xiàn)itzgerald G F,et al. Comparative survival of probiotic lactobacilli spray-dried in the presence of prebiotic substances[J]. Journal of Applied Microbiology,2004,96(5):1024-1039.

    [12]張書(shū)猛,呂嘉櫪,侯 蓓,等. 熱激處理對(duì)嗜酸乳桿菌耐熱性的影響[J]. 中國(guó)乳品工業(yè),2011,39(9):28-30.

    [13]胡榴榴. 干酪乳桿菌高密度培養(yǎng)及干燥工藝的研究[D]. 揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2014:52-53.

    [14]Barbosa J,Borges S,Teixeira P. Influence of sub-lethal stresses on the survival of lactic acid bacteria after spray-drying in orange juice[J]. Food Microbiology,2015,52:77-83.

    [15]Anekella K,Orsat V. Optimization of microencapsulation of probiotics in raspberry juice by spray drying[J]. LWT,2013,50(1):17-24.

    [16]Paéz R,Lavari L,Vinderola G,et al. Effect of heat treatment and spray drying on lactobacilli viability and resistance to simulated gastrointestinal digestion[J]. Food Research International,2012,48(2):748-754.

    猜你喜歡
    牛蒡奶粉益生菌
    牛蒡花開(kāi)
    益生元和益生菌促進(jìn)豬生長(zhǎng)和健康
    奶粉危機(jī)
    益生菌別貪多
    幸福(2017年18期)2018-01-03 06:34:45
    神奇的小小腸道益生菌
    妹妹的奶粉錢(qián)
    中國(guó)益生菌網(wǎng)
    牛蒡子中牛蒡苷測(cè)定方法的優(yōu)化
    中成藥(2016年4期)2016-05-17 06:07:49
    買(mǎi)牛蒡,挑一元硬幣粗的
    中老年健康(2014年6期)2014-05-30 22:10:35
    洋奶粉的罪與罰
    久久精品aⅴ一区二区三区四区| 丝袜美腿诱惑在线| 天天添夜夜摸| tocl精华| 国产成人av激情在线播放| www日本在线高清视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 十八禁网站免费在线| av网站免费在线观看视频| 热99re8久久精品国产| 久久久久久久久免费视频了| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲视频免费观看视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 十八禁人妻一区二区| aaaaa片日本免费| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久香蕉精品热| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩欧美免费精品| 777米奇影视久久| 欧美乱色亚洲激情| 国产xxxxx性猛交| 亚洲av电影在线进入| 免费在线观看黄色视频的| av天堂久久9| 亚洲一区二区三区不卡视频| 在线观看一区二区三区激情| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人国语在线视频| 国产亚洲精品一区二区www | 91大片在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 免费少妇av软件| 精品国产乱码久久久久久男人| 很黄的视频免费| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产一区在线观看成人免费| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲 国产 在线| avwww免费| 天堂动漫精品| 91av网站免费观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 成人国语在线视频| 国产单亲对白刺激| 黄片小视频在线播放| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 操出白浆在线播放| 男人操女人黄网站| 黑人猛操日本美女一级片| 丝袜美足系列| 亚洲成人手机| 国产精品综合久久久久久久免费 | 久久香蕉国产精品| 成在线人永久免费视频| 久久香蕉国产精品| 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人精品无人区| 久9热在线精品视频| aaaaa片日本免费| 国产高清videossex| 免费在线观看日本一区| 丝袜美足系列| 黄色成人免费大全| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产av一区二区精品久久| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲片人在线观看| 免费在线观看完整版高清| 大香蕉久久网| 交换朋友夫妻互换小说| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜91福利影院| 国产精品1区2区在线观看. | 国产淫语在线视频| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲av日韩在线播放| 1024视频免费在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 色尼玛亚洲综合影院| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲成国产人片在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 无遮挡黄片免费观看| 国产精品一区二区在线观看99| 18在线观看网站| 在线av久久热| 窝窝影院91人妻| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产亚洲精品第一综合不卡| 91成年电影在线观看| 男女免费视频国产| 麻豆国产av国片精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 美国免费a级毛片| 身体一侧抽搐| av中文乱码字幕在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人精品一区二区免费| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲,欧美精品.| 最近最新中文字幕大全免费视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 国产在线一区二区三区精| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久人妻熟女aⅴ| av中文乱码字幕在线| 一a级毛片在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 69精品国产乱码久久久| 看片在线看免费视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品一区二区三卡| 大型av网站在线播放| 欧美黄色淫秽网站| 精品国产国语对白av| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩欧美免费精品| 午夜久久久在线观看| 高清欧美精品videossex| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产精品影院久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产片内射在线| 久热爱精品视频在线9| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 天天操日日干夜夜撸| 成人三级做爰电影| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲av美国av| 女警被强在线播放| 超碰成人久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 一级作爱视频免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲专区国产一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 精品午夜福利视频在线观看一区| a级毛片在线看网站| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲七黄色美女视频| 免费观看a级毛片全部| av国产精品久久久久影院| 国产99白浆流出| 老汉色av国产亚洲站长工具| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 热re99久久国产66热| 国产精品影院久久| 一级片免费观看大全| 黄色丝袜av网址大全| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 麻豆国产av国片精品| 在线观看免费高清a一片| 午夜免费成人在线视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 天堂√8在线中文| 亚洲七黄色美女视频| 两个人看的免费小视频| 黄频高清免费视频| 午夜免费成人在线视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产不卡一卡二| 精品福利永久在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 女人精品久久久久毛片| 黄色成人免费大全| 女性生殖器流出的白浆| 人妻久久中文字幕网| 激情在线观看视频在线高清 | 一区二区三区国产精品乱码| avwww免费| 国产黄色免费在线视频| 美女福利国产在线| 精品一品国产午夜福利视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 热re99久久国产66热| 国产精品久久久av美女十八| 久久性视频一级片| 一本综合久久免费| 亚洲精品一二三| 麻豆国产av国片精品| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 最近最新免费中文字幕在线| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久久国内视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 午夜免费成人在线视频| 最新的欧美精品一区二区| 91老司机精品| 国产又爽黄色视频| 日韩有码中文字幕| 欧美不卡视频在线免费观看 | 在线观看免费日韩欧美大片| 成人永久免费在线观看视频| 99热只有精品国产| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产亚洲av高清不卡| 国产三级黄色录像| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产精品久久视频播放| 男男h啪啪无遮挡| 日本欧美视频一区| 成人黄色视频免费在线看| 91在线观看av| 国产高清激情床上av| tocl精华| www日本在线高清视频| av在线播放免费不卡| 青草久久国产| 超碰成人久久| 宅男免费午夜| 日本wwww免费看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲精品一二三| 国产麻豆69| 亚洲色图av天堂| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 757午夜福利合集在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线 | 精品国产亚洲在线| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 悠悠久久av| 51午夜福利影视在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲国产精品sss在线观看 | 狂野欧美激情性xxxx| 国产视频一区二区在线看| 90打野战视频偷拍视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 18禁观看日本| 亚洲精品自拍成人| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲第一青青草原| 美女 人体艺术 gogo| 9色porny在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久精品国产综合久久久| 一级a爱片免费观看的视频| 女人久久www免费人成看片| 亚洲综合色网址| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产高清激情床上av| 视频区图区小说| 黄色成人免费大全| 久久人妻熟女aⅴ| 黄色a级毛片大全视频| 精品亚洲成国产av| 99久久人妻综合| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一二三四社区在线视频社区8| 国产在线一区二区三区精| 黄色视频不卡| 久99久视频精品免费| 99国产精品99久久久久| 免费少妇av软件| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黄色片一级片一级黄色片| 一本大道久久a久久精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 最新的欧美精品一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频 | 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 色在线成人网| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| www.熟女人妻精品国产| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 大型av网站在线播放| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | tocl精华| 丁香六月欧美| 老熟女久久久| 国产男女超爽视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品国产高清国产av | 99久久综合精品五月天人人| 美女国产高潮福利片在线看| 成年动漫av网址| a级毛片在线看网站| 中文字幕av电影在线播放| 国产欧美日韩一区二区三| 大码成人一级视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 热99re8久久精品国产| 999精品在线视频| 丝袜人妻中文字幕| 9热在线视频观看99| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产精品电影一区二区三区 | 黄色毛片三级朝国网站| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 搡老乐熟女国产| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 精品久久蜜臀av无| 亚洲国产精品sss在线观看 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美午夜高清在线| 国产高清国产精品国产三级| 热99久久久久精品小说推荐| 高清在线国产一区| 国产淫语在线视频| 成人三级做爰电影| 成年动漫av网址| 欧美一级毛片孕妇| 国产又爽黄色视频| 久久久国产一区二区| 不卡一级毛片| 午夜福利乱码中文字幕| 久久精品国产a三级三级三级| 一进一出好大好爽视频| 精品福利永久在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 丰满饥渴人妻一区二区三| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品欧美亚洲77777| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲视频免费观看视频| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品永久免费网站| 欧美日韩黄片免| 日韩三级视频一区二区三区| a在线观看视频网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久性视频一级片| 精品第一国产精品| 中文字幕制服av| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美日韩精品网址| 国产一区二区三区综合在线观看| 在线av久久热| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久久久午夜电影 | 99香蕉大伊视频| 日日夜夜操网爽| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 精品无人区乱码1区二区| av不卡在线播放| 国产精品免费一区二区三区在线 | 一级毛片女人18水好多| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品九九99| 老司机午夜福利在线观看视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产精品一区二区精品视频观看| 麻豆av在线久日| 国产精品一区二区精品视频观看| 99riav亚洲国产免费| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产精品久久视频播放| 天堂俺去俺来也www色官网| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久香蕉精品热| 久久久久国内视频| 亚洲精品国产区一区二| 一级作爱视频免费观看| 国产一区二区三区视频了| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久久久免费视频了| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品欧美一区二区三区在线| 久久久精品免费免费高清| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美黑人欧美精品刺激| 看片在线看免费视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 真人做人爱边吃奶动态| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品国产高清国产av | 12—13女人毛片做爰片一| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品电影一区二区在线| 国产国语露脸激情在线看| 国产深夜福利视频在线观看| 中文字幕色久视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久国产精品人妻蜜桃| 99国产精品免费福利视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 久久久久久久久免费视频了| av有码第一页| 国产亚洲精品一区二区www | 妹子高潮喷水视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 高清在线国产一区| 午夜两性在线视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人av激情在线播放| 人妻 亚洲 视频| 成人三级做爰电影| 亚洲 国产 在线| 黄片大片在线免费观看| 免费日韩欧美在线观看| 岛国毛片在线播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 不卡一级毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品一区二区在线不卡| tube8黄色片| 日本wwww免费看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久人妻熟女aⅴ| 精品国产国语对白av| 国产精品九九99| 国产片内射在线| 国产不卡一卡二| 最新在线观看一区二区三区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 免费在线观看日本一区| 国产精品久久久人人做人人爽| 女警被强在线播放| 在线观看www视频免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 美女福利国产在线| 一a级毛片在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美日韩黄片免| 交换朋友夫妻互换小说| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 成年人午夜在线观看视频| 免费观看人在逋| 国精品久久久久久国模美| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲免费av在线视频| 少妇粗大呻吟视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 老司机亚洲免费影院| 女性生殖器流出的白浆| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品人妻在线不人妻| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲色图av天堂| 欧美激情高清一区二区三区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 天堂√8在线中文| 国产精品一区二区免费欧美| 他把我摸到了高潮在线观看| 午夜久久久在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产成人欧美| 超色免费av| 黄色成人免费大全| 久久亚洲真实| 9热在线视频观看99| 在线看a的网站| 欧美乱色亚洲激情| 99精国产麻豆久久婷婷| 成人精品一区二区免费| 国产欧美亚洲国产| 免费观看精品视频网站| 99热只有精品国产| av天堂久久9| 一区福利在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美午夜高清在线| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲欧美激情综合另类| 韩国精品一区二区三区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲三区欧美一区| 亚洲五月天丁香| av免费在线观看网站| cao死你这个sao货| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产99白浆流出| 99riav亚洲国产免费| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产伦人伦偷精品视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 黑丝袜美女国产一区| 国精品久久久久久国模美| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 搡老乐熟女国产| 久久天堂一区二区三区四区| 国产激情久久老熟女| av欧美777| 色综合欧美亚洲国产小说| 免费少妇av软件| 狂野欧美激情性xxxx| 国产在线观看jvid| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲国产精品一区二区三区在线| 热99国产精品久久久久久7| 五月开心婷婷网| 成人精品一区二区免费| 午夜福利在线免费观看网站| 午夜日韩欧美国产| 成在线人永久免费视频| 亚洲专区字幕在线| 亚洲av熟女| 九色亚洲精品在线播放| 免费看十八禁软件| 日本黄色视频三级网站网址 | 色综合婷婷激情| 久久精品国产清高在天天线| 人妻久久中文字幕网| 久久亚洲精品不卡| www.精华液| 久久天堂一区二区三区四区| 最新美女视频免费是黄的| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 亚洲av片天天在线观看| 国产午夜精品久久久久久| www.精华液| 新久久久久国产一级毛片| x7x7x7水蜜桃| 国产深夜福利视频在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品电影一区二区在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久久久视频综合| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美黄色淫秽网站| 精品一区二区三卡| 性色av乱码一区二区三区2| 美女扒开内裤让男人捅视频| 在线永久观看黄色视频| 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品美女久久av网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久99久视频精品免费| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲熟女精品中文字幕| 99热国产这里只有精品6| 久久热在线av| 午夜福利一区二区在线看| 久久ye,这里只有精品| 18禁国产床啪视频网站| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩欧美三级三区| 免费在线观看日本一区| 国产精品.久久久| 无限看片的www在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久香蕉激情| 乱人伦中国视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 1024香蕉在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产免费现黄频在线看| 成人永久免费在线观看视频| 人成视频在线观看免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 欧美日韩福利视频一区二区| 色在线成人网| 欧美乱妇无乱码| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线国产一区二区在线| 日本a在线网址| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 久久青草综合色| 成在线人永久免费视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 日本a在线网址| 国产亚洲一区二区精品| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲成人免费av在线播放| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 真人做人爱边吃奶动态| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图av天堂| 久久九九热精品免费| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 女人被狂操c到高潮| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲精品久久午夜乱码| 啦啦啦 在线观看视频|