卡帕藻對(duì)5-氟尿嘧啶所致腸粘膜損傷的保護(hù)作用

張青，高遠(yuǎn)，程梟杰，王志廣，李春君，林碧音，唐慶娟

（1.中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島 266003）（2.馬來(lái)亞大學(xué)海洋與地球科學(xué)研究所，吉隆坡 50603）

化療是一種治療惡性腫瘤常用且有效的方法，但會(huì)對(duì)腸黏膜造成損傷，進(jìn)而導(dǎo)致腸道屏障功能障礙。而氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）是一種抗代謝藥物（化療藥物），是氟化嘧啶類抗腫瘤藥[1]。它主要通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制胸苷酸合酶來(lái)抑制DNA合成，從而發(fā)揮作用。與5-FU相關(guān)的最明顯的副作用包括粘膜炎、皮炎、心臟毒性和骨髓抑制[2]。另外，5-FU還會(huì)引起肝損傷、機(jī)體免疫功能和造血功能的低下等。5-FU臨床使用時(shí)，可對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用，同時(shí)對(duì)具有快速分化能力的小腸細(xì)胞也具有殺傷作用，使得腸粘膜屏障損傷是化療的主要毒副作用[3,4]。5-FU誘導(dǎo)的腸粘膜改變有5個(gè)階段，包括化學(xué)療法介導(dǎo)的信使信號(hào)的產(chǎn)生和上調(diào)，通過(guò)炎性介質(zhì)的信號(hào)傳遞以及粘膜損傷的放大、潰瘍和最終愈合過(guò)程的開(kāi)始[5,6]。研究還發(fā)現(xiàn)，促炎因子（例如TNF-α、IL-1β和IL-6）的合成與5-FU所致的腸粘膜屏障損傷的發(fā)展有關(guān)[7]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在化療過(guò)程中50%~80%的患者患有腸粘膜屏障損傷，隨后出現(xiàn)潰瘍、腹瀉和腹痛的臨床表現(xiàn)[8]。這直接增加了內(nèi)腔中病原體入侵的風(fēng)險(xiǎn)，削弱了患者消化和吸收營(yíng)養(yǎng)的能力，降低了治療功效并影響了患者的生活質(zhì)量。如今，臨床上常用藥物治療化療誘發(fā)的腸粘膜屏障損傷，包括5-氨基水楊酸、米諾環(huán)素（Minocycline）以及中藥復(fù)方制劑等[9]。而這些藥物治療效果并不顯著且有一定的副作用。因此，有必要研究天然產(chǎn)物，將其活性功能應(yīng)用于化療所致腸粘膜屏障損傷中。

在過(guò)去的十年中，海藻由于豐富的生物活性，已被醫(yī)藥、食品和營(yíng)養(yǎng)保健等多個(gè)領(lǐng)域關(guān)注。其中，卡帕藻（Kappaphycus alvarezii）是一種重要經(jīng)濟(jì)紅藻，“海燕窩”[10,11]?？ㄅ猎甯缓?卡拉膠、多酚、類黃酮以及花青素等多種海洋天然活性成分[12-14]。同時(shí)，研究表明卡帕藻或其提取物具有極好的抗氧化、抗菌、抗癌、抗炎和促進(jìn)人體腸道健康等功效，在功能性食品、保健食品及藥品的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用方面具有巨大潛力[15,16]。通常，從海洋中采集的海藻藻體中含有大量的水份，在用于營(yíng)養(yǎng)研究或食品加工之前要先進(jìn)行干燥。同時(shí)，干燥也是海藻收獲后最常用的加工貯藏方法。但是，植物材料干燥過(guò)程中去除水分的同時(shí)會(huì)發(fā)生明顯的變形，從而使植物基質(zhì)及其細(xì)胞壁和膜的功能退化，進(jìn)而導(dǎo)致抗氧化化合物或多或少地暴露在氧化反應(yīng)中[17]。已有文獻(xiàn)證明，不同干燥方式會(huì)影響卡帕藻的活性成分及其功能[17]。Ling等研究表明晾干條件下卡帕藻中的總酚、總黃酮、總花青素及總類胡蘿卜素含量均高于曬干條件下，其抗氧化活性也優(yōu)于曬干卡帕藻[18]。然而，目前研究都集中于體外的抗氧化研究，缺乏體內(nèi)的活性研究比較。

因此，基于目前的研究現(xiàn)狀，本研究以兩種干燥加工下的卡帕藻為受試物，將其添加到標(biāo)準(zhǔn)飼料中，通過(guò)腹腔注射5-FU建立小鼠腸粘膜損傷模型，記錄和測(cè)定卡帕藻對(duì)小鼠表觀指標(biāo)、空腸組織病理學(xué)及血清中炎癥因子的影響，探討兩種干燥加工下卡帕藻對(duì)5-FU所致腸黏膜損傷的保護(hù)作用，明確其具有改善化療患者的生活質(zhì)量的潛力，為卡帕藻的加工及深入開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

雄性Balb/c小鼠（15~21 g，6周齡，SPF級(jí)），購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司（許可證號(hào)：SCXK（浙）2019-0001）。將小鼠圈養(yǎng)在環(huán)境可控的條件下（溫度為23±2 ℃；相對(duì)濕度為50%±10%；光照/黑暗周期為12 h），并且可以自由使用經(jīng)認(rèn)證的飼料和清潔水（礦泉水）。所有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照中華人民共和國(guó)的道德準(zhǔn)則和法規(guī)進(jìn)行，并得到中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

卡帕藻（K. alvarezii），馬來(lái)西亞仙本那地區(qū)，蘇拉威西海域；5-氨基水楊酸、5-氟尿嘧啶，上海源葉生物科技有限公司；AIN93標(biāo)準(zhǔn)飼料，南通特洛菲飼料科技有限公司；氯化鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；TNF-α酶聯(lián)免疫吸附試劑盒、IL-10酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，卡爾文生物科技有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

食品研磨機(jī)，小熊電器；超低溫冰箱（DW-86L486），青島海爾特種電器有限公司；電子天平（CP224C），奧豪斯儀器（上海）有限公司；高速冷凍離心機(jī)（NEOFUGE 23R），上海力申科學(xué)儀器有限公司；微孔板恒溫震蕩器（B E-9008），上海坤誠(chéng)科學(xué)儀器有限公司；酶標(biāo)儀（SPARK 10M），帝肯（上海）貿(mào)易有限公司；電動(dòng)熒光顯微鏡（NIKON/Ni-E），日本尼康公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 動(dòng)物飼料

先將收獲的新鮮卡帕藻分為兩組，第一組是將海藻放入透明的塑料袋中，在陽(yáng)光下放置到卡帕藻顏色變成白色為止（2~3 d），然后從透明的塑料袋中取出，經(jīng)清洗干凈后再在陽(yáng)光下干燥3~4 d，此組記為曬干組；第二組是直接將收獲的卡帕藻懸掛起來(lái)，直到它們變?yōu)樽仙?，風(fēng)吹日曬下干燥3~4 d，將其記為晾干組。之后，將經(jīng)干燥處理的新鮮卡帕藻在-60 ℃冷凍干燥48 h后，使用食品研磨機(jī)將其磨碎，并過(guò)80目篩。最后，將卡帕藻粉末保存在-20 ℃以備制作動(dòng)物飼料使用。

動(dòng)物飼料選自南通特洛菲飼料科技有限公司的AIN93標(biāo)準(zhǔn)飼料（產(chǎn)品代碼LAD3001G）。根據(jù)美國(guó)FDA標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定飼料中受試物的添加量不得超過(guò)5%，以不影響正常飲食結(jié)構(gòu)為目的，將所得到的兩種干燥條件的卡帕藻粉末分別以3%的比例分量拌入各自標(biāo)準(zhǔn)飼料中，參照J(rèn)AWAD等[19]報(bào)道的方法，將5-氨基水楊酸（作為陽(yáng)性對(duì)照）以0.005%的比例分量拌入標(biāo)準(zhǔn)飼料中，最終飼料的組別見(jiàn)表1。

表1 飼料組別與標(biāo)簽Table 1 Feed group and label

1.3.2 動(dòng)物分組與給藥

將35只雄性Balb/c小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，按照體重隨機(jī)分成5組（n=7）：正常組（N）、模型組（M）、陽(yáng)性對(duì)照組（5-ASA）、曬干卡帕藻組（SKA）和晾干卡帕藻組（AKA）。從第0 d起，M組、5-ASA組、SKA組和AKA組的小鼠腹腔注射5-FU（50 mg/kg，溶于生理鹽水）誘導(dǎo)腸粘膜損傷，而N組的小鼠腹腔注射等體積滅菌生理鹽水，連續(xù)3 d。同時(shí)，各組小鼠喂食不同的飼料，給予N組和M組小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料（LAD3001 G），而其他三組的飼料分別為5-ASA、SKA、和AKA，持續(xù)7 d（見(jiàn)圖1及表2）。小鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間（7 d）飼養(yǎng)在專門(mén)動(dòng)物飼養(yǎng)籠內(nèi)，每日給予小鼠正常飲食并維持小鼠生活的衛(wèi)生環(huán)境。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，每天記錄小鼠的體重和攝食量。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（第8 d）麻醉小鼠并快速摘眼球取血，頸椎脫臼處死?？焖俜蛛x空腸，取出相應(yīng)臟器稱重后放于液氮速凍，再放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 小鼠分組及給藥情況Table 2 Grouping and administration of mice

圖1 實(shí)驗(yàn)流程圖Fig.1 Experimental flowchart

1.3.3 一般情況的觀察

實(shí)驗(yàn)期間記錄各組小鼠體重、攝食量，觀察各組小鼠食欲、毛發(fā)及其整體狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算小鼠體重增長(zhǎng)指數(shù)和免疫器官指數(shù)。

1.3.4 組織病理學(xué)分析

為了進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，將小鼠1 cm空腸段浸泡于4%多聚甲醛中，固定48 h以上后，每組取3只小鼠的空腸切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色（hematoxylineosin staining，HE）。之后，使用電動(dòng)熒光顯微鏡在200倍下觀察組織病理切片。每張照片選取5個(gè)視野統(tǒng)計(jì)空腸絨毛長(zhǎng)度（villus）、隱窩深度（crypt），并計(jì)算絨毛長(zhǎng)度/隱窩深度的比值（villus/crypt，V/C值）。

1.3.5 血清炎癥因子測(cè)定

小鼠處死后，將血液于4 ℃、3500 r/min條件下離心15 min，TNF-α和IL-10的檢測(cè)按照酶聯(lián)免疫法（ELISA）試劑盒說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行。

1.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以（Mean±SEM）呈現(xiàn)，制圖軟件為GraphpadPrism8，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件為SPSS 20。用單因素方差分析方法（One-Way ANOVA）分析，同時(shí)進(jìn)行LSD組間比較。p<0.05視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異，p<0.01視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)極顯著差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 卡帕藻對(duì)小鼠基本情況的影響

整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間觀察到，N組小鼠表現(xiàn)出正常的晝夜節(jié)律、沒(méi)有痛苦癥狀、絨毛正常且精神狀態(tài)良好。同時(shí)，觀察到注射5-FU的M組、5-ASA組、SKA組和AKA組小鼠在白天表現(xiàn)的異常活躍，隨后出現(xiàn)活動(dòng)減少、絨毛松弛以及背部弓形，而在第5 d得到好轉(zhuǎn)，晝夜節(jié)律逐漸恢復(fù)正常。這與ATIQ等的研究一致，觀察到注射5-FU的小鼠出現(xiàn)駝背、聳肩和毛發(fā)松弛等現(xiàn)象[20]。

2.2 卡帕藻對(duì)小鼠體重的影響

在研究廣藿香醇對(duì)5-FU所致腸粘膜損傷的保護(hù)作用中發(fā)現(xiàn)5-FU會(huì)導(dǎo)致大鼠體重的降低，隨后第6天體重開(kāi)始恢復(fù)[21]。圖2a表明N組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間保持穩(wěn)定增長(zhǎng)，M組、5-ASA組、SKA組和AKA組小鼠在腹腔注射5-FU后第1 d體重出現(xiàn)下降，之后隨著腹腔注射結(jié)束和實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，在第5 d各組小鼠體重開(kāi)始升高。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束M組體重明顯低于N組（p<0.01），5-ASA組、SKA組和AKA組體重略高于M組。通過(guò)圖2b發(fā)現(xiàn)M組（-7.50%）的體重增長(zhǎng)率低于N組（8.32%），具有顯著性差異（p<0.01），而5-ASA組（-3.30%）、SKA組（-6.19%）和AKA組（-5.09%）比M組的體重增長(zhǎng)率略高。而分析第三天小鼠體重發(fā)現(xiàn)（圖2c），M組（15.75 g）體重明顯低于N組（21.88 g）（p<0.01），5-ASA組（16.85 g）、SKA組（16.83 g）和AKA組（16.76 g）體重明顯高于M組。結(jié)果表明，卡帕藻對(duì)5-FU所致腸黏膜損傷小鼠體重的降低具有抑制作用，且第3 d時(shí)，卡帕藻可顯著抑制小鼠體重的降低。

圖2 小鼠體重變化Fig.2 Changes in mouse body weight

2.3 卡帕藻對(duì)小鼠攝食量的影響

在砂仁揮發(fā)油對(duì)5-FU誘導(dǎo)腸粘膜炎的保護(hù)作用中發(fā)現(xiàn)5-FU會(huì)導(dǎo)致大鼠攝食量的降低，在造模結(jié)束后，模型組和各受試物組的攝食量開(kāi)始恢復(fù)[22]。從圖3可以看到，N組在實(shí)驗(yàn)期間平均攝食量在3.50 g左右，基本保持不變。M組、5-ASA組、SKA組和AKA組小鼠在腹腔注射5-FU后第1 d出現(xiàn)攝食量低于N組，之后隨著腹腔注射結(jié)束和實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，M組、5-ASA組、SKA組和AKA組小鼠攝食量開(kāi)始逐漸升高與N組達(dá)到一致。接著，分析第三天小鼠攝食量發(fā)現(xiàn)（見(jiàn)圖3b），M組攝食量（1.54 g）顯著低于N組（3.51 g）（p<0.01），而5-ASA組（2.15 g）、SKA組（2.18 g）和AKA組（2.19 g）攝食量明顯高于M組。結(jié)果表明，卡帕藻對(duì)5-FU所致腸粘膜損傷小鼠攝食量的降低具有抑制作用，且第3 d時(shí)，卡帕藻可顯著抑制小鼠攝食量的降低。

圖3 小鼠攝食量變化Fig.3 Changes in food intake of mice

2.4 卡帕藻對(duì)小鼠免疫器官的影響

5-FU是一種細(xì)胞毒性藥物，持續(xù)使用可以靶向快速的分裂細(xì)胞，使具有快速增殖潛能的正常細(xì)胞（如骨髓）和胃腸道粘膜細(xì)胞與癌細(xì)胞一樣，受到損害，進(jìn)而造成腸粘膜屏障損傷。而胸腺和脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，其質(zhì)量與所含的免疫細(xì)胞數(shù)量及免疫功能密切相關(guān)，臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱[23]。由圖4及表3所示，與N組小鼠相比，M組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均降低，呈現(xiàn)極顯著性差異（p<0.01）。與M組小鼠相比，各受試物組小鼠的免疫器官指數(shù)有所改善，但無(wú)顯著性差異。結(jié)果說(shuō)明，注射5-FU會(huì)使小鼠免疫器官受損，免疫力降低，本實(shí)驗(yàn)造模成功，而卡帕藻可改善免疫器官受損情況，進(jìn)而緩解5-FU的細(xì)胞毒性。

表3 小鼠免疫器官指數(shù)Table 3 Mouse immune organ index

圖4 小鼠免疫器官指數(shù)Fig.4 Mouse immune organ index

2.5 卡帕藻對(duì)小鼠空腸組織病理學(xué)的影響

形態(tài)學(xué)分析表明，注射5-FU會(huì)導(dǎo)致小腸巨大的組織學(xué)損傷，包括絨毛長(zhǎng)度縮短、絨毛結(jié)構(gòu)喪失、隱窩變形以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等[24]。組織學(xué)分析顯示（見(jiàn)圖5a），N組小鼠的空腸無(wú)組織形態(tài)變化，絨毛與完整的隱窩對(duì)齊，細(xì)長(zhǎng)且排列緊密，腸粘膜結(jié)構(gòu)清晰。觀察到M組空腸黏膜明顯的組織病理學(xué)改變，引起腸粘膜結(jié)構(gòu)破壞，表現(xiàn)為隱窩結(jié)構(gòu)明顯喪失，嚴(yán)重萎縮的跡象，絨毛的縮短和雜亂無(wú)章，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜和囊腫均出現(xiàn)空泡和水腫，這與YU等研究一致[25]。而各受試物組可顯著逆轉(zhuǎn)5-FU所致的空腸組織病理學(xué)改變，表現(xiàn)為絨毛細(xì)長(zhǎng)，排列緊密，腸粘膜結(jié)構(gòu)相對(duì)完整。

圖5 小鼠空腸形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.5 Morphological structure of mouse jejunum

小腸的隱窩和絨毛功能單元是腸上皮持續(xù)更新的基礎(chǔ)，并參與消化吸收功能，進(jìn)而維持腸粘膜功能的正常[26]。對(duì)空腸的絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)（見(jiàn)圖5b和圖5c），與N組（360.22 μm）相比，M組（252.09 μm）絨毛長(zhǎng)度顯著降低；而5-ASA組（332.58 μm）、SKA組（334.44 μm）和AKA組（350.75 μm）與M組相比，絨毛長(zhǎng)度顯著增加（p<0.01）。隱窩深度也表現(xiàn)為同樣的趨勢(shì)。V/C值表明，與N組（6.40）相比，M組（5.12）小鼠的V/C值明顯下降，而5-ASA組（6.39）和AKA組（6.35）的V/C值顯著優(yōu)于M組（p<0.05）。這與JAWAD等的研究結(jié)果一致，經(jīng)5-FU處理的小鼠在小腸中表現(xiàn)出明顯的絨毛長(zhǎng)度和隱窩深度改變，而陽(yáng)性組和皂苷A組可以減弱這種現(xiàn)象[19]。以上發(fā)現(xiàn)表明，卡帕藻顯著保護(hù)了5-FU所致小鼠腸粘膜損傷，其中晾干卡帕藻具有更好的保護(hù)作用。

2.6 卡帕藻對(duì)小鼠血清炎癥因子的影響

炎性標(biāo)志物的過(guò)量產(chǎn)生主要與腸粘膜屏障損傷有關(guān)，5-FU誘發(fā)小鼠腸粘膜屏障損傷后，促炎因子表達(dá)顯著增加，抗炎因子顯著降低[27]。由圖6所示，檢測(cè)小鼠血清中炎癥因子，發(fā)現(xiàn)M組小鼠有炎癥反應(yīng)。其中，AKA組（470.43 pg/mL）與M組（580.69 pg/mL）相比，顯著降低了促炎因子TNF-α的含量（p<0.05），提高了抗炎因子IL-10的含量。ZHANG等的研究也發(fā)現(xiàn)，經(jīng)5-FU處理的小鼠血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)促炎因子TNF-α升高和抗炎因子IL-10降低，而清結(jié)扶正顆粒組可以顯著改變這一現(xiàn)象[28]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)AKA組與SKA組相比，AKA組可顯著降低TNF-α含量和升高IL-10含量。結(jié)果表明，卡帕藻能夠降低小鼠血清TNF-α的釋放和提高IL-10的釋放，進(jìn)而對(duì)腸粘膜損傷起到保護(hù)作用，其中晾干卡帕藻可更好地保護(hù)卡帕藻的這一活性。

圖6 小鼠血清炎癥因子指標(biāo)Fig.6 Mouse serum inflammatory factor indicators

本研究表明，卡帕藻對(duì)由5-FU引起的胃腸道毒性具有強(qiáng)大的預(yù)防潛力，可有效改善相關(guān)的臨床癥狀。這可能是卡帕藻含有多糖、多酚以及黃酮等多種活性物質(zhì)，其中的一種成分或是幾種成分協(xié)同發(fā)揮了抗炎、抗氧化、抗癌、提高免疫力及調(diào)節(jié)腸道菌群等多種功效[29-31]。此外，研究證明不同干燥方式下的卡帕藻對(duì)5-FU引起腸粘膜損傷的保護(hù)作用具有不同的影響。其中，晾干卡帕藻的活性更好。這可能是因?yàn)椴煌稍飾l件對(duì)生物活性化合物的含量、活性和生物利用度都有不同程度的影響。Tomaino等研究表明干燥過(guò)程通常會(huì)導(dǎo)致植物原料中天然抗氧化劑的消耗[32]。這是因?yàn)闇囟龋^(guò)長(zhǎng)干燥時(shí)間，陽(yáng)光中的紫外線以及干燥過(guò)程中樣品的脫水可能會(huì)破壞某些活性化合物，包括抗壞血酸、生育酚和類胡蘿卜素等，進(jìn)而導(dǎo)致植物化學(xué)含量和抗氧化活性受到不同程度的影響[33]。而本研究中的干燥條件在很大程度上取決于天氣和白天的時(shí)間，這導(dǎo)致了干燥時(shí)間長(zhǎng)（在陽(yáng)光直射下需要3~4 d），干燥速度慢，延長(zhǎng)了海藻在空氣中的暴露時(shí)間，進(jìn)而不同程度的影響了活性成分的氧化并降低了其活性。研究已證明，晾干條件下卡帕藻中的總酚（41.33>26.67 mg沒(méi)食子酸/100 g）、總黃酮（16.17>9.83 mg/兒茶素100 g）、總花青素（1.05>0.53 mg氰化物-3-葡萄糖苷/g）及總類胡蘿卜素（0.10>0.03 mgβ-胡蘿卜素/g）含量均高于曬干條件下，其清除2-2-二苯基-1-吡啶基肼基能力的IC50值（22.93>48.73 mg/mL）、清除2,2-疊氮基雙-（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）能力（0.34>0.20 mg抗壞血酸/g）等也高于曬干卡帕藻[18]。Vairappan等研究顯示晾干條件下卡帕藻中的卡拉膠含量（58.3>42.8%）和質(zhì)量（粘度57.8>42.4 cPs，凝膠強(qiáng)度1424.6>898.2 g/cm2）均優(yōu)于曬干條件下的卡拉膠[17]。因此，與曬干相比，晾干干燥可更好的保護(hù)卡帕藻的活性，在改善化療所致腸粘膜損傷中表現(xiàn)出更強(qiáng)的健腸功效。

3 結(jié)論

本研究通過(guò)5-FU構(gòu)建腸粘膜損傷模型來(lái)比較研究?jī)煞N干燥方式下卡帕藻的保護(hù)作用。觀察到兩種干燥方式下卡帕藻均可抑制5-FU導(dǎo)致的小鼠體重和攝食量的降低。對(duì)免疫器官指數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析也發(fā)現(xiàn)卡帕藻可改善胸腺和脾臟免受損傷，進(jìn)而減輕5-FU對(duì)機(jī)體造成的細(xì)胞毒性。通過(guò)組織學(xué)分析，卡帕藻的干預(yù)可改善5-FU引起的組織病理學(xué)變化和顯著上調(diào)絨毛長(zhǎng)度。另外，與模型組相比，晾干卡帕藻可顯著上調(diào)V/C值，更好地保護(hù)粘膜的結(jié)構(gòu)和組織。在炎癥方面，施用5-FU后，在血清中觀察到促炎因子（TNF-α）升高和抗炎因子（IL-10）降低，而晾干卡帕藻可顯著逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象，支持了卡帕藻的干預(yù)抑制了腸粘膜損傷模型中炎性介質(zhì)的產(chǎn)生。此外，研究結(jié)果還表明，不同干燥方式影響了卡帕藻活性的發(fā)揮，通過(guò)V/C值和血清炎癥因子可分析到，晾干卡帕藻的效果優(yōu)于曬干卡帕藻。綜上所述，卡帕藻干預(yù)可以通過(guò)緩解相關(guān)的臨床癥狀、減緩5-FU的細(xì)胞毒性、改善腸道形態(tài)學(xué)損傷和調(diào)節(jié)炎癥穩(wěn)態(tài)來(lái)預(yù)防5-FU誘導(dǎo)的腸粘膜損傷，其中，晾干卡帕藻的效果優(yōu)于曬干卡帕藻。這說(shuō)明卡帕藻可作為理想的功能性食品原料，有望為卡帕藻的精深加工提供科技支撐。