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    血漿循環(huán)微小RNA-126 微小RNA-155與老年冠心病患者冠狀動(dòng)脈支架內(nèi)再狹窄的相關(guān)性分析

    2021-06-30 02:55:56梅齊建
    河北醫(yī)學(xué) 2021年6期
    關(guān)鍵詞:血漿冠心病水平

    杜 玥, 李 莎, 肖 鳴, 梅齊建

    (長(zhǎng)江航運(yùn)總醫(yī)院老年病科, 湖北 武漢 430010)

    冠心病是臨床上較常見(jiàn)的心臟類(lèi)疾病,該疾病主要是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致血管變窄或阻塞,或者是因冠狀動(dòng)脈痙攣等造成患者心肌缺氧或壞死引起[1]。冠心病具有發(fā)病率高、病因復(fù)雜、死亡率高等特點(diǎn)。目前治療冠心病的主要方法是經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(percutaneous coronary intervention,PCI)治療,雖取得一定療效,但部分患者易發(fā)生支架內(nèi)再狹窄(in stent restenosis,ISR),嚴(yán)重影響患者預(yù)后[2]。微小RNA(microRNA,miRNA)是生物體內(nèi)廣泛存在的一種非編碼小RNA,經(jīng)轉(zhuǎn)錄后可調(diào)控基因的表達(dá),且具有多種生物學(xué)活性。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn),miRNA在心血管類(lèi)疾病的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[3]。然而,有關(guān)血漿循環(huán)微小RNA-126(miR-126)和微小RNA-155(miR-155)與老年冠心病患者ISR的相關(guān)性尚不完全清楚。鑒于此,本研究擬通過(guò)檢測(cè)老年冠心病患者血漿循環(huán)miR-126、miR-155的表達(dá)情況,并探究二者與老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的關(guān)系,以期為臨床治療老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR提供有價(jià)值的參考依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料:選取2017年8月至2019年9月在本院經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為冠心病并行PCI術(shù)的患者135例作為研究對(duì)象,術(shù)后1年復(fù)查冠狀動(dòng)脈造影,并根據(jù)ISR的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],將患者是否發(fā)生ISR分為再狹窄組和非再狹窄組。再狹窄組39例,其中男25例,女14例,年齡60~72歲。非再狹窄組96例,其中男62例,女34例,年齡61~75歲。再狹窄組和非再狹窄組之間性別、年齡比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合冠心病相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5],且在本院行PCI術(shù)者;②凝血功能正常者;③術(shù)后均按醫(yī)生囑咐按時(shí)口服相關(guān)藥物并進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影復(fù)查者;④臨床及隨訪資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn):①同時(shí)患有其他心臟類(lèi)疾病者;②患有其他重大疾病者;③不配合治療者。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò),所有樣品采集均取得患者及家屬知情并簽署同意書(shū)。收集患者基本資料,包括:體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史。

    1.2主要試劑與儀器:總RNA提取試劑盒(批號(hào):V8019)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào):G10861)購(gòu)自廣州捷倍斯生物科技有限公司;SYBR Green Supermix熒光定量PCR試劑盒(批號(hào):1720129)購(gòu)自美國(guó)BIO-RAD公司;離心機(jī)(型號(hào):KH30RF)購(gòu)自湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司;實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(型號(hào):StepOne TM)購(gòu)自美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司;miR-126、miR-155以及內(nèi)參U6引物由北京甘棠飛華生物科技有限公司合成。

    1.3研究方法

    1.3.1樣品采集及保存:術(shù)后24h內(nèi)抽取所有患者空腹?fàn)顩r下的靜脈血5mL,添加抗凝劑后3000r/min離心10min,收集血漿,并置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。

    1.3.2血漿循環(huán)miR-126、miR-155表達(dá)水平的檢測(cè):采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)各組患者血漿循環(huán)miR-126和miR-155的表達(dá)水平。具體操作步驟為:取出待測(cè)血漿,用總RNA提取試劑盒并嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)順序提取總RNA,然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA。以上述逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板,進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè),總反應(yīng)體系共20μL:SYBR Green Supermix 10μL,上、下游引物(20μmoL/L)各0.4μL,cDNA模板1μL,ddH2O 8.2μL。PCR反應(yīng)條件為:94℃3min;94℃ 25 s,60℃ 30 s,72℃ 20 s,共35個(gè)循環(huán)。血漿循環(huán)miR-126、miR-155及內(nèi)參U6的上下游引物序列見(jiàn)表1。采用2-△△CT法計(jì)算血漿循環(huán)miR-126和miR-155相對(duì)表達(dá)量。

    表1 引物序列

    2 結(jié) 果

    2.1一般資料比較:再狹窄組和非再狹窄組的性別、BMI、平均年齡、飲酒、糖尿病及高血壓比例之間比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);再狹窄組吸煙比例高于非再狹窄組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

    表2 各組基本資料比較結(jié)果

    2.2各組血漿循環(huán)miR-126、miR-155表達(dá)水平比較:再狹窄組血漿循環(huán)miR-126、miR-155表達(dá)水平均顯著低于非再狹窄組(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

    表3 各組血漿循環(huán)miR-126 miR-155表達(dá)水平

    2.3血漿循環(huán)miR-126、miR-155對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的診斷價(jià)值:ROC結(jié)果顯示,血漿循環(huán)miR-126、miR-155診斷老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的AUC分別為0.843、0.708,截?cái)嘀捣謩e為3.158、1.424,此時(shí)對(duì)應(yīng)靈敏度分別為74.0%、59.4%,特異度分別為82.1%、76.9%。血漿循環(huán)miR-126、miR-155聯(lián)合檢測(cè)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的AUC為0.864,此時(shí)對(duì)應(yīng)靈敏度和特異度分別為79.2%、84.6%。詳見(jiàn)表4和圖1。

    表4 血漿循環(huán)miR-126 miR-155表達(dá)水平對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR診斷價(jià)值比較

    圖1 血漿循環(huán)miR-126、miR-155對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的診斷價(jià)值

    2.4影響老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的因素(logistics回歸分析):以老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR是否發(fā)生為因變量(0=否,1=是),血漿循環(huán)miR-126、miR-155表達(dá)水平及吸煙為自變量,采用Logistic回歸分析,結(jié)果顯示:血漿循環(huán)miR-126、miR-155低表達(dá)是影響老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=3.431,95%CI:1.548~7.604;OR=2.762,95%CI:1.273~5.990;P<0.05)。詳見(jiàn)表5。

    表5 老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的危險(xiǎn)因素分析

    3 討 論

    冠心病是心血管類(lèi)疾病中較常見(jiàn)且致殘率及死亡率較高的一種疾病,隨著經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療的應(yīng)用,顯著提高了患者的生存質(zhì)量,但部分患者治療后出現(xiàn)ISR。相關(guān)研究顯示,冠心病患者ISR的發(fā)生率為4%~31%[6]。ISR可造成患者心肌供血不足,引起心肌細(xì)胞嚴(yán)重受損,導(dǎo)致患者心血管不良事件的發(fā)生率顯著增加,現(xiàn)已成為影響冠心病患者治療效果及預(yù)后的重要原因之一,也是困擾PCI治療進(jìn)展的重要難題[7]。研究顯示,ISR與冠脈內(nèi)血栓形成、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)、血管彈性回縮等相關(guān)[8]。然而,目前對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的發(fā)生機(jī)制尚未完全了解。因此對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR進(jìn)行深入研究,對(duì)該疾病的治療具有重要意義。

    miRNA是生物體內(nèi)廣泛存在的一類(lèi)非編碼單鏈小分子RNA,長(zhǎng)度為18~25個(gè)核苷酸,能調(diào)節(jié)基因的表達(dá),并在多種生物學(xué)過(guò)程中發(fā)揮重要作用[9]。循環(huán)miRNA是游離于血清或血漿中的一類(lèi)miRNA,其基因序列高度穩(wěn)定、保守。miR-126是血管內(nèi)皮細(xì)胞中廣泛存在的一種miRNA,在血管發(fā)育、修復(fù)中發(fā)揮重要作用。已有研究證實(shí),循環(huán)miRNA在急性腦梗死中明顯降低,且可能為預(yù)測(cè)疾病發(fā)生新靶點(diǎn)[10]。劉玉薇等[11]研究表明,冠心病患者血漿中miR-126降低,且與病情嚴(yán)重程度相關(guān),影響預(yù)后;魏廣和等[12]研究發(fā)現(xiàn),miR-126在ISR患者外周血中表達(dá)水平降低,且對(duì)患者行PCI術(shù)后ISR發(fā)生具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。本研究結(jié)果顯示,再狹窄組血漿循環(huán)miR-126表達(dá)水平顯著低于非再狹窄組,提示血漿循環(huán)miR-126可能參與老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的發(fā)展進(jìn)程。本研究中ROC曲線分析表明,血漿循環(huán)miR-126診斷老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的AUC為0.843,與魏廣和等人研究結(jié)果一致,提示循環(huán)miR-126可作為評(píng)估老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR發(fā)生的指標(biāo)。miR-155是人體內(nèi)廣泛存在的非編碼小RNA,在炎癥反應(yīng)、機(jī)體造血細(xì)胞的發(fā)育及分化、免疫應(yīng)答等多種生物學(xué)中發(fā)揮重要作用。臨床研究顯示,miR-155在心肌梗死后心力衰竭患者血清中異常升高,對(duì)評(píng)估心功能具有重要意義[13]。陸振濤等[14]研究發(fā)現(xiàn),miR-155在冠心病患者外周血中表達(dá)水平升高,且可預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈病變程度。本研究結(jié)果顯示,再狹窄組血漿循環(huán)miR-155表達(dá)水平顯著低于非再狹窄組,提示血漿循環(huán)miR-155可能參與老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的發(fā)展進(jìn)程。本研究中ROC曲線分析表明,血漿循環(huán)miR-155診斷老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的AUC為0.708,提示血漿循環(huán)miR-155可作為評(píng)估老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR發(fā)生的指標(biāo),且血漿循環(huán)miR-126表達(dá)水平對(duì)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的診斷價(jià)值較循環(huán)miR-155高。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),兩者聯(lián)合檢測(cè)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的AUC為0.864,提示兩者聯(lián)合診斷價(jià)值高于單獨(dú)診斷。此外,Logistic回歸分析結(jié)果顯示,血漿循環(huán)miR-126、miR-155低表達(dá)是影響老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示對(duì)兩者表達(dá)水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)可為預(yù)測(cè)老年冠心病患者行PCI術(shù)后發(fā)生ISR提供一定臨床依據(jù)。

    綜上所述,循環(huán)miR-126、miR-155在老年冠心病行PCI術(shù)后發(fā)生ISR患者血漿中表達(dá)水平明顯降低,兩者參與術(shù)后ISR的發(fā)生及發(fā)展,可能作為早期疾病診斷的潛在生物學(xué)指標(biāo),并對(duì)病情展開(kāi)早期評(píng)估。但受研究樣本量限制,且未對(duì)其他生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)并對(duì)比分析臨床應(yīng)用,因此,在后續(xù)研究需擴(kuò)大監(jiān)測(cè)指標(biāo),并對(duì)miR-126、miR-155的具體作用機(jī)制仍待深入探究。

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