Myosin1H基因多態(tài)性與蒙古族骨性下頜后縮易感性的關(guān)系

李曉暉， 程書玉， 巴格那， 陳玉友

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院口腔科， 內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

下頜后縮(mandibular retrusion，MR)是骨性Ⅱ類錯(cuò)合畸形發(fā)生的重要病機(jī)，此類錯(cuò)合畸形常表現(xiàn)為上頜正?；蚯巴?，但下頜后縮，伴前深覆合，開唇露齒，影響口腔頜面部形態(tài)及口腔功能[1]。長期以往可能誘發(fā)阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome，OSAHS)，增加心腦血管疾患發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[2]。前期調(diào)查顯示，我國青少年安氏Ⅱ類錯(cuò)合畸形發(fā)生率超過20%，其中骨性MR比例超過1/2[3]。最新研究指出，骨骼肌收縮功能的正常維持有賴于肌球蛋白重鏈異構(gòu)體的調(diào)節(jié)[4]。肌球蛋白由重鏈復(fù)合組成，承擔(dān)骨骼肌纖維收縮功能，與骨骼肌可塑性密切相關(guān)。I類肌球蛋白(Myosin1H)為非經(jīng)典肌球蛋白，參與肌肉收縮、膜泡運(yùn)輸、細(xì)胞極性建立等過程，該蛋白遺傳性改變可能影響骨骼肌生長發(fā)育，已證實(shí)與南亞人群下頜骨發(fā)育異常[5]。但東南亞人群存在種族、地域差異，或存在遺傳易感性區(qū)別。為探討Myosin1H基因多態(tài)性與蒙古族骨性MR易感性的關(guān)系，現(xiàn)對本地區(qū)蒙古族骨性Ⅱ類錯(cuò)合畸形、骨性Ⅰ類錯(cuò)頜畸形患者M(jìn)yosin1H基因多態(tài)性進(jìn)行檢測，探究Myosin1H基因多態(tài)性與骨性MR患病的關(guān)系，從遺傳基因?qū)W方面分析骨性MR的病機(jī)，以期為該病防治提供指導(dǎo)，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1一般資料：納入2017年1月至2019年8月我院口腔科就診的以MR為主的骨性Ⅱ類錯(cuò)合畸形61例作為觀察組，同期就診骨性Ⅰ類錯(cuò)頜畸形61例作為對照組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)：均為內(nèi)蒙古境內(nèi)蒙古族；無不同族群、不同種族婚史或同居史；均表現(xiàn)為以下頜MR為主骨性Ⅱ類錯(cuò)合畸形，屬安氏Ⅱ類錯(cuò)合畸形，經(jīng)現(xiàn)代口腔正畸學(xué)診療手冊確診[6]，SNA角(蝶鞍中心、鼻根點(diǎn)、上齒槽座點(diǎn)構(gòu)成角)為78～86度，SNB角(蝶鞍中心、鼻根點(diǎn)、下齒槽座點(diǎn)構(gòu)成角)<76度，ANB角(上齒槽座點(diǎn)、鼻根點(diǎn)、下齒槽座點(diǎn)構(gòu)成角)≥5度；磨牙遠(yuǎn)中關(guān)系，伴前牙深覆合、深覆蓋；上頜較下頜位置靠前，或下頜角較上頜后縮或兩者均存在；履行告知義務(wù)，獲得患者及家屬知情同意。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：均為內(nèi)蒙古境內(nèi)蒙古族；確診為安氏Ⅰ類錯(cuò)合畸形；上下頜形態(tài)、位置關(guān)系正常，SNA角78～86度，SNB角77～83度，ANB角0.8～4.6度；FH-MP角(眶耳平面與下頜平面構(gòu)成角)在26～37度之間，下頜角在114.2～125.4度之間；磨牙中性關(guān)系；無不同族群、不同種族婚史或同居史；患者均知情，已簽署研究同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有正畸治療史；功能性或牙性Ⅱ類錯(cuò)合；經(jīng)口呼吸、咬下唇、吸吮手指等不良習(xí)慣；替牙障礙；嚴(yán)重心肝腎肺功能不全；牙齒缺失；萌芽順序異常；口面肌功能異常；小下頜畸形綜合征；唇腭裂；頜骨手術(shù)或頜骨外傷史；合并影響頜面部發(fā)育疾病者。兩組臨床資料對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。見表1。

1.2方法：①M(fèi)yosin1H基因多態(tài)性檢測。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragments length polymorphism，PCR-RELP)法測定Myosin1H基因多態(tài)性，從NCBI數(shù)據(jù)庫檢索Myosin1H基因組mRNA序列，查閱文獻(xiàn)選擇基因位點(diǎn)(rs11611277、rs3825393位點(diǎn))[7]。就診時(shí)采集肘正中靜脈血5mL，抗凝管保存，超低溫冷凍保存待測。參照Trizol試劑盒(美國invitrogen公司)使用說明提取全血基因組DNA，蛋白核酸分析儀鑒定純度及濃度滿意后用于后續(xù)檢測，由上海生工生物工程有限公司設(shè)計(jì)引物，Myosin1H rs11611277位點(diǎn)上游引物序列：5’-TCCCAGGGTTTAGCATCTTG-3’，下游引物序列：5’-GAGTGGCGCCTCAGTATCTC-3’，擴(kuò)增片段長度386 bp，限制性內(nèi)切酶Hpy1881，Myosin1H rs3825393位點(diǎn)上游引物序列：5’-GGCTTACTTCCCTCCCAGAG-3’，下游引物序列：5’-CTGTGGCAACAGCATTCTTA-3’，擴(kuò)增片段長度302 bp，限制性內(nèi)切酶Sau961，對目的基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)(試劑盒購自美國Sigma公司)，反應(yīng)體系：DNA模板500～100 ng+2×Easy Taq PCR Super Mix 12.5 μL+上下游引物各1 μL+無菌無離子水補(bǔ)足至25 μL。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性120s，94℃變性60s，68℃退火30s，72℃延伸30s，30個(gè)循環(huán)，獲取PCR產(chǎn)物5μL，瓊脂糖凝膠電泳，UVP-640型凝膠成像分析儀(美國UVP公司)觀察擴(kuò)增條帶，確定擴(kuò)增成功后拍照保存。并檢測PCR產(chǎn)物RELP，限制性內(nèi)切酶Hpy1881/Sau961行產(chǎn)物酶切，反應(yīng)體系：PCR產(chǎn)物10μL+Hpy1881/Sau961內(nèi)切酶2U+酶切緩沖液2μL+無菌去離子水補(bǔ)足至25μL，37℃恒溫水域120min，Myosin1H rs11611277位點(diǎn)酶切位點(diǎn)為C，AC型酶切后為241 bp+146 bp兩個(gè)片段，純合突變CC型無法被酶切，僅有386 bp一個(gè)片段；rs3825393位點(diǎn)酶切位點(diǎn)為G，酶切后野生GG型為76 bp、226 bp兩個(gè)片段，雜合突變AG型為76 bp、226 bp及302bp三個(gè)片段，純合突變AA型無法被酶切，僅有302bp一個(gè)片段。②頭顱側(cè)位片測定。入組時(shí)均拍攝頭顱側(cè)位X線片，每周重復(fù)測定1次，重復(fù)3次取均值作為最終結(jié)果，記錄SNA角、SNB角、ANB角、FH-MP角、MP-SN角(下頜平面與前顱底構(gòu)成角)與Z角(軟組織頦部與突出前齒部切線與眶耳平面形成后下角)，明確上下頜位置關(guān)系。

表1 兩組臨床資料對比

2 結(jié) 果

2.1兩組Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)遺傳平衡檢驗(yàn)：兩組Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)基因型頻率分布經(jīng)檢驗(yàn)符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(P>0.05)，說明樣本有群體代表性，見表2。

表2 兩組Myosin1H基因rs11611277 rs3825393位點(diǎn)遺傳平衡檢驗(yàn)[n(%),實(shí)際頻數(shù)/預(yù)計(jì)頻數(shù)]

2.2兩組頭顱側(cè)位X片測定結(jié)果比較：觀察組SNB角、Z角小于對照組(P<0.05)，ANB角大于對照組(P<0.05)，見表3。

組別nrs3825393 GG型 AG型 AA型 χ2 hw-P觀察組6119(31.15)/18(29.51)37(60.66)/35(57.38)5(8.20)/8(13.11)0.7750.679對照組6139(63.93)/40(65.57)15(24.59)/14(22.95)7(11.48)/7(11.48)0.0470.977

表3 兩組頭顱側(cè)位X片測定結(jié)果比較

2.3兩組Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)基因型分布比較：兩組Myosin1H基因rs11611277位點(diǎn)基因型分布及等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，兩組Myosin1H基因rs3825393位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組攜帶AG基因型及A等位基因頻率高于對照組(P<0.05)，見表4。

表4 兩組Myosin1H基因rs11611277 rs3825393位點(diǎn)基因型分布比較n(%)

2.4觀察組rs11611277、rs3825393位點(diǎn)不同基因分布患者頭顱側(cè)位X片測定結(jié)果比較：觀察組rs11611277位點(diǎn)不同基因型分布患者SNA角、SNB角、ANB角、FH-MP角、SP-SN角及Z角比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，攜帶rs3825393位點(diǎn)AG基因型患者SNB角、Z角低于攜帶GG型與AA型患者(P<0.05)，ANB角高于攜帶GG型、AA型患者(P<0.05)，見表5。

表5 觀察組rs11611277 rs3825393位點(diǎn)不同基因分布患者頭顱側(cè)位X片測定結(jié)果比較度)

2.5Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)基因多態(tài)性與MR易感性關(guān)系：采用Logistic回歸分析法分析Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)基因多態(tài)性與MR易感性的關(guān)系，以MR易感性作為因變量(是否易感：是=1，否=0)，以Myosin1H基因rs11611277、rs3825393位點(diǎn)基因多態(tài)性作為影響因素進(jìn)行賦值，攜帶rs11611277位點(diǎn)CC型作為參照組，A等位基因作為參照組；攜帶rs3825393位點(diǎn)GG型及A等位基因作為參照組。結(jié)果顯示：Myosin1H基因rs11611277位點(diǎn)基因多態(tài)性與MR易感性無關(guān)；以GG型作為參照組，攜帶rs3825393位點(diǎn)AG基因型可增加MR易感性2.571倍，見表6。

表6 Myosin1H基因rs11611277 rs3825393位點(diǎn)基因多態(tài)性與MR易感性關(guān)系

3 討 論

MR由下頜發(fā)育不對稱引起，遺傳、外部環(huán)境因素均與MR發(fā)生有關(guān)，現(xiàn)已明確環(huán)境因素包括替牙障礙、不良習(xí)慣、鈣磷代謝障礙、肌平衡調(diào)節(jié)紊亂、中耳炎癥等，均對髁突、下頜骨發(fā)育產(chǎn)生不良影響；髁突或下頜骨外傷同樣也可引起下頜骨發(fā)育障礙[8]。近年來遺傳因素在MR中的作用日益引起研究者重視。據(jù)報(bào)道，Ⅱ類錯(cuò)合畸形患者子代、親代頜骨結(jié)構(gòu)相似度較高[9]。姜玲玲等[10]發(fā)現(xiàn)安氏Ⅱ類錯(cuò)合畸形發(fā)病存在家族聚集特點(diǎn)，1級(jí)親屬遺傳率超過90%。之后多項(xiàng)研究均指出，安氏Ⅱ類錯(cuò)合畸形存在帶典型基因遺傳特征[11,12]。

胚胎發(fā)育早期形成附著于上頜骨咬肌、舌骨上肌群所控制的張閉口運(yùn)動(dòng)直接影響下頜骨發(fā)育。動(dòng)物研究顯示，咬肌力減弱大鼠下頜骨較咬肌強(qiáng)大鼠下頜骨更短[13]。肌球蛋白重鏈異構(gòu)作為細(xì)胞骨架內(nèi)關(guān)鍵分子，是為肌肉收縮提供動(dòng)力的主要蛋白，咬肌肌球蛋白重鏈異構(gòu)體變異對下頜平面角有較大的影響。前期已證實(shí)Myo1c基因可通過參與細(xì)胞內(nèi)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)等過程影響咬肌代謝、肌纖維分型，導(dǎo)致錯(cuò)合畸形進(jìn)展[14]。而Myosin1H基因?yàn)閰⑴c肌球蛋白功能調(diào)控的候選基因，屬M(fèi)yo1c為旁系同源體，推測可能與MR發(fā)生存在一定的關(guān)聯(lián)。國外Arun等[15]研究者首次報(bào)道，Myosin1H單核苷酸多態(tài)性與下頜骨退變有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，安氏Ⅱ類錯(cuò)合畸形患者M(jìn)yosin1H rs3825393位點(diǎn)基因型分布與Ⅰ類錯(cuò)合畸形有明顯區(qū)別，而rs11611277位點(diǎn)基因型分布與Ⅰ類錯(cuò)合畸形類似，支撐上述報(bào)道結(jié)果，說明Myosin1H基因rs3825393位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與MR發(fā)生有關(guān)，攜帶rs3825383位點(diǎn)AG基因型及A等位基因患者M(jìn)R易感性更高，此類人群Myosin1H基因rs3825393位點(diǎn)G→A突變率較高，會(huì)增加MR發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，說明蒙古族人群Myosin1H基因rs3825393位點(diǎn)基因突變可能會(huì)導(dǎo)致MR發(fā)生。展開邏輯回歸分析發(fā)現(xiàn)，攜帶rs3825393位點(diǎn)AG型患者M(jìn)R易感風(fēng)險(xiǎn)為攜帶其他基因型的2.571倍，進(jìn)一步說明rs3825393位點(diǎn)G→A突變可能增加MR易感風(fēng)險(xiǎn)。但本研究樣本量較少，且尚未對其他種族人群進(jìn)行對比，存在一定的局限，對MR易感人群特征基因型特征有待進(jìn)一步擴(kuò)充樣本量進(jìn)行總結(jié)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組SNB角、Z角小于對照組，ANB角大于對照組，攜帶rs3825383位點(diǎn)AG基因型及A等位基因患者SNB角、Z角更小，ANB角更大，進(jìn)一步證實(shí)rs3825383位點(diǎn)基因突變與MR發(fā)生有關(guān)，可引起下頜骨結(jié)構(gòu)改變，造成咬合異常。

綜上，本研究首次發(fā)現(xiàn)內(nèi)蒙古地區(qū)蒙古族Myosin1H基因rs3825393位點(diǎn)G→A突變與MR易感性有關(guān)，攜帶該位點(diǎn)AG基因型患者有更高的MR患病風(fēng)險(xiǎn)。說明內(nèi)蒙古地區(qū)蒙古族攜帶Myosin1H基因s3825393位點(diǎn)AG基因型人群有更高的MR患病風(fēng)險(xiǎn)，而rs11611277位點(diǎn)基因多態(tài)性則與MR發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無明顯關(guān)聯(lián)，說明同一基因型不同位點(diǎn)基因多態(tài)性對MR發(fā)病的影響存在復(fù)雜多樣性，為MR病機(jī)研究提供了新方向，可為早期識(shí)別MR易感高危群體及MR個(gè)性化預(yù)防提供指導(dǎo)，后續(xù)可作為MR早期診斷、預(yù)防及個(gè)性化治療的方向。但由于研究樣本量較少，尚不能代表整個(gè)蒙古族人群特點(diǎn)，需要擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究Myosin1H基因與蒙古族MR易感性、下頜骨退變的關(guān)系。