血漿lncRNA ANRIL水平在高血壓患者腦動(dòng)脈硬化中的臨床意義

王翀 朱曉蕾 黃嶸 王曉云

(南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，江蘇 南京 210008)

隨著生活和飲食習(xí)慣的改變，我國高血壓(high blood pressure，HBP)患者日益增多[1]。臨床統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，HBP是多種心腦血管病的病理基礎(chǔ)和危險(xiǎn)因素，長期高血壓可引起動(dòng)脈硬化，如動(dòng)脈血管增厚、血管腔狹窄、血管變硬或形成斑塊等[2-3]。腦動(dòng)脈硬化(cerebral arteriosclerosis，CAS)是動(dòng)脈硬化的一種，可能會(huì)導(dǎo)致記憶減退、腦出血、腦梗死、偏癱甚至神經(jīng)退行性疾病等[4-5]。因此，有效預(yù)防或早期診斷CAS具有重要的臨床意義。長鏈非編碼RNA ANRIL (Long non-coding RNA ANRIL，lncRNA ANRIL)是長度為 3.8 kb的lncRNA家族成員[6-7]。研究顯示，lncRNA ANRIL與冠心病、顱內(nèi)動(dòng)脈瘤、2型糖尿病及多種惡性腫瘤密切相關(guān)[8-9]。但目前l(fā)ncRNA ANRIL是否與HBP患者發(fā)生CAS有關(guān)還不清楚。本研究通過對比分析血漿lncRNA ANRIL在HBP和HBP/CAS之間的差異，探討其可能的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月～2019年12月在我院就診的HBP患者218例，其中合并CAS者89例作為高血壓合并腦動(dòng)脈硬化組(HBP/CAS)，未合并CAS患者129例作為高血壓組(HBP)。高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)：兩次血壓檢測均值均收縮壓≥140mmHg或舒張壓≥90mmHg的患者。腦動(dòng)脈硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病史癥狀、相關(guān)血生化指標(biāo)；腦部血管彩超；經(jīng)顱多普勒超聲；CTA、MRA或DSA檢查等確診。根據(jù)病史和檢驗(yàn)結(jié)果排除糖尿病、冠心病、肝腎功能不全、周圍血管性疾病、高脂血癥、急慢性感染性疾、系統(tǒng)性免疫功能疾病及惡性腫瘤等。本研究通過了醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 儀器與試劑 血生化儀由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司提供；GenEluteTM血漿/血清RNA提取試劑盒由德國默克公司提供；lncRNA-ANRIL RT-qPCR檢測試劑盒由大連Takara Bio公司提供。

1.3 方法

1.3.1 臨床參數(shù)測量統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)所有患者臨床資料，記錄患者收縮壓和舒張壓、性別、年齡、身高、體重、腰圍、臀圍，計(jì)算腰臀比和體重指數(shù)。

1.3.2 生化指標(biāo)檢測 檢測前一晚9點(diǎn)后禁水禁食，次日清晨抽取靜脈血，血生化儀檢測甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血糖(GLU)及同型半胱氨酸(Hcy)濃度。

1.3.3 RT-qPCR檢測各組患者血漿lncRNA ANRIL水平 采用GenEluteTM血漿/血清RNA提取試劑盒提取RNA。用lncRNA ANRILRT-qPCR檢測試劑盒制備檢測樣品。以ABI 7500熒光定量PCR儀器 (美國Applied Biosystems)進(jìn)行檢測。以U6作為內(nèi)參，經(jīng)95℃/30秒，90℃/5秒，65℃/30秒40個(gè)循環(huán)得到最終數(shù)據(jù)，以2(-ΔΔCT)法計(jì)算lncRNA ANRIL水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 15.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)經(jīng)K-S檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布并以2表示，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)。Pearson法分析各變量間的相關(guān)性，單因素和多因素Logistic回歸分析發(fā)生HBP/CAS的危險(xiǎn)因素。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBP和HBP/CAS組患者人體臨床參數(shù)比較 HBP/CAS組和HBP組患者性別、BMI、腰臀比及血壓均無差異(P>0.05)；而相較于HBP組，HBP/CAS組患者年齡明顯偏高(P<0.01)，見表1。

表1 HBP組和HBP/CAS組患者人體臨床參數(shù)比較Table 1 Comparison of human clinical parameters between HBP group and HBP/CAS group

2.2 HBP和HBP/CAS組患者各生化指標(biāo)比較 生化指標(biāo)檢測結(jié)果顯示，與HBP相比，HBP/CAS組TC、TG、LDL-C、GLU和Hcy顯著生高，HDL-C明顯降低(P<0.05)。

2.3 HBP和HBP/CAS組患者血漿lncRNA ANRIL水平比較 RT-qPCR檢測HBP和HBP/CAS組患者血漿lncRNA ANRIL水平，結(jié)果顯示，相較于HBP組HBP/CAS組患者血漿lncRNA ANRIL水平明顯升高(P<0.01)，見表2、圖1。

表2 HBP和HBP/CAS組患者各生化指標(biāo)比較Table 2 Comparison of biochemical indexes of patients in HBP and HBP/CAS groups

圖1 HBP和HBP/CAS組患者血漿lncRNA-ANRIL水平比較Figure 1 Comparison of plasma lncRNA-ANRIL levels between HBP and HBP/CAS groups注：①P<0.01

2.4 HBP/CAS的危險(xiǎn)因素分析 以年齡、TC、TG、LDL-C、HDL-C、GLU、Hcy作為自變量，以HBP是否合并CAS為因變量，單因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，年齡、TC、TG、LDL-C、HDL-C、Hcy及l(fā)ncRNA ANRIL與HBP/CAS的發(fā)生有關(guān)(P<0.05)；而通過多因素logistic回歸進(jìn)行分析，結(jié)果顯示年齡、TC、TG、Hcy及l(fā)ncRNA ANRIL是引起HBP/CAS發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見表3。

表3 HBP/CAS的危險(xiǎn)因素分析Table 3 Analysis of risk factors of HBP/CAS

2.5 HBP/CAS患者血漿lncRNA ANRIL水平與年齡、TC、TG、Hcy的相關(guān)性分析 采用Pearson法分析lncRNA ANRIL與年齡、TC、TG、Hcy的相關(guān)性，結(jié)果顯示，lncRNA ANRIL與TC(r=0.7369，P<0.001)和TG(r=0.8013，P<0.001)呈強(qiáng)正相關(guān)，與年齡和Hcy不相關(guān)(P>0.05)，見圖2。

圖2 HBP/CAS患者血漿lncRNA ANRIL水平與年齡、TC、TG、Hcy的相關(guān)性Figure 2 The correlation of plasma lncRNA ANRIL levels with age,TC,TG,Hcy in HBP/CAS patients

3 討論

LncRNA ANRIL是LncRNA大家族的一員，在惡性腫瘤和代謝性疾病中發(fā)揮一定作用。在癌細(xì)胞中，過表達(dá)LncRNA ANRIL可增加細(xì)胞增殖、存活、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移，而ANRIL功能的喪失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生相反的惡性生物學(xué)行為[8-11]。在代謝疾病中，LncRNA ANRIL與2型糖尿病、冠心病、腦梗塞等有關(guān)[12-14]。研究顯示，LncRNA ANRIL可通過調(diào)節(jié)自噬途徑中的microRNA-99a和microRNA-449a促進(jìn)血管生成和血栓形成[15]。同時(shí)，LncRNA ANRIL與炎癥存在聯(lián)系，LncRNA ANRIL/miR-125a信號(hào)軸可作為潛在的生物標(biāo)志物用于評估支氣管哮喘的炎癥水平和疾病嚴(yán)重程度[16]。Hu等[17]報(bào)道，LncRNA ANRIL通過miR-122-5p/BRCC3信號(hào)軸促進(jìn)尿酸腎病中NLRP3炎癥小體的激活。此外，研究還發(fā)現(xiàn)LncRNA ANRIL與平滑肌細(xì)胞衰老密切相關(guān)[18]。目前，還未有臨床研究報(bào)道lncRNA ANRIL是否與HBP患者發(fā)生CAS有關(guān)。

本研究通過分析HBP和HBP/CAS組患者人體臨床參數(shù)發(fā)現(xiàn)，兩組患者在性別、BMI、腰臀比及血壓上均無顯著性差異，而HBP/CAS組患者的年齡明顯偏高。血生化指標(biāo)分析顯示，HBP/CAS和HBP組患者血清TC、TG、LDL-C、GLU和Hcy水平存在明顯差異。同時(shí)，LncRNA ANRIL在HBP/CAS組患者血漿中表達(dá)升高。為了分析上述差異指標(biāo)與HBP/CAS發(fā)生的相關(guān)性，本研究通過logistic回歸進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)年齡、TC、TG、Hcy及l(fā)ncRNA ANRIL是引起HBP發(fā)生CAS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。有研究證實(shí)，在老年HBP人群中Hcy是影響頸動(dòng)脈硬化的危險(xiǎn)因素[19-20]。還有研究顯示，血清TC和TG是HBP患者頸動(dòng)脈硬化及斑塊形成的危險(xiǎn)因素[21-22]。這些與本研究TC、TG和Hcy的分析結(jié)果相類似。LncRNA ANRIL與年齡、TC、TG和Hcy均為HBP發(fā)生CAS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。本研究進(jìn)一步觀察了LncRNA ANRIL與TC、TG和Hcy的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)lncRNA ANRIL與TC和TG呈強(qiáng)正相關(guān)。研究報(bào)道，巴基斯坦北部人群的LncRNA ANRIL單核苷酸多態(tài)性與家族性高膽固醇血癥密切相關(guān)[23]。提示HBP患者血漿LncRNA ANRIL水平增加可能導(dǎo)致或標(biāo)志血清TC和TG水平升高，最終增加CAS發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

4 結(jié)論與啟示

血漿lncRNA ANRIL水平升高是HBP患者發(fā)生CAS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，而lncRNA ANRIL水平與TC和TG相關(guān)。lncRNA最初被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄過程的副產(chǎn)物，不具有生物學(xué)功能。但近年來，越來越多的lncRNA被發(fā)現(xiàn)與多種疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)，甚至可以作為早期診斷標(biāo)志物。因此，深入了解lncRNA家族成員的生物學(xué)功能具有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)血液中l(wèi)ncRNA ANRIL水平與TC和TG相關(guān)，但其具體關(guān)聯(lián)機(jī)制還不清楚，有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探討。