燈盞乙素衍生物的合成及抗白血病活性研究

韓通，陳曦，張永博，李達(dá)翃，金成浩

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，大慶163319；2.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院）

燈盞乙素（scutellarin），又名野黃芩苷，是從燈盞細(xì)辛中提取分離得到的一種重要的黃酮類天然產(chǎn)物（圖1）[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，燈盞乙素具有心腦血管保護(hù)、抗氧化、抗炎和抗腫瘤等多種藥理活性[2]。目前，燈盞乙素已作為藥物的主要有效成分廣泛應(yīng)用于心血管疾病的治療中，如燈盞花素片、注射劑和滴丸等。因此，基于燈盞乙素良好的生物活性，近年來(lái)對(duì)燈盞乙素的研究越來(lái)越廣泛。其中，燈盞乙素的抗腫瘤作用是近年來(lái)研究較多的熱點(diǎn)方向之一。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，燈盞乙素可以通過(guò)多種途徑來(lái)發(fā)揮抗癌作用。例如，燈盞乙素可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[3-4]、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲[5-6]、逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性[7]和增加腫瘤對(duì)藥物的敏感性等[8-9]。除了具有良好的抗腫瘤活性，燈盞乙素還具有較低的毒性，體外抗細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明，燈盞乙素可以選擇性的靶向腫瘤細(xì)胞，而對(duì)正常細(xì)胞毒性較小[10-11]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明燈盞乙素在持續(xù)高劑量的給藥下對(duì)小鼠幾乎無(wú)毒性[12]。這為以燈盞乙素為先導(dǎo)化合物進(jìn)一步開發(fā)新的高效低毒的抗癌藥物提供了良好的基礎(chǔ)。

圖1 燈盞乙素的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of scutellarin

然而，燈盞乙素的溶解性差、半衰期短和生物利用度低等藥代動(dòng)力學(xué)問(wèn)題，限制燈盞乙素的進(jìn)一步應(yīng)用。對(duì)燈盞乙素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾是改善燈盞乙素藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)的主要手段之一。科研工作者嘗試對(duì)燈盞乙素的糖羧基進(jìn)行酯化獲得燈盞乙素酯類前藥，如燈盞乙素乙酯、芐酯和不同分子量的聚乙二醇酯等，并研究酯化對(duì)燈盞乙素體內(nèi)代謝的影響，發(fā)現(xiàn)酯化后燈盞乙素的水溶性、穩(wěn)定性和生物利用度有了一定的提高[13-14]。然而，體內(nèi)酯酶較多，酯鍵在體內(nèi)仍極易代謝，相比于酯鍵，酰胺鍵的穩(wěn)定性更高，因此，研究選擇多種脂肪胺，合成了燈盞乙素的酰胺衍生物。此外，芐基是黃酮類化合物結(jié)構(gòu)改造一個(gè)常用的藥效團(tuán)，如黃芩素的7-OH芐基化后，其衍生物的抗腫瘤活性顯著增強(qiáng)[15-16]。為了進(jìn)一步提高燈盞乙素的抗腫瘤活性，燈盞乙素結(jié)構(gòu)中的4′-OH和6-OH進(jìn)行芐基取代。綜上，研究以天然產(chǎn)物燈盞乙素為先導(dǎo)化合物，通過(guò)簡(jiǎn)單易行的化學(xué)合成方法，獲得了4個(gè)燈盞乙素酰胺類衍生物，并對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行抗腫瘤細(xì)胞株增殖活性測(cè)試。根據(jù)數(shù)據(jù)，對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

市售燈盞乙素購(gòu)于南京澤朗生物科技有限公司；溴化芐、1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亞胺（EDCI）、1-羥基苯并三唑（HOBt）、丙胺、異丙胺、己胺和環(huán)己胺等藥品均購(gòu)于上海阿拉丁生化科技有限公司；碳酸鉀，N，N-二甲基甲酰胺（DMF），乙酸乙酯，無(wú)水甲醇等試劑均為化學(xué)純或分析純。醇鈉由金屬鈉和無(wú)水甲醇制得。柱色譜分離采用硅膠H或硅膠（200～300目），薄層色譜用硅膠GF254，均采購(gòu)于青島海洋化工廠。

1.2 儀器

磁力攪拌器（鞏義市予華儀器設(shè)備有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（EYELA，東京理化器械株式會(huì)社）；Bruker-ARX-300型和Bruker-AV-600型（TMS作內(nèi)標(biāo)）核磁共振光譜儀；日本島津GCMS-5050A氣質(zhì)聯(lián)用儀；Agilent 1100離子阱型液-質(zhì)聯(lián)用儀。

1.3 方法

1.3.1 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素芐酯（2）的合成

取市售燈盞乙素1（300 mg，0.65 mmol），溶于10 mL DMF，攪拌至完全溶解。加入溴化芐（0.38 mL，3 mmol）和無(wú)水碳酸鉀（414 mg，3 mmol），室溫?cái)嚢?4 h，硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，待反應(yīng)完成后。將反應(yīng)液傾入20 mL冰水混合物中，乙酸乙酯萃?。?×30 mL），飽和食鹽水溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（二氯甲烷∶甲醇20∶1），得黃色粉末狀固體2，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.2 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素（3）的合成

取化合物2（1 000 mg，1.37 mmol），溶于80 mL甲醇中，攪拌至固體完全溶解，滴加2 mL甲醇鈉，室溫反應(yīng)24 h，硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，待反應(yīng)完成后。將反應(yīng)液濃縮，加水調(diào)pH至4～5，有大量沉淀析出，抽濾，烘干，得黃色粉末狀固體3，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR和MS確證。

1.3.3 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素丙基酰胺（4a）的合成

將中間體3（100 mg，0.16 mmol），溶于5 mL的DMF中，攪拌至固體完全溶解。加入HOBT（26 mg，0.19 mmol）、EDC（I60 mg，0.32 mmol）和丙胺（20μL，0.16 mmol），于室溫反應(yīng)24 h。硅膠薄層色譜（TLC）監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程，待反應(yīng)完成后。將反應(yīng)液傾入30 mL的H2O中，乙酸乙酯萃?。?×20 mL），飽和食鹽水溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜分離（二氯甲烷∶甲醇20∶1），得到黃色粉末狀固體4a，該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HRMS確證。

1.3.4 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺（4b）的合成

化合物4b的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與異丙胺進(jìn)行縮合，得到黃色粉末狀固體4′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺（4b）。該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.5 4′，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺（4c）的合成

化合物4c的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與己胺進(jìn)行縮合，得到黃色粉末狀固體4'，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺（4c）。該化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

1.3.6 4 ′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺（4d）的合成

化合物4d的合成方法同4a，4′，6-二芐基-燈盞乙素（3）與環(huán)己胺進(jìn)行縮合，得到黃色粉末狀固體4′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺（4d）?；衔锝Y(jié)構(gòu)經(jīng)1H-NMR、13C-NMR和HR-MS確證。

圖2 燈盞乙素衍生物的合成路線Fig.2 Synthesis route of scutellarin derivatives

1.3.7 體外抗增殖活性測(cè)試

采用臺(tái)盼藍(lán)法測(cè)試目標(biāo)化合物4a～d的抗腫瘤活性。選取人白血病細(xì)胞株HL-60和THP-1在37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)液為含10%熱滅活胎牛血清，青霉素100 U·mL-1和鏈霉素100 U·mL-1的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基。48 h更換培養(yǎng)液，細(xì)胞貼壁后，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞均處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，臺(tái)盼藍(lán)拒染法表明細(xì)胞活力大于95%。

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的受試細(xì)胞，以5×104cells·mL-1的密度接種于24孔板內(nèi)，每孔內(nèi)2 mL。接種完畢后即加入相應(yīng)濃度的待測(cè)藥物。藥物處理72 h后，從每孔的細(xì)胞懸液中吸取50μL細(xì)胞懸液，加入50μL的0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液中混勻，在3 min內(nèi)，于光學(xué)顯微鏡下觀察，分別計(jì)數(shù)每孔的細(xì)胞總數(shù)。每孔中的總細(xì)胞數(shù)占對(duì)照孔總細(xì)胞數(shù)的百分比即為該濃度藥物的生長(zhǎng)抑制率。每個(gè)細(xì)胞及藥物至少進(jìn)行3次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)。采用SPSS軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組數(shù)據(jù)均采用平均值±SD的方式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 燈盞乙素衍生物的結(jié)構(gòu)鑒定

中間體及目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)，采用核磁波譜1HNMR和13C-NMR，以及質(zhì)譜MS進(jìn)行了鑒定。

中間體2：4′，6-二芐基-燈盞乙素芐酯，產(chǎn)率67%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.96（s，1H，5-OH），8.03（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.55（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.36（m，9H，Ar-H），7.25（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.20（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.12（s，1H，H-8），6.95（s，1H，H-3），5.66（d，1H，J=5.3 Hz，H-1″），5.57（d，1H，J=5.7 Hz，sugar hydroxyl），5.43（d，1H，J=7.4 Hz，sugar hydroxyl），5.37（d，1H，J=5.3 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.17（d，2H，J=11.9 Hz，-CH2-），5.02（d，2H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.29（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.53-3.40（m，3H，H-2″，3″，4″）；MS（ESI）m/z：733.2[M+H]+.

中間體3：4′，6-二芐基-燈盞乙素（3），產(chǎn)率95%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.98（s，1H，5-OH），8.05（d，2H，J=8.5 Hz，H-2′，6′），7.56（d，2H，J=7.3 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.3 Hz，Ar-H），7.41（t，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.37（m，3H，Ar-H），7.32（t，1H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.21（d，2H，J=8.7 Hz，H-3′，5′），7.13（s，1H，H-8），6.95（s，1H，H-3），5.67（d，1H，J=4.9 Hz，H-1″），5.40（d，2H，J=7.4 Hz，sugar hydroxyl），5.22（s，2H，-CH2-），5.02（dd，2H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.09（d，1H，H-5″），3.48-3.42（m，3H，H-2″，3″，4″）；MS（ESI）m/z：643.2[M+H]+.

目標(biāo)化合物4a：4′，6-二芐基-燈盞乙素丙基酰胺，產(chǎn)率91%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.96（s，1H，5-OH），8.08（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），8.01（t，1H，J=5.7 Hz，-NH-），7.57（d，2H，J=6.8 Hz，Ar-H），7.49（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.41（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.35（m，4H，Ar-H），7.21（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.07（s，1H，H-8），6.96（s，1H，H-3），5.59（d，1H，J=5.8 Hz，H-1″），5.31（d，1H，J=5.3 Hz，sugar hydroxyl），5.26（d，1H，J=5.0 Hz，sugar hydroxyl），5.21（d，1H，J=7.7 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），3.94（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.53-3.36（m，3H，H-2″，3″，4″），3.03（m，2H，-CH2-），1.40（m，2H，-CH2-），0.78（t，3H，J=7.2 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm）：182.84，168.14，164.25，162.04，156.77，153.24，152.68，138.02，136.93，131.84，128.98，128.98，128.87，128.87，128.57，128.57，128.52，128.52，128.31，128.31，123.35，115.86，115.86，106.39，103.88，100.59，94.72，76.93，76.32，74.66，73.42，71.21，70.07，22.50，11.67；HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.227 9.

目標(biāo)化合物4b：4′，6-二芐基-燈盞乙素異丙基酰胺，產(chǎn)率49%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.94（s，1H，5-OH），8.09（d，2H，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.95（d，1H，J=7.7 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.41（t，2H，J=7.4 Hz，Ar-H），7.36（m，3H，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.20（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.09（s，1H，H-8），6.96（s，1H，H-3），5.59（d，1H，J=5.9 Hz，H-1″），5.31（d，1H，J=5.2 Hz，sugar hydroxyl），5.27（d，1H，J=5.1 Hz，sugar hydroxyl），5.17（d，1H，J=7.7 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），3.87（d，1H，J=9.4 Hz，H-5″），3.82（m，1H，-CH-），3.58-3.43（m，3H，H-2″，3″，4″），1.07（d，3H，J=6.6 Hz，-CH3），1.02（d，3H，J=6.5 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ （ppm）：182.84，167.01，164.20，162.05，156.77，153.22，152.64，138.00，136.92，131.86，128.97，128.97，128.88，128.88，128.57，128.57，128.51，128.51，128.32，128.32，123.33，115.83，115.83，106.41，103.83，100.88，94.90，77.01，76.51，74.66，73.47，70.94，70.08，22.74，22.63；HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.226 9.

目標(biāo)化合物4c：4′，6-二芐基-燈盞乙素己基酰胺，產(chǎn)率49%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.95（s，1H，5-OH），8.10（d，2H，J=8.9 Hz，H-2′，6′），8.00（t，1H，J=5.3 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.49（d，2H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.42（t，2H，J=7.6 Hz，Ar-H），7.36（m，3H，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.2 Hz，Ar-H），7.21（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.07（s，1H，H-8），6.98（s，1H，H-3），5.60（brs，1H，H-1″），5.20（d，1H，J=7.8 Hz，sugar hydroxyl），5.24（s，2H，-CH2-），5.09（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.8 Hz，-CH2-），3.92（d，1H，J=9.6 Hz，H-5″），3.54-3.43（m，4H，H-2″，3″，4″），3.06（m，2H，-CH2-），1.35（m，2H，-CH2-），1.15（m，2H，-CH2-），1.04（m，4H，-CH2-），0.65（t，3H，J=6.9 Hz，-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ （ppm）：182.85，166.71，164.24，162.05，156.72，153.27，152.73，138.00，136.19，131.84，131.21，130.77，128.98，128.98，128.88，128.88，128.58，128.58，128.52，128.52，128.31，128.31，123.33，115.87，115.87，106.44，103.89，100.58，94.70，76.99，76.44，74.69，73.42，70.96，70.07，47.33，25.48，19.66，18.05，16.48，6.93；HR-MS（ESI）m/z calcd for C41H41NO11[M+Na]+746.268 0，found 746.257 8.

目標(biāo)化合物4d：4′，6-二芐基-燈盞乙素環(huán)己基酰胺，產(chǎn)率39%。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ（ppm）：12.94（s，1H，5-OH），8.10（d，2H，J=8.9 Hz，H-2′，6′），7.94（d，1H，J=8.1 Hz，-NH-），7.56（d，2H，J=6.9 Hz，Ar-H），7.48（d，2H，J=7.0 Hz，Ar-H），7.41（t，3H，J=7.8 Hz，Ar-H），7.36（d，2H，J=7.7 Hz，Ar-H），7.32（d，1H，J=7.1 Hz，Ar-H），7.19（d，2H，J=9.0 Hz，H-3′，5′），7.11（s，1H，H-8），6.97（s，1H，H-3），5.59（brs，1H，H-1″），5.28（m，4H，-CH2，sugar hydroxyl），5.14（d，1H，J=7.8 Hz，sugar hydroxyl），5.09（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），4.98（d，1H，J=10.9 Hz，-CH2-），3.90（d，1H，J=9.7 Hz，H-5″），3.57-3.43（m，4H，H-2″，3″，4″），1.58（m，6H，-CH2-），1.19（m，4H，-CH2-）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ（ppm）：182.85，166.88，164.20，162.04，156.73，153.18，152.66，138.00，136.93，131.84，128.99，128.99，128.87，128.87，128.57，128.57，128.51，128.51，128.32，128.32，123.36，115.81，115.81，106.40，103.84，100.88，94.97，76.11，76.37，74.66，73.50，70.74，70.06，47.70，32.54，32.49，25.62，24.65，24.56；HR-MS（ESI）m/z calcd for C41H41NO11[M+Na]+746.268 0，found 746.259 8.

目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)解析以4a為例，在1H-NMR譜數(shù)據(jù)中，存在明顯的燈盞乙素結(jié)構(gòu)中B環(huán)上4個(gè)氫信號(hào)，以AA XX的系統(tǒng)形式存在；在δ7.57～7.35附近存在10個(gè)芳香氫信號(hào)，判斷為兩個(gè)芐基中苯環(huán)氫信號(hào)；在δ5.24處存在二氫單峰以及δ5.09和4.98處存在兩個(gè)一氫雙峰，判斷為4和6取代芐基上的亞甲基氫信號(hào)；δ3.03處表現(xiàn)為二氫多重峰，歸屬為丙基中與氮相連的亞甲基；δ1.40處表現(xiàn)為二氫多重峰，歸屬為丙基中的亞甲基；δ0.78處表現(xiàn)為三氫三重峰，歸屬為丙基中與亞甲基相連的甲基氫信號(hào)。另外，在13C-NMR譜數(shù)據(jù)中出現(xiàn)24個(gè)芳香碳信號(hào)以及兩個(gè)羰基碳信號(hào)，判斷為燈盞乙素結(jié)構(gòu)中的芳香碳、4位羰基和糖上的羰基信號(hào)以及兩個(gè)芐基上的芳香碳信號(hào)；在高場(chǎng)區(qū)出現(xiàn)丙基的碳信號(hào)。高分辨質(zhì)譜HR-MS（ESI）m/z calcd for C38H37NO11[M+Na]+706.236 7，found 706.227 9。綜上，確認(rèn)化合物為所設(shè)計(jì)合成的目標(biāo)化合物4a。

2.2 生物活性測(cè)試

對(duì)所合成的燈盞乙素衍生物4a～d進(jìn)行抗白血病活性測(cè)試，選取人白血病細(xì)胞株HL-60和THP-1，采用臺(tái)盼藍(lán)染色法進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果見表1。從表中的數(shù)據(jù)可以看出，所有化合物對(duì)兩株腫瘤細(xì)胞株均表現(xiàn)出一定的抑制作用。4a～d對(duì)THP-1細(xì)胞株的抗增殖活性強(qiáng)于HL-60，表現(xiàn)出明顯的腫瘤細(xì)胞選擇性，并且對(duì)THP-1的抗腫瘤作用強(qiáng)于先導(dǎo)化合物燈盞乙素，表明芐基取代可以提升燈盞乙素對(duì)THP-1細(xì)胞株的抑制作用。其中，化合物4d對(duì)THP-1的作用最強(qiáng)，其IC50值為16.77μmmol·mL-1。

表1 燈盞乙素衍生物的體外抗白血病細(xì)胞株增殖活性Table 1 Anti-proliferation activity of scutellarin derivatives against leukemic cell lines in vitro

3 討論

當(dāng)前，惡性腫瘤依然是在世界范圍內(nèi)威脅人類健康的最主要疾病之一。在中國(guó)，癌癥儼然已經(jīng)成為一個(gè)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題，其致死率僅次于心腦血管疾病高居第二位[17]。隨著科技發(fā)展和生活水平的不斷提高，癌癥的預(yù)防、診斷和治療能力不斷提高，化療方法依然在癌癥的治療過(guò)程中占據(jù)重要地位，但化療藥物發(fā)揮藥效的同時(shí)，伴隨著較多的毒副作用，因此，開發(fā)新型的抗腫瘤藥物仍然是迫在眉睫的問(wèn)題。

從天然產(chǎn)物中尋找新型的抗腫瘤藥物一直是研究的熱點(diǎn)之一[18-19]。黃酮類化合物是一類極有研究?jī)r(jià)值的天然次生代謝產(chǎn)物，其廣泛分布于自然界植物中，具有結(jié)構(gòu)多樣、活性優(yōu)良和含量較高等諸多優(yōu)點(diǎn)。因此，黃酮類化合物一直是研究人員熱衷的研究對(duì)象。依靠豐富的自然資源，黃酮類化合物的研究開發(fā)極為迅速，在過(guò)去的20年里，提取，鑒定的黃酮類新化合物多達(dá)幾千余個(gè)[20-25]。這些豐富多樣的結(jié)構(gòu)為藥物發(fā)現(xiàn)提供了先導(dǎo)化合物來(lái)源，也為新藥研發(fā)及藥物設(shè)計(jì)提供了靈感。已有多種黃酮類藥物進(jìn)入臨床應(yīng)用，如醋柳黃酮、依普黃酮和黃酮哌酯等。此外，漢黃芩素作為抗癌新藥，也已進(jìn)入臨床研究。因此，開發(fā)黃酮類抗癌藥物成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)[26]。燈盞乙素是一種極具藥用價(jià)值的黃酮類化合物，其抗癌能力近年來(lái)研究較多，眾多藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)燈盞乙素對(duì)于腫瘤的發(fā)生和發(fā)展起到重要的抑制作用。燈盞乙素對(duì)血液瘤和實(shí)體瘤都具有較強(qiáng)的抑制作用，已有文獻(xiàn)報(bào)道，燈盞乙素可以抑制多種白血病細(xì)胞株如HL-60、THP-1、CHRF、H9、NB4、U937、K562和Ju rkat的增殖，其半數(shù)抑制濃度（IC50）從35μmmol·mL-1到165μmmol·mL-1不等，并呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性[2，27]。因此，可以證實(shí)燈盞乙素對(duì)血液瘤細(xì)胞具有廣譜性且抗腫瘤活性良好。

截至目前，針對(duì)燈盞乙素抗腫瘤活性的結(jié)構(gòu)改造研究較少，并由于其藥代性質(zhì)差的問(wèn)題，使其很難進(jìn)行深入的體內(nèi)抗腫瘤活性研究。為了進(jìn)一步擴(kuò)展燈盞乙素的抗腫瘤功能，探索其體內(nèi)抗腫瘤效果?；谇捌诘奈墨I(xiàn)調(diào)研，研究合成了燈盞乙素的酰胺類衍生物，期望在改善藥代性質(zhì)的同時(shí)，進(jìn)一步增強(qiáng)其抗腫瘤活性，獲得4個(gè)目標(biāo)化合物4a～d。選取對(duì)燈盞乙素較為敏感的白血病細(xì)胞株HL-60（人早幼粒白血病細(xì)胞）和THP-1（人急性單核白血病細(xì)胞），采用臺(tái)盼藍(lán)染色法，進(jìn)行了體外抗增殖活性測(cè)試。測(cè)試結(jié)果顯示，衍生物對(duì)兩株細(xì)胞都具有抑制作用，但比較衍生物對(duì)兩株細(xì)胞的IC50值，可以發(fā)現(xiàn)化合物4a～d具有腫瘤細(xì)胞選擇性，對(duì)THP-1細(xì)胞株的抑制活性更強(qiáng)。尤其以環(huán)己基酰胺化合物4d的IC50值最小，為燈盞乙素的三分之一。從測(cè)試結(jié)果可以分析出，此類化合物的構(gòu)效關(guān)系如下：（1）隨著脂肪胺碳鏈的增加，抗腫瘤增殖活性逐步降低；（2）4′位和6位芐基取代后，對(duì)THP-1的抑制活性增加；（3）脂肪環(huán)酰胺衍生物對(duì)THP-1的抗腫瘤活性強(qiáng)于直連脂肪酰胺。后續(xù)，我們將會(huì)對(duì)燈盞乙素酰胺類衍生物進(jìn)行正常細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)測(cè)試，評(píng)價(jià)酰胺類衍生物的選擇性，擇優(yōu)進(jìn)行抗腫瘤機(jī)制研究。

4 結(jié)論

以燈盞乙素為先導(dǎo)化合物，基于其良好的抗腫瘤活性和低毒性，對(duì)其開展藥物化學(xué)研究。通過(guò)三步化學(xué)反應(yīng)，對(duì)燈盞乙素的4′，6位羥基進(jìn)行芐基化，水解裸露糖羧基，并在糖羧基位置通過(guò)與多種胺縮合，獲得燈盞乙素酰胺衍生物。采用臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)試目標(biāo)化合物4a～d的抗白血病細(xì)胞株HL-60和THP-1增殖活性?；钚詼y(cè)試數(shù)據(jù)表明，化合物4d對(duì)THP-1細(xì)胞具有較強(qiáng)的抗增殖能力，IC50值為16.77μmmol·mL-1，明顯強(qiáng)于先導(dǎo)化合物燈盞乙素，值得進(jìn)行更為深入的藥理作用機(jī)制研究，為燈盞乙素的抗腫瘤功能開發(fā)提供理論依據(jù)。