高效液相色譜-原子熒光光譜法分析新疆（南疆）凍干驢乳粉中硒形態(tài)含量

郭金喜，范田麗，郭武軍，何曉瑞，周玉貴

(1.新疆維吾爾自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院國家農(nóng)副產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，烏魯木齊 830011；2.烏魯木齊奶業(yè)協(xié)會，烏魯木齊 830011；3.新疆玉昆侖天然食品有限公司,新疆喀什 844400)

0 引 言

硒(selenium，Se)是人體必需的微量元素之一,具有抗氧化、調(diào)控人體血脂代謝、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、預(yù)防心肌病等重要功能,因此被譽為“生命之火”。研究表明硒的功能活性和作用機(jī)理與攝入硒的化學(xué)形態(tài)密切相關(guān)[1-3]。硒的形主要有無機(jī)硒（硒酸鹽：Se（Ⅵ）、亞硒酸鹽：Se（Ⅳ））和有機(jī)硒（硒胱氨酸：SeMet、硒代蛋氨酸：SeCys）兩種，硒的不同化學(xué)形態(tài)對人體的吸收、生物效應(yīng)、毒性及防癌作用不同，例如硒酸鹽和亞硒酸鹽等無機(jī)硒會導(dǎo)致生物體病變，過多攝入無機(jī)硒會引起硒中毒[4-8]，而Se-腺苷-硒半胱氨酸、Se-甲基-硒半胱氨酸、Se-胱硫醚、γ-谷氨酰胺-Se-甲基-硒半胱氨酸等有機(jī)硒是人類攝取硒元素的主要來源。新疆驢乳營養(yǎng)價值高，富含蛋白質(zhì)、脂肪亞油酸、?；撬岷臀榷喾N營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素，經(jīng)檢測驢乳粉中硒含量較高，尤其是南疆（岳普湖縣）驢乳粉硒含量最高，根據(jù)查找資料記載南疆驢乳中硒的含量是牛乳的10倍以上[9-14]。目前對乳粉中硒的形態(tài)分型的報道很多，但未見對新疆驢乳粉中硒的形態(tài)分析未見報道，所以對新疆驢乳粉中硒的形態(tài)分型，確定驢乳粉中硒的形態(tài)就顯得尤為重要。

硒的形態(tài)分型常用的主要有高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC-ICP-MS）和高效液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用儀（HPLC-HG-AFS）[15]兩種分型定量設(shè)備，HPLC-ICP-MS具有檢出限低、靈敏度高等優(yōu)勢，但其儀器原理復(fù)雜，使用成本和操作難度高，而原子熒光光譜儀（HG-AFS）是我國少數(shù)具有自主知識產(chǎn)權(quán)的中高端分析儀器之一，具有結(jié)構(gòu)簡單、分析成本低、靈敏度高、選擇性好和線性范圍寬等優(yōu)點[16-18]，所以本文采用高效液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用儀（HPLC-HG-AFS）對新疆南疆（岳普湖縣）驢乳粉中硒的形態(tài)和含量進(jìn)行分析研究。因為凍干驢乳粉中蛋白質(zhì)和脂肪含量分別為15.97%～21.60%和9.50%～14.60%，為了能得更好的提取驢乳粉中硒的各種形態(tài)，運用蛋白酶和脂肪酶的混合酶共同作用作為酶解提取驢乳粉中硒形態(tài)的提取方法。

1 實 驗

1.1 材料及試劑

凍干驢乳粉，購買國產(chǎn)某品牌（南疆岳普湖縣）凍干驢乳粉。

硒單元素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，100 mg/L（GBW 0866）（1%鹽酸溶液介質(zhì)）；硒代蛋氨酸（SeCys）（GBW 10034），39.4±1.0μg/g（以硒計）、97.9±2.5μg/g（以硒代蛋氨酸計）；硒酸根（Se（Ⅵ））（GBW 10033），41.5±1.3μg/g（以硒計）、75.1±2.4μg/g（以硒酸根計）；亞硒酸根（Se（Ⅳ））（GBW 10032），42.9±0.9μg/g（以硒計）、68.9±1.4μg/g（以亞硒酸根計）；硒代胱氨酸（SeMet）（GBW 10087），44.2±1.0μg/g（以硒計）、93.5±2.5μg/g（以硒代胱氨酸計）；均由中國計量院提供。流動相用5 mmoL檸檬酸+0.5 mmoL四丁基溴化銨（TBAB）+2%CH3OH（調(diào)解pH=4.5），現(xiàn)用現(xiàn)配；鹽酸（優(yōu)級純）、甲醇（優(yōu)級純），國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；實驗用水為超純水。

1.2 儀器設(shè)備

HPLC-AFS9800高效液相色譜-雙道原子熒光分光光度計（配有砷-汞空心陰極燈），北京吉天儀器公司；HamiltonPRPX陰離子交換柱（250 mm×4.1 mm、10μm），瑞士漢密爾頓；Agilent M P-C18反相色譜柱（150 mm×4.65 mm、10μm)，美國安捷倫；TOPEX微波消解儀，上海屹堯儀器科技發(fā)展有限公司；TS-110X 30恒溫水浴振蕩器，上海捷呈；PHS-3C數(shù)字酸度計，上海楚定分析儀器有限公司；GTSONIC-D 6超聲波清洗儀，廣東固特超聲股份有限公司；BSA124S-CW分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；SIGAMA3-30K臺式高速型冷凍離心機(jī)，德國Sigma。實驗用所有玻璃和聚四氟乙烯器皿均以20%（體積分?jǐn)?shù)）的硝酸浸泡24 h，用去離子水沖洗干凈。

2 方 法

2.1 樣品前處理

2.1.1 總硒提取前處理

由于驢乳粉基體復(fù)雜，富含蛋白質(zhì)和油脂，比常規(guī)樣品難消化徹底，未確保最大限度的提取驢乳粉中總硒。本方法減少樣品稱樣量，準(zhǔn)確稱取約0.3～0.5 g（精確至0.0001 g）樣品于聚四氟乙烯消解罐中，加入硝酸5.0 mL，混合均勻，放置2 h，于通風(fēng)廚電熱爐上220℃進(jìn)行預(yù)消化，待硝酸即將剩余0.5 mL左右取下冷卻后補加5 mL硝酸，然后密封好消化管，放入微波消解器，消解完畢后，放入趕酸器種趕酸至約剩0.5 mL，不可蒸干。冷卻后，用去離子水少量多次洗滌定容至25 mL容量瓶中搖勻過0.45μm濾膜及C18小柱凈化備用。同時做空白實驗、樣品加標(biāo)實驗、空白加標(biāo)實驗。

2.1.2 硒形態(tài)提取前處理

因為新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中蛋白質(zhì)和脂肪含量很高，分別為15.97%～21.60%和9.50%～14.60%，為了能得更好的提取驢乳粉中硒的各種形態(tài)，采用蛋白酶和脂肪酶的混合酶共同作用讓驢乳粉中蛋白質(zhì)和脂肪酶解成更易硒形態(tài)提取的小分子氨基酸、脂肪酸、酮酸等物質(zhì)，提高硒形態(tài)的提取率。

準(zhǔn)確稱取0.3 g（精確至0.0001 g）驢乳粉樣品于15 mL離心管中，加入混5 mL合酶系列4（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均為0.08 g）、pH=7.5、水浴溫度40℃、水浴時間為3 h，對樣品進(jìn)行恒溫水浴振蕩酶解提取，提取結(jié)束于4℃下以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min。取上層清液定容至25 mL容量瓶中搖勻過0.45μm濾膜及C18小柱凈化備用。同時做空白實驗、樣品加標(biāo)實驗、空白加標(biāo)實驗。

2.2 標(biāo)液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制：準(zhǔn)確移取硒單元素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液1.00 mL，用體積分?jǐn)?shù)0.5%硝酸（以濃硝酸為基準(zhǔn)）稀釋并定容至100.0 mL容量瓶，配制成濃度為1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液；準(zhǔn)確稱取SeCys、Se（Ⅵ）、Se（Ⅳ）、SeMet標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)2.5380、2.4096、2.3310、2.2624 g用超純水溶解分別定容至100 mL容量瓶中，制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液。所有標(biāo)準(zhǔn)儲備液冷藏保存，用時逐步稀釋。

Se標(biāo)準(zhǔn)工作液配制：臨用前將Se標(biāo)準(zhǔn)儲備液從冷藏柜種取出，恢復(fù)到室溫。將恢復(fù)到室溫的標(biāo)準(zhǔn)儲備液分別吸取0、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL定容至100 mL容量瓶中，配置成各點濃度依次為0.0、10、20.0、40.0、80.0、100.0μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作液。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液配置：臨用前將SeCys、Se（Ⅵ）、Se（Ⅳ）、SeMet標(biāo)準(zhǔn)儲備液從冷藏柜種取出，恢復(fù)到室溫。將恢復(fù)到室溫的標(biāo)準(zhǔn)儲備液分別吸取0、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL定容至100 mL容量瓶中，配置成各點濃度依次為0、10、20.0、40.0、80.0、100.0μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2.3 流動相的選擇

通過前期試驗和查閱資料發(fā)現(xiàn)通過運用磷酸氫二銨溶液或者檸檬酸作為流動相時都不能對驢乳粉中硒的形態(tài)進(jìn)行有效分離，磷酸氫二銨溶液作為流動相時不能實現(xiàn)Se（Ⅳ）和SeMet的基線分離，分離效果不好，而采用檸檬酸作為流動相時SeCys和SeMet檢測靈敏度會有所下降。本實驗采用檸檬酸作為流動相的同時添加一定量的四丁基溴化銨（TBAB），可以有效實現(xiàn)SeCys和SeMet的分離和提高檢測靈敏度[19]。本次實驗采用5 mmoL檸檬酸+0.5 mmoL TBAB+2%CH3OH溶液作為流動相（pH=4.5）。

2.4 儀器設(shè)備參數(shù)

測定總硒的樣品經(jīng)過微波消解、趕酸、定容后過0.45μm濾膜，進(jìn)行上機(jī)測定。形態(tài)分型樣品經(jīng)過酶提取、離心、定容后過0.45μm濾膜然后上機(jī)測定。設(shè)備參數(shù)見表1,硒形態(tài)液相譜圖見圖1。

表1 設(shè)備參數(shù)條件

圖1 4種硒形態(tài)色圖譜

2.5 檢出限及精密度測定

先對空白樣品連續(xù)進(jìn)行21次測定，求出測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。對樣品中4種形態(tài)硒標(biāo)準(zhǔn)系列重復(fù)測定3次，取算術(shù)平均值后，按線性回歸法求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)。以3倍空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，得到檢出限[20]。連續(xù)11次重復(fù)測標(biāo)準(zhǔn)點濃度為60μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，計算RSD值[21]。同事測定空白加標(biāo)回收率和樣品加標(biāo)回收率，對樣品4種形態(tài)硒進(jìn)行分型和含量測定。

3 結(jié)果與分析

3.1 硒的測定

準(zhǔn)確稱取0.3～0.5 g（精確至0.0001 g）驢乳粉樣品采用微波消解，消解好樣品經(jīng)冷卻定容至15 mL離心管中，過定容后過0.45μm濾膜然后上機(jī)測定。采用GB5009.93-2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中硒的測定》中第一法（氫化物原子熒光光譜法）對硒含量進(jìn)行測定。

3.2 酶解提取硒形態(tài)參數(shù)的確定

準(zhǔn)確稱取0.3 g（精確至0.0001 g）驢乳粉樣品于15 mL離心管中，加標(biāo)后加入10 mL混合酶（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均為0.08 g）、調(diào)解pH值、水浴溫度40℃、水浴時間，對樣品進(jìn)行恒溫水域振蕩酶解提取，提取結(jié)束于4℃下以10 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min。取上層清液定容至25 mL容量瓶中搖勻過0.45μm濾膜及C18小柱凈化后上機(jī)測定。同時做空白實驗、樣品加標(biāo)、空白加標(biāo)上機(jī)測定。確定酶解提取溫度、酶添加量、時間、pH值4個因素提取樣品中4種形態(tài)硒的最佳參數(shù)條件。

3.2.1 酶解提取溫度的確定

以提取時間為2 h、提取酸pH值為7、提取用蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均為0.04 g為提取條件，確定提取溫度分別為30、35、40、45、50時，提取凍干驢乳粉4種硒形態(tài)的最佳溫度條件。溫度對提取效果的影響，見圖2。

圖2 溫度對4種硒形態(tài)提取的影響

由圖2可以看出在提取溫度為40℃時提取效果最好，這表明40℃時酶的活性最好，達(dá)到最佳提取效果，溫度過高或過低都會影響酶活性，所以本實驗采用40℃，作為本次實驗的酶解提取溫度。

3.2.2 酶解提取酶濃度的確定

以提取時間為2 h、提取酸pH值為7、提取溫度為40℃，為提取條件，確定提取酶添加量分別為STD1（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.02 g）STD2（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.04 g）、STD3（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.06 g）、STD4（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.08 g）、STD 5（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.1 g）時提取凍干驢乳粉4種硒形態(tài)的最佳酶濃度條件。

由圖3可以看出，在酶添加量為STD3（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.06 g）時4種形態(tài)硒達(dá)到最大值，趨于穩(wěn)定，說明STD3時酶添加量最為合適，酶解達(dá)到飽和狀態(tài)，在多就會出現(xiàn)過飽和，造成酶的浪費，過少提取效果不好。所以本次實驗選取酶添加量為STD3作為本次實驗酶添加量。

圖3 酶添加量對4種硒形態(tài)提取的影響

3.2.3 酶解提取時間的確定

以提取pH值為7、溫度為40℃、酶添加量為STD3，為提取條件，確定提取時間分別為2、2.5、3、3.5、4 h時提取凍干驢乳粉4種硒形態(tài)的最佳時間條件。

由圖4可以看出，提取時間在3 h的4種形態(tài)硒的提取達(dá)到最大值，過后趨于穩(wěn)定，說明時間3 h時已經(jīng)最大限度提取樣品中4中硒形態(tài)，無需增加提取時間來增大提取率，所以本次實驗提取時間選取3 h。

圖4 提取時間對4種硒形態(tài)提取的影響

3.2.4 酶解提取pH的確定

以提取溫度為40℃、酶添加量為STD3，時間為3 h，為提取條件，確定提取pH值分別為6.5、7、7.5、8、8.5時提取凍干驢乳粉4種硒形態(tài)的最佳pH值條件。

由圖5可以看出，在提取pH為7.5時候達(dá)到最大值，pH過高或者過低時酶解提取率都會下降，主要原因是選取的酶為弱堿性酶，在酶解pH為7.5的時候效果達(dá)到最好，所以每次實驗選取酶解提取pH為7.5。

圖5 提取pH對4種硒形態(tài)提取的影響

本次實驗選取酶解提取溫度為40℃、時間3 h、酶添加量STD3、pH為7作為本次實驗的最佳提取條件。

3.3 硒檢測結(jié)果

考察硒形態(tài)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在0～100μg/L范圍內(nèi)其線性實驗結(jié)果。對建立4種形態(tài)硒標(biāo)準(zhǔn)系列標(biāo)準(zhǔn)曲線，按線性回歸法求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)，對空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)測定，計算準(zhǔn)偏差、檢出限、RSD值、加標(biāo)回收率，對樣品4種形態(tài)硒進(jìn)行分型和含量測定。

3.3.1 硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取SeCys、Se（Ⅵ）、Se（Ⅳ）、SeM et標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)2.5380、2.4096、2.3310、2.2624 g用超純水分別定容至100 mL容量瓶中，制成1 000μg/kg標(biāo)準(zhǔn)儲備液，冷藏保存。臨用前將4種SeCys、Se（Ⅵ）、Se（Ⅳ）、SeMet標(biāo)準(zhǔn)儲備液從冷藏柜種取出，恢復(fù)到室溫。將恢復(fù)到室溫的標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐步稀釋，配置成各點濃度依次為0.0、10、20.0、40.0、80.0、100.0μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。詳見圖6～7。

圖6 4種硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)系列液相圖譜

圖7 4種硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)系列曲線

3.3.2 線性范圍及檢出限

建立4種硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)曲線，對空白樣品連續(xù)進(jìn)行21次測定，求出測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差。按線性回歸法求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)。以3倍空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率，得到檢出限。連續(xù)11次重復(fù)測標(biāo)準(zhǔn)點濃度為60μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，計算RSD值。同時測定空白加標(biāo)回收率和樣品加標(biāo)回收率，對樣品4種形態(tài)硒進(jìn)行分型和含量測定。結(jié)果見表2。

由表2可知，HPLC-HG-AFS測定新疆南疆（岳普湖）凍干驢乳粉中4種硒形態(tài)r2在0.9993～0.9998之間、檢出限為0.3μg/kg、定量限為1μg/kg之間、RSD在0.98%～1.03%之間，結(jié)果表明本研究方法檢出限、定量限低、精密度，結(jié)果穩(wěn)定，完全滿足檢驗要求。

表2 4種硒形態(tài)測定的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限、RSD

3.3.3 樣品加標(biāo)測定結(jié)果

按酶解提取的前處理最佳酶解提取溫度為40℃、時間3 h、酶添加量STD3、pH為7作對處理加標(biāo)實驗樣品。對3組樣品進(jìn)行加標(biāo)實驗，用時做空白加標(biāo)實驗，加標(biāo)實驗結(jié)果見表3。

由表3可以看出3種硒形態(tài)Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）樣品加標(biāo)回收率在88.1%～95.2%之間，而SeCys的樣品加標(biāo)回收為30.5%～39.4%，不超過40%，但是空白加標(biāo)四種硒形態(tài)回收率在99.5%～101.7%之間結(jié)果很好。這是由于該方法提取驢乳粉中SeCys的時候，由于（SeCys）2中的Se-Se化學(xué)鍵不穩(wěn)定，容易斷開且易與乳粉中的蛋白質(zhì)吸附沉淀。但是Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）3種硒形態(tài)樣品加標(biāo)回收率在88.1%～95.2%之間，表明這3種形態(tài)硒的分型檢測沒有問題，本實驗運用測定凍干驢乳粉中總硒含量，然后減去測定的Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）3種硒形態(tài)含量得到SeCys的形態(tài)含量。

表3 樣品加標(biāo)回收結(jié)果

3.3.4 硒形態(tài)含量測定結(jié)果

通過測定樣品中總硒、Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）含量，用總硒含量減去Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）3種硒形態(tài)含量計算出SeCys含量，有機(jī)硒含量，詳見表4。

由表4可以看出SeMet含量在10.43～12.79μg/kg之間，占總硒含量的55.1%～77.9%，SeCys含量4.06 μg/kg～7.76μg/kg，占總硒含量的22.1%～39.4%，有機(jī)硒（SeM et和SeCys總量）含量在16.68～18.60μg/kg，占總硒含量的94.4%～100.0%。除2#、6#、9#樣品分別含有1.08μg/kg、1.00μg/kg、1.03μg/kg的Se（Ⅵ），其它7個樣品均未檢出無機(jī)硒。結(jié)果顯示新疆南疆凍干驢乳粉中有機(jī)硒含量在16.68～18.60μg/kg之間占總硒在94.4%～100.0%，含有少量或不含有無機(jī)硒。

表4 樣品分析結(jié)果

4 結(jié)果與討論

本實驗通液相色譜-原子熒光光譜（HPLC-HGAFS）聯(lián)用儀檢測新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中硒形態(tài)含量，流動相對于分離硒形態(tài)有著很大的影響，通過前期實驗和查閱資料發(fā)現(xiàn)通過運用磷酸氫二銨溶液或者檸檬酸作為流動相時都不能對驢乳粉中硒的形態(tài)進(jìn)行有效分離，磷酸氫二銨溶液作為流動相時不能實現(xiàn)Se（Ⅳ）和SeMet的基線分離，分離效果不好，而采用檸檬酸作為流動相時SeCys和SeMet檢測靈敏度會有所下降。本實驗采用檸檬酸作為流動相的同時添加一定量的四丁基溴化銨（TBAB），可以有效實現(xiàn)SeCys和SeMet的分離和提高檢測靈敏度。流動相為5 mmoL檸檬酸+0.5 mmoL TBAB+2%CH3OH溶液作為流動相（pH=4.5）。

因為新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中蛋白質(zhì)和脂肪含量很高，分別為15.97%～21.60%和9.50%～14.60%，為了能得更好的提取驢乳粉中硒的各種形態(tài)，采用蛋白酶和脂肪酶的混合酶共同作用讓驢乳粉中蛋白質(zhì)和脂肪酶解成更易硒形態(tài)提取的小分子氨基酸、脂肪酸、酮酸等物質(zhì)，提高硒形態(tài)的提取率。但是酶法提取對酶的添加量、溫度、pH、時間等提取條件要求很嚴(yán)格，所以本方法探討優(yōu)化了酶法提取驢乳粉中硒形態(tài)的參數(shù)條件，研究得出結(jié)論酶法提取最佳參數(shù)條件為溫度40℃、時間3 h、酶添加量STD 3（蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶均0.06 g）、pH為7。

凍干驢乳粉中3種硒形態(tài)Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）樣品加標(biāo)回收率在88.1%～95.2%之間，而SeCys的樣品加標(biāo)回收為30.5%～39.4%，不超過40%，但是空白加標(biāo)4種硒形態(tài)回收率在99.5%～101.7%之間結(jié)果很好。這是由于該方法提取驢乳粉中SeCys的時候，由于（SeCys）2中的Se-Se化學(xué)鍵不穩(wěn)定，容易斷開且易與乳粉中的蛋白質(zhì)吸附沉淀，致使加標(biāo)回收率下降。但是Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）3種硒形態(tài)樣品加標(biāo)回收率在88.1%～95.2%之間，表明這3種形態(tài)硒的分型檢測沒有問題，本實驗運用測定凍干驢乳粉中總硒含量，然后減去測定的Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）3種硒形態(tài)含量得到SeCys的形態(tài)含量，很好的計算了新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中總硒、Se（Ⅳ）、SeMet、Se（Ⅵ）、SeCys含量和占比。

新疆驢乳營養(yǎng)價值高，富含蛋白質(zhì)、脂肪亞油酸、?；撬岷臀榷喾N營養(yǎng)物質(zhì)和微量元素，經(jīng)檢測驢乳粉中硒含量較高，尤其是新疆南疆（岳普湖縣）驢乳粉硒含量最高。研究表明硒的功能活性和作用機(jī)理與攝入硒的化學(xué)形態(tài)密切相關(guān)。硒的形主要有無機(jī)硒有機(jī)硒，硒的不同化學(xué)形態(tài)對人體的吸收、生物效應(yīng)、毒性及防癌作用不同，無機(jī)硒會導(dǎo)致生物體病變，而有機(jī)硒是人類攝取硒元素的主要來源，所以過多攝入無機(jī)硒會引起硒中毒。本實驗通過HPLC-HG-AFS法測定新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中硒形態(tài)，結(jié)果顯示新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中硒形態(tài)中有機(jī)硒含量在在16.68～18.60μg/kg之間，占總硒含量的94.4%～100.0%，含有很少或者不含無機(jī)硒。研究表明新疆南疆（岳普湖縣）凍干驢乳粉中硒含量豐富且都是人體有益的有機(jī)硒。