外周血白細胞形態(tài)學參數(shù)在甲型、乙型流行性感冒診斷中的應用

蔡 祺，陳驪婷，郭 平，林 瀚，萬穎蕾

（上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院檢驗科，上海 200025）

流行性感冒（簡稱流感）是一種由流感病毒引起的在全球范圍內周期性流行的急性呼吸道疾病。據世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球每年有5%～15%的人發(fā)生流感，死亡例數(shù)高達50萬[1]。流感病毒屬正黏病毒科單股負鏈分節(jié)段RNA病毒，根據病毒內部的核蛋白（nucleocapsid protein，NP）和基質蛋白（matrix protein，MP）抗原性不同，分為A（甲）、B（乙）、C（丙）、D（丁）4型[2]。甲型流感病毒2009年3月在墨西哥和美國西南部被發(fā)現(xiàn)，隨后蔓延至全球，能感染包括人、禽類、豬、馬、狗等多種動物，極易發(fā)生變異，曾多次引起全球范圍的暴發(fā)流行，為人流感主要病原體[3-4]；乙型流感病毒主要感染人，其結構和引發(fā)的癥狀與甲型流感病毒相似，但變異較少，可引起小規(guī)模暴發(fā)流行；丙型流感病毒能感染人和豬，但多以散發(fā)病例形式出現(xiàn)，一般不引起流行，且感染后癥狀較輕；丁型流感病毒不常見，目前僅在豬和牛體內被分離到，與丙型流感病毒相似。

目前，流感病毒的實驗室檢測主要為血常規(guī)、C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）和病原體檢測。血常規(guī)和CRP檢測經濟、方便、快速，但特異性不高。病原體檢測特異性好，但成本相對較高。目前，有部分血液分析儀可通過熒光染色和激光光散射檢測來識別每個細胞的顆粒性、核質比和分葉特性等特征，對白細胞（white blood cell，WBC） 形態(tài)進行定量檢測，在生成血常規(guī)報告的同時，同步生成可以反映細胞結構、顆粒、體積及細胞內復雜程度等特征變化的白細胞形態(tài)學參數(shù)（leukocyte morphological parameter，LMP）結果，可用于感染性疾病的診斷和鑒別診斷、敗血癥的診斷、病毒性肝炎的診斷和活動性判斷等[5-11]。本研究旨在探討LMP在甲型流感、乙型流感臨床診斷中的應用價值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2019年7月—2020年1月上海交通大學醫(yī)學院附屬瑞金醫(yī)院甲型流感、乙型流感患者186例，其中男97例、女99例，年齡（37.6±18.1）歲，包括甲型流感患者77例（甲型流感組）、乙型流感患者109例（乙型流感組）；另選取同期101名體檢健康者作為健康對照組，其中男54名、女57名，年齡（37.2±15.8）歲。

1.2 方法

用無菌拭子（美國BD公司）采集所有研究對象咽喉分泌物樣本，用無菌乙二胺四乙酸二鉀抗凝真空采血管（美國BD公司）采集所有研究對象外周血樣本。采用BC6800血液分析儀（深圳邁瑞公司）及配套試劑檢測血常規(guī)[WBC計數(shù)、中性粒細胞百分比（the percentage of neutrophil，NEUT%）、單核細胞百分比（the percentage of monocyte，MO%）]及LMP[單核細胞前向散射光中心位置（monocyte forward scattered light central position，Mon_FSC_CenterPos）、單核細胞前向散射光分布寬度（monocyte forward scattered light distribution width，Mon_FSC_Width）、高熒光強度細胞比例（high fluorescence intensity cell percentage，HFC%）]。采用CRP-M100特定蛋白免疫分析儀（深圳邁瑞公司）及配套試劑檢測CRP。采用廣州萬孚生物技術有限公司甲型和乙型流感病毒抗原檢測試劑盒（雙抗體夾心法）檢測甲型流感、乙型流感病毒抗原。抽取400 μL咽喉分泌物樣本提取液進行樣本抽提處理，吸取處理好的病毒采集液，加入甲型流感、乙型流感試劑檢測板加樣孔內，每孔加入80 mmol/L，15～20 min后觀察結果，以出現(xiàn)質控條帶與病毒檢測條帶為陽性。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計學分析。呈正態(tài)分布的數(shù)據以表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評估各項指標的診斷效能。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 甲型流感組、乙型流感組、健康對照組一般資料

77例甲型流感患者中，CRP陽性28例、陰性49例；109例乙型流感患者中，CRP陽性23例、陰性85例；101名健康體檢者CRP、甲型流感、乙型流感病毒抗原檢測均為陰性。

2.2 甲型流感組、乙型流感組（CRP陰性患者）、健康對照組各項指標比較

甲型流感組、乙型流感組NEUT%、MO%、Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width、HFC%明顯高于健康對照組（P＜0.01）。甲型流感組NEUT%高于乙型流感組（P＜0.01），MO%、Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width、HFC%均低于乙型流感組（P＜0.01）。見表1。

表1 甲型流感組、乙型流感組（CRP陰性患者）和健康對照組各項指標的比較

表1 甲型流感組、乙型流感組（CRP陰性患者）和健康對照組各項指標的比較

注：與健康對照組比較，*P＜0.01；與甲型流感組比較，#P＜0.01；空白表示無此項。

組別 例數(shù) NEUT%/% MO%/% Mon_FSC_CenterPos Mon_FSC_Width HFC%/%健康對照組 101 57.72±8.24 5.98±1.38 923.56±25.03 230.20±19.92 0.118±0.080甲型流感組 49 72.80±9.23 9.07±3.18* 973.89±32.91* 266.62±32.17* 0.257±0.200*乙型流感組 85 65.53±11.31 10.83±3.65*# 987.73±31.13*# 276.91±34.30*# 0.369±0.330*#

2.3 各項指標診斷CRP陰性流感患者的效能

將甲型流感組和乙型流感組中CRP陰性的患者合并為CRP陰性流感組。ROC曲線分析結果顯示，WBC計數(shù)診斷CRP陰性流感的曲線下面積（area under curve，AUC）為0.455。NEUT%、MO%、HFC%、Mon_FSC_CenterPos和Mon_FSC_Width診斷CRP陰性流感的AUC分別為0.776、0.876、0.805、0.924、0.866，最佳臨界值分別為66.55%、7.35%、0.15%、948.00、249.57，敏感性分別為62.7%、80.0%、76.1%、88.8%、76.1%，特異性分別為86.1%、86.1%、69.3%、85.1%、85.1%。見圖1。

圖1 各項指標診斷CRP陰性流感的ROC曲線

2.4 甲型流感組、乙型流感組（CRP陽性患者）和健康對照組各項指標比較

甲型流感組和乙型流感組HFC%、Mon_FSC_CenterPos均高于健康對照組（P＜0.01）；甲型流感組HFC%、Mon_FSC_CenterPos低于乙型流感組（P＜0.01）。見表2。

表2 甲型流感組、乙型流感組（CRP陽性患者）與健康對照組Mon_FSC_CenterPos、HFC%比較

表2 甲型流感組、乙型流感組（CRP陽性患者）與健康對照組Mon_FSC_CenterPos、HFC%比較

注：與健康對照組比較，*P＜0.01；與甲型流感組比較，#P＜0.01；空白表示無此項。

組別 例數(shù) Mon_FSC_CenterPos HFC%/%健康對照組 101 923.56±25.03 0.118±0.080甲型流感組 28 975.57±29.72* 0.214±0.140*乙型流感組 23 997.52±41.60* 0.365±0.270*#

2.5 各項指標診斷CRP陽性流感患者的效能

將甲型流感組和乙型流感組中CRP陽性的患者合并為CRP陽性流感組。ROC曲線分析結果顯示，WBC計數(shù)、HFC%、Mon_FSC_CenterPos診斷CRP陽性流感的AUC診斷分別為0.629、0.763、0.928，最佳臨界值分別為7.23×109/L、0.25%、947.99，敏感性分別為49.0%、45.1%、88.2%，特異性分別為81.2%、95.0%、85.1%。見圖2。

圖2 各項指標診斷CRP陽性流感的ROC曲線

3 討論

甲型和乙型流感的臨床表現(xiàn)通常與普通呼吸道感染相似，且往往伴隨細菌感染。通常初診患者會通過血常規(guī)、CRP和流感病毒抗原檢測來進行診斷和鑒別診斷。一般CRP陰性且病毒抗原檢測陽性可以認為是單純性病毒感染，伴隨CRP升高的病毒感染則可認為是混合性感染。甲型流感、乙型流感患者感染初期血常規(guī)檢測結果通常表現(xiàn)為WBC計數(shù)正?；蛏?，淋巴細胞百分比正常或降低，但往往伴隨細菌感染導致的WBC計數(shù)和淋巴細胞百分比等檢測結果多變，不能對疾病作出鑒別診斷。COSKUN等[12]發(fā)現(xiàn)，甲型流感患者血常規(guī)檢測結果中MO%顯著增加，與健康人群和有流感樣癥狀的患者比較，差異有統(tǒng)計學意義，他們認為單核細胞增多或可作為甲型流感的一個生物學標志物。本研究結果也顯示，甲型流感、乙型流感患者MO%高于健康人群（P＜0.01），ROC曲線分析結果也顯示，MO%對CRP陰性流感有較好的診斷效能。

本研究結果顯示，CRP陰性的單純性甲型流感、乙型流感患者Mon_FSC_CenterPos、Mon_FSC_Width這2個描述單核細胞形態(tài)的參數(shù)均高于健康對照者（P＜0.01）。ROC曲線分析結果顯示，Mon_FSC_CenterPos診斷CRP陰性流感的AUC最大，診斷效能優(yōu)于MO%，在特異性相差不多的情況下，Mon_FSC_CenterPos診斷CRP陰性流感AUC最大的敏感性優(yōu)于MO%。對于CRP陽性流感，Mon_FSC_CenterPos依然表現(xiàn)出良好的診斷效能，AUC與CRP陰性流感相同，敏感性和特異性也一致，說明Mon_FSC_CenterPos對流感的診斷效能理想，且不受細菌感染的影響。本研究還發(fā)現(xiàn)，甲型流感組、乙型流感組、健康對照組HFC%差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），其診斷效能遜于Mon_FSC_CenterPos，但不受細菌感染影響，也可作為一個參考的指標。

綜上所述，甲型流感、乙型流感患者Mon_FSC_CenterPos均會升高，在單純性病毒感染時診斷效能要優(yōu)于MO%、NEUT%等傳統(tǒng)指標；在伴隨細菌感染的混合感染時，在MO%、NEUT%等指標無法鑒別診斷的情況下，Mon_FSC_CenterPos仍表現(xiàn)出較好的診斷效能。Mon_FSC_CenterPos為血常規(guī)檢測時的儀器檢測參數(shù)，不用額外的儀器、試劑，可以作為一個鑒別診斷甲型流感、乙型流感成本低、效果良好的生物學指標。