酪蛋白檢測方法的分析與研究

張道云 田桂艷 曹文燕 王丹慧 李慧

分析與研究GB31638-2016酪蛋白的檢測方法，以降低檢測成本和縮短檢測時間，提高工作效率。方法：對膜分離酪蛋白的檢測方法進行了探討，依據(jù)對具體檢測步驟的剖析，溶解樣品采用旋渦振蕩儀、器皿選擇50 mL錐形瓶和直徑為9 cm濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約成本和提高檢測效率。結(jié)果：改變?nèi)芙鈽悠凡捎檬謸u操作方式、選擇合適器皿及濾紙等，此法涉及藥品種類少，檢測效率高，對于檢測收集沉淀量較小的樣品，有較高的優(yōu)勢。 結(jié)論：此法操作便捷，工作效率高，精密度好，在實際的檢測工作中，可以輔助使用。

酪蛋白[1]是一種含有磷鈣的結(jié)合蛋白，對酸敏感，pH值較低時會沉淀，這種蛋白質(zhì)主要存在哺乳動物中，是哺乳動物的主要蛋白質(zhì)，可以降低蛋白質(zhì)的降解率以及氨基酸的氧化率，從而加大蛋白質(zhì)的身體吸收和利用率。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源，也是鈣和磷的來源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。因此市場中也有很多酪蛋白產(chǎn)品，比如酪蛋白磷酸鈦、酪蛋白鈣都是以酪蛋白為主要成分的營養(yǎng)品[2]，對人體的營養(yǎng)效果也是非常的好。不僅如此，鑒于這種緩釋特性，酪蛋白還會讓你有持續(xù)的飽腹感，這樣就是為什么健身減肥的人食用酪蛋白后減肥效果更加明顯。

酪蛋白是以乳和/或乳制品為原料，經(jīng)酸法或酶法或膜分離工藝制得的產(chǎn)品[3]，它是由α、β、κ和r及其亞型組成的混合物，對酸敏感，pH值較低時會沉淀。以乳及乳制品為原料，經(jīng)脫脂、膜分離酪蛋白，再經(jīng)濃縮、殺菌、干燥等工藝制得的產(chǎn)品即為膜分離酪蛋白[4]。本文主要對膜分離酪蛋白的測定方法進行研究。

由于每位實驗操作者的理解認知不同，在進行GB31638-2016酪蛋白測定時，檢測者無法快速檢測酪蛋白?；诖?，筆者綜述實驗過程中的問題，探討更為方便的檢測新方法。通過對膜分離酪蛋白的具體檢測步驟的分析，溶解樣品采用旋渦振蕩儀和直徑為9cm濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約時間，提高檢測效率。

材料與方法

材料與儀器

材料與試劑

硫酸標準溶液（0.05 mol/L）、氫氧化鈉溶液（400 g/L）、硼酸溶液（20 g/L） 、甲基紅乙醇溶液（（1 g/L））、溴甲酚綠乙醇溶液（（1 g/L））、乙酸鈉溶液（1 mol/L）、10%乙酸溶液

主要儀器設(shè)備

定氮儀：Kjeltec8100、電子天平：AL204、旋渦振蕩器

方法

稱取0.2克試樣移入干燥的150mL具塞錐形瓶中，加入8 mL水混勻后置于65-67 ℃的水浴上使其完全溶解（每隔5分鐘輕輕振搖一次，一般為10-15分鐘）。冷卻后再加入乙酸溶液1 mL，混勻，靜置5分鐘，再添加乙酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置，使酪蛋白沉淀[5]，用干濾紙過濾。用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀，將濾紙連同沉淀物折疊，置于消化管內(nèi)進行消化，余下步驟GB5009.5-2016操作。

研究新方法的實驗步驟與分析

樣品的溶解

酪蛋白難溶于水，常溫下不易被混勻。稱取0.2克試樣（精確至0.001克）移入干燥潔凈的50 mL錐形瓶中，加入8 mL水于漩渦振蕩振蕩器2000轉(zhuǎn)/min 旋渦1 min左右封口后置于65-67 ℃的水浴鍋使其完全溶解（每隔1分鐘輕輕振搖一次，一般為2-3分鐘）。

沉淀物的轉(zhuǎn)移

國標檢測方法中步驟是用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀，將濾紙連同沉淀物折疊，置于消化管內(nèi)進行消化。實際操作時需要大量時間沖洗沉淀物也很難處理干凈，經(jīng)過反復(fù)實驗得到結(jié)論：借助外物轉(zhuǎn)移沉淀即為增加一根適中長度的玻璃棒作為輔助工具，能快速、徹底地轉(zhuǎn)移沉淀物。

濾紙的選擇和硫酸的加入量控制

消化不完全是消化完畢顏色出現(xiàn)黑色的主要原因。 導(dǎo)致消化不完全的影響因素有：消化溫度低;消化時間不夠等。本次研究新方法主要針對在消化時間、消化溫度、硫酸鉀和硫酸銅用量等滿足要求的條件下，進行濾紙的選用的解析。

濾紙大小對消化顏色的影響

濾紙的選擇國標檢測方法中沒有具體要求，因此選擇較小且能達到過濾效果的濾紙能節(jié)省檢測藥品（硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸和硫酸標準溶液）的用量，同時能更有效地解決了因催化劑、濃硫酸等用量小造成消化完畢的樣品顏色發(fā)黑無法繼續(xù)檢測的問題。新方法選擇不同濾紙在消耗的硫酸用量一定情況下對消化完畢顏色的變化進行實驗，顏色深淺量越低表示越接近正常（淺藍色）顏色，其中濾紙直徑為9cm時是最佳選擇。

關(guān)鍵步驟檢測樣品時間

針對酪蛋白具體檢測時間分別依據(jù)國標方法和本次研究的新方法各做了6組數(shù)據(jù)（表1），其中新方法中混勻樣品時間、水浴時間溶解消耗、轉(zhuǎn)移沉淀消耗時間都明顯減少很多。

根據(jù)表1可以看出：進行消化前處理樣品消耗總時間新方法明顯低于國標方法。

不同人員間對比

分別取3個不同的酪蛋白樣品，不同檢測人員在同一檢測條件下，分別對不同樣品進行檢測，檢測結(jié)果的相對偏差均小于國標要求偏差范圍（10%），人員間對比結(jié)果偏差較小，準確性可靠。

重復(fù)性

取同一個樣品進行檢測，重復(fù)性檢測次數(shù)為10次，結(jié)果分別是：84.5 84.9 84.7 85.3 84.8 86.0 85.7 86.0 84.8 85.7（g/100g）相對偏差百分比分別是：0.08 0.04 0.06 0.01 0.05 0.09 0.06 0.09 0.05 0.06。精密度的檢測：取同一批次樣品結(jié)果，對酪蛋白進行計算，精密度較高如（表1）。

結(jié)論

本文對膜法酪蛋白的檢測方法進行了探討，依據(jù)對具體檢測步驟的分析，在明確清晰的操作過程中達到節(jié)省藥品、時間，為檢驗者指明方向。此法涉及藥品種類少，檢測效率高，對于檢測收集沉淀量較小的樣品，有較高的優(yōu)勢。此法操作便捷，準確度高，精密度好，在實際的檢測工作中，可以輔助使用。

參考文獻

[1]李曉暉. 牛乳中酪蛋白的結(jié)構(gòu)特性及其應(yīng)用[J]. 食品工業(yè)， 2002， 023（001）：29-31.

[2]吳斌.酪蛋白和乳糖的營養(yǎng)價值及提取方法[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（連續(xù)型電子期刊）.2015，（23）.256-256

[3]張建忠， 酈一心. 酪蛋白和酪蛋白制品的開發(fā)[J]. 中國乳品工業(yè)， 1998，26（6）：31-32.

[4]姚強， 史宏， 楊剛，等. 酪蛋白的聚集態(tài)及其膜分離[J]. 南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）， 2012（06）：102-105.

[5]蘇 麗. pH 值對牛乳中酪蛋白提取收率的影響[J]. 2015.

張道云 田桂艷 曹文燕 王丹慧 李 慧

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