性別決定區(qū)相關(guān)高遷移率族盒蛋白4在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及臨床意義

殷均陽，郭 航，劉 宇，李輯倫，郭海周

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胸外一科，河南 鄭州 450052)

性別決定區(qū)相關(guān)高遷移率族盒蛋白4(sex-determining region Y-related high mobility group box 4，SOX4)是SOX家族的主要成員，在調(diào)節(jié)細(xì)胞干性、增殖、分化和調(diào)控胚胎發(fā)育、器官形成過程中起到關(guān)鍵性作用[1]。既往研究[2-5]發(fā)現(xiàn)，SOX4在惡性腫瘤組織中頻繁高表達(dá)，參與了結(jié)直腸癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在肺癌中，SOX4充當(dāng)何種角色尚不清楚，能否將之作為肺癌診斷、預(yù)后標(biāo)志物及新的治療靶點(diǎn)有待研究。本研究旨在探討SOX4在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)組織中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2018年10月至2018年12月收治的63例接受肺癌根治術(shù)患者的腫瘤組織及癌旁正常組織標(biāo)本，所有患者均未接受術(shù)前化療或放療。63例患者年齡43～75歲，中位年齡62歲。男39例，女24例。吸煙33例，不吸煙30例。病理類型：腺癌42例，鱗癌21例。分化程度：高分化13例，中分化20例，低分化30例。臨床分期：I期15例，Ⅱ期20例，Ⅲ期28例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。

1.2 熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)檢測SOX4 mRNA采用qPCR檢測NSCLC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中SOX4 mRNA表達(dá)。具體過程：根據(jù)Trizol操作說明書進(jìn)行總RNA抽提，提純后，逆轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA，-80 ℃保存?zhèn)溆?。SOX4上游引物：5’-CTCAAAGACAGCGACAAGATCC-3’；下游引物：5’- ACTTGTAGTCGGGGTAGTCAGC -3’。使用SYBR Green qPCR Mix (Universal)進(jìn)行SOX4 mRNA檢測。用2-△△Ct法處理測得的Ct值，得出mRNA的相對表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 免疫組化染色檢測SOX4蛋白采用免疫組化染色檢測NSCLC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中SOX4 mRNA表達(dá)。具體過程：對組織標(biāo)本進(jìn)行包埋、脫蠟、抗原修復(fù)、封閉處理后分別予以一抗(SOX4抗體，1400)、二抗(羊抗鼠IgG，1400)處理，染色后脫水、封片、觀察。染色后可見陽性SOX4為棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞核。統(tǒng)計(jì)10個(gè)顯微鏡視野中顯示免疫反應(yīng)的陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。陽性細(xì)胞百分比評分:0分(0%)、1分(1%～10%)、2分(11%～50%)、3分(>50%)。陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度評分:0分(陰性)、1分(弱)、2分(中等)、3分(強(qiáng))。將百分比和強(qiáng)度評分相乘得到最終數(shù)值?？偡帧?者定義為SOX4高表達(dá)，<3分者為低表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中SOX4 mRNA表達(dá)比較SOX4 mRNA在NSCLC腫瘤組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平分別為1.25±0.72和0.58±0.52，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.419，P<0.001)。

2.2 NSCLC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中SOX4蛋白表達(dá)比較SOX4蛋白在NSCLC腫瘤組織和癌旁正常組織中的高表達(dá)率分別為60.3%(38/63)和30.2%(19/63)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.565，P<0.001)。見圖1、表1。

圖1 NSCLC患者腫瘤組織(A)和癌旁正常組織(B)中SOX4蛋白表達(dá)比較

表1 NSCLC患者腫瘤組織和癌旁正常組織中SOX4蛋白表達(dá)比較

2.3 腫瘤組織中SOX4蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征之間的關(guān)系腫瘤組織中SOX4表達(dá)與NSCLC分化程度(χ2=9.839，P=0.007)、臨床分期(χ2=10.030，P=0.002)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=10.240，P<0.001)有關(guān)。見表2。

表2 腫瘤組織中SOX4蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征之間的關(guān)系

3 討論

轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后的分子網(wǎng)絡(luò)改變推動了腫瘤的進(jìn)展，以此為基礎(chǔ)，SOX4通過影響下游基因的轉(zhuǎn)錄激活及表觀遺傳修飾，賦予腫瘤細(xì)胞生存和增殖的優(yōu)勢，抑制其凋亡，并使之獲得上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、遷移和侵襲的能力，以促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。越來越多的研究已經(jīng)揭示了SOX4與各種惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)聯(lián)性。Hur等[6]的研究表明SOX4通過抑制腫瘤抑制因子p53的轉(zhuǎn)錄活性，減少腫瘤細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而促進(jìn)肝癌的進(jìn)展。Zhang等[7]在乳腺癌中研究中發(fā)現(xiàn)SOX4在體外和體內(nèi)異種移植模型中的表達(dá)可誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化并促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，與此相契合的是， Vervoort等[8]報(bào)道，在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中，TGF-β介導(dǎo)的SOX4表達(dá)上調(diào)是誘導(dǎo)人乳腺上皮細(xì)胞間充質(zhì)表型產(chǎn)生的重要條件。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化使腫瘤細(xì)胞耐藥性增強(qiáng)、基底膜降解、血管生成、影響腫瘤微環(huán)境[9]，更加證實(shí)了SOX4與腫瘤之間的密切聯(lián)系。PI3K/Akt/mTOR信號通路影響癌癥的許多主要特征，包括細(xì)胞增殖、存活、代謝和基因組不穩(wěn)定性等， Mehta等[10]的研究發(fā)現(xiàn)SOX4擴(kuò)增也可通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路，改變Akt磷酸化程度，進(jìn)而調(diào)控腫瘤發(fā)展。

但其在非小細(xì)胞肺癌中的作用仍未得到清晰的闡釋，針對這一問題，我們利用免疫組織化學(xué)染色比較了癌旁組織與腫瘤組織SOX4蛋白表達(dá)的差異性，結(jié)果提示，在多數(shù)腫瘤組織中SOX4呈高表達(dá)(38/63)，而在癌旁組織中，SOX4則多為低表達(dá)(44/63)。而在轉(zhuǎn)錄水平上，肺癌細(xì)胞SOX4 mRNA的擴(kuò)增也進(jìn)一步證實(shí)了這種差異性表達(dá)；為了解SOX4與NSCLC臨床特征間的關(guān)系，將63例NSCLC患者按照SOX4的表達(dá)進(jìn)行分層，結(jié)果表明SOX4過表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N分期)、分化程度相關(guān)，提示SOX4在NSCLC的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移中可能充當(dāng)了類似癌基因的角色。SOX4在NSCLC中的具體作用機(jī)制不詳，F(xiàn)riedman等[11]發(fā)現(xiàn)，來自SOX4的抗原肽能夠激活識別SOX4陽性肺腫瘤細(xì)胞的CD4+和CD8+T細(xì)胞，而SOX4敲除能夠逆轉(zhuǎn)CCAT1導(dǎo)致的順鉑耐藥[12]，這些證據(jù)表明，SOX4有望成為NSCLC治療中一個(gè)潛在的治療靶點(diǎn)。

本研究入組病例較少，隨訪時(shí)間短，未進(jìn)行生存分析，尚不能判斷能否將SOX4作為判斷預(yù)后的指標(biāo)。但是，本組資料提示，SOX4高表達(dá)的患者中，多有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且以 Ⅲ 期病變?yōu)橹?，推測該群患者可能關(guān)聯(lián)了一個(gè)不良的預(yù)后，提示我們在臨床決策時(shí)根據(jù)SOX4的表達(dá)情況將患者分為不同的亞群，采用個(gè)體化的治療模式，有望提高臨床療效。臨床實(shí)踐中，Ⅰ～Ⅱ期病變推薦盡早進(jìn)行手術(shù)干預(yù)，對于Ⅲ期NSCLC病變，則推薦同步放化療或者新輔助治療后再決定是否手術(shù)的策略。