脂肪乳劑對(duì)急性布比卡因中毒S D大鼠海馬齒狀回星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

代紫娟，吳 芳，擺志霞，王晨曦，陳學(xué)新

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)，銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院腫瘤醫(yī)院麻醉科，銀川 750004）

布比卡因（bupivacaine，BPV）是常見(jiàn)的酰胺類(lèi)局部麻醉藥，因其良好的鎮(zhèn)痛效果而在臨床麻醉和疼痛治療中廣泛使用[1]，但其藥物毒性也會(huì)作用于心血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）引起局麻藥全身毒性急性反應(yīng)（local anesthetic acute systemic toxicity，LAST）。在局麻藥引起的LAST中，通常引發(fā)CNS毒性的藥物劑量會(huì)低于引起心血管毒性癥狀的劑量[2]，且BPV的藥物毒性更容易作用于CNS[3]。在2017年發(fā)布的第三屆美國(guó)區(qū)域麻醉與疼痛醫(yī)學(xué)學(xué)會(huì)關(guān)于局部麻醉系統(tǒng)毒性的救治指南中，專(zhuān)家建議應(yīng)在使用局部麻醉藥后出現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間驚厥發(fā)作、心律失常的第一時(shí)間使用脂肪乳劑（lipid emulsion，LE）治療[4]，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究通過(guò)建立SD大鼠急性BPV神經(jīng)毒性模型，研究使用LE救治急性布比卡因中毒SD大鼠后，觀察對(duì)其海馬齒狀回（dentate gyrus，DG）星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響，進(jìn)而探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SD大鼠50只，體質(zhì)量（220±20）g，購(gòu)自寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［SCXK（寧）2015-0001］。SD大鼠飼養(yǎng)于寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房［SCXK（寧）2015-0001］，自由采食和飲水，室內(nèi)溫度20～25℃，濕度40%～70%，12 h亮暗循環(huán)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.2 試劑與儀器 鹽酸布比卡因注射液（上海朝暉藥業(yè)有限公司）；20%脂肪乳注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；抗腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）抗體、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）抗體、巢蛋白（Nestin）抗體（Proteintech中國(guó)公司）；辣根酶標(biāo)記兔抗山羊IgG、辣根酶標(biāo)記鼠抗山羊IgG、兔/鼠二步法檢測(cè)試劑盒、DAB顯色液試劑盒、PBS磷酸鹽緩沖液、山羊血清、檸檬酸鹽修復(fù)液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；全自動(dòng)石蠟切片機(jī)、光學(xué)顯微鏡（德國(guó)Leica公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備及實(shí)驗(yàn)分組 SD大鼠電子稱(chēng)稱(chēng)重后，按1.5 mg·（kg·min）-1的速度，計(jì)算出每只SD大鼠BPV的輸注速度，調(diào)制好微量泵數(shù)值。選大鼠尾部?jī)蓚?cè)靜脈，75%酒精反復(fù)擦拭消毒后使用24號(hào)留置針穿刺置管并固定，連接微量泵持續(xù)將0.75%BPV經(jīng)尾靜脈泵入，直至SD大鼠四肢及肢體出現(xiàn)抽搐。依照Racine分級(jí)法[5]進(jìn)行抽搐分級(jí)（0級(jí)：無(wú)反應(yīng)；Ⅰ級(jí)：嘴或面部節(jié)律性抽動(dòng)；Ⅱ級(jí)：點(diǎn)頭或甩尾；Ⅲ級(jí)：?jiǎn)沃閯?dòng)；Ⅳ級(jí)：多只抽動(dòng)或強(qiáng)直；Ⅴ級(jí)：不能翻正、直至全身強(qiáng)直-陣攣性發(fā)作）。納入標(biāo)準(zhǔn)：SD大鼠抽搐分級(jí)達(dá)到V級(jí)。排除標(biāo)準(zhǔn)：SD大鼠未達(dá)到V級(jí)或者死亡。

采用隨機(jī)數(shù)字表法將50只SD大鼠隨機(jī)分為五組（每組10只）：對(duì)照組（Control組）經(jīng)尾靜脈以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注0.9%氯化鈉注射液（NS）5 min；脂肪乳劑組（LE組）經(jīng)尾靜脈以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注20%脂肪乳5 min；布比卡因組（BPV+NS組）經(jīng)尾靜脈以1.5 mL·（kg·min）-1的速率輸注0.75%BPV至大鼠驚厥發(fā)作后以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注0.9%NS 5 min；脂肪乳劑后處理組（BPV+LE組）經(jīng)尾靜脈以1.5 mg·（kg·min）-1的速率輸注0.75%BPV至大鼠驚厥發(fā)作后以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注20%脂肪乳5 min；脂肪乳劑預(yù)處理組（LE+BPV+LE組）先經(jīng)尾靜脈以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注20%脂肪乳5 min，后以1.5 mg·（kg·min）-1的速率輸注0.75%BPV至大鼠驚厥發(fā)作，再以3 mL·（kg·min）-1的速率輸注20%脂肪乳5 min。

1.2.2 樣品采集與處理 各組SD大鼠給藥完成6 h后，腹腔注射戊巴比妥鈉35 mg·kg-1進(jìn)行麻醉，開(kāi)胸暴露心臟，經(jīng)心臟先后灌注NS和4%多聚甲醛溶液，待肝臟發(fā)白、全身僵硬后小心取出完整腦組織，置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h后石蠟包埋。用振動(dòng)顯微切片機(jī)將包埋好的組織行冠狀切片，厚度4μm，切至海馬層面，在65℃的烤箱中烘烤2 h后常規(guī)脫蠟脫水后進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。

1.2.3 HE染色觀察SD大鼠海馬齒狀回區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)改變 石蠟切片經(jīng)二甲苯、梯度酒精脫蠟入水后，經(jīng)蘇木素染色3 min，超純水沖洗，1%鹽酸乙醇中分化3 s，自來(lái)水返藍(lán)10 min，伊紅染色2 min后酒精梯度脫水、二甲苯透明、中性樹(shù)脂封片，光學(xué)顯微鏡下觀察SD大鼠海馬組織中神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)變化。將每張切片置于400倍顯微鏡下觀察異常細(xì)胞，對(duì)正常細(xì)胞核變性、壞死細(xì)胞進(jìn)行量化評(píng)分。組織病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[6]分為0～4分，0分:無(wú)損傷；1分:損傷程度＜12.5%；2分:損傷程度在12.5%～25%；3分:損傷程度在25%～50%；4分:損傷程度＞50%。

1.2.4 免疫組織化學(xué)（IHC）染色觀察GFAP、BDNF和Nestin在SD大鼠海馬齒狀回（DG）區(qū)的陽(yáng)性表達(dá) 將石蠟切片經(jīng)二甲苯和梯度酒精脫蠟入水后，參照兔/鼠二步法檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)滴加試劑，分別滴加一抗（BDNF、GFAP、Nestin）后，4℃冰箱孵育過(guò)夜，次日漂洗后滴加山羊抗兔、鼠IgG聚合物室溫孵育30 min，漂洗后DAB顯色，蘇木素復(fù)染5 min，1%鹽酸乙醇分化，自來(lái)水返藍(lán)，酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下觀察BDNF、GFAP、Nestin蛋白在SD大鼠海馬齒狀回區(qū)的陽(yáng)性表達(dá)。每個(gè)樣本取3張清晰切片，在400倍鏡下選取3個(gè)視野拍攝圖像，通過(guò)Image Pro Plus圖像處理軟件進(jìn)行陽(yáng)性染色細(xì)胞計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。病理評(píng)分采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，采用Dunnett-t檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組SD大鼠急性BPV中毒及LE解救后的表現(xiàn)及BPV使用劑量的比較

結(jié)果顯示，各組SD大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組SD大鼠在輸注BPV的數(shù)分鐘后出現(xiàn)面部抽動(dòng)、點(diǎn)頭、甩尾、四肢無(wú)力進(jìn)而四肢僵直和驚厥，部分SD大鼠驚厥時(shí)伴有口鼻出血和大小便失禁等現(xiàn)象，與BPV+LE組比較，LE+BPV+LE組的SD大鼠從給藥到發(fā)生驚厥所需的輸注劑量更高，但兩組在發(fā)生驚厥后靜注LE均能有效緩解驚厥癥狀。如表1所示，LE+BPV+LE組SD大鼠所使用的BPV劑量高于BPV+LE組和BPV+NS組（P均＜0.01），BPV+NS組和BPV+LE組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.797）。

表1五組SD大鼠體質(zhì)量和致驚厥BPV使用劑量的比較（±s）

表1五組SD大鼠體質(zhì)量和致驚厥BPV使用劑量的比較（±s）

與BPV+NS組比較**P＜0.01；與BPV+LE組比較##P＜0.01。

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2.2 各組SD大鼠海馬齒狀回神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)改變和病理評(píng)分比較

顯微鏡下觀察海馬齒狀回（圖1），結(jié)果顯示，Control組和LE組SD大鼠無(wú)明顯病理改變，神經(jīng)細(xì)胞胞漿紫紅色，胞核紫藍(lán)色，排列整齊，核仁著色均勻。BPV+NS組神經(jīng)細(xì)胞排列紊亂，可見(jiàn)受損細(xì)胞胞核發(fā)生位移、深染、固縮，有部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡樣變性，著色淺，胞體皺縮。BPV+LE組和LE+BPV+LE組的神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)稍顯正常，有少量壞死細(xì)胞、空泡樣變性，細(xì)胞體積輕度皺縮。病理學(xué)評(píng)分統(tǒng)計(jì)，與Control組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠評(píng)分均升高（P均＜0.01）；與LE組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠評(píng)分均升高（P均＜0.01）；與BPV+NS組 比 較，BPV+LE組評(píng)分降低（P=0.0224）、LE+BPV+LE組評(píng)分降低（P=0.0313）；BPV+LE組和LE+BPV+LE組、Control組和LE組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），見(jiàn)表2、圖2。

表2 各組SD大鼠海馬HE染色病理評(píng)分比較（±s，分）

表2 各組SD大鼠海馬HE染色病理評(píng)分比較（±s，分）

與Control組比較**P＜0.01；與LE組比較##P＜0.01；與BPV+NS組比較△P＜0.05。

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圖1 正常SD大鼠海馬DG區(qū)

2.3 各組SD大鼠海馬齒狀回GFAP的陽(yáng)性表達(dá)

GFAP在正常腦組織中有少量陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，圍繞著細(xì)胞核沿著星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架呈放射狀、細(xì)長(zhǎng)、樹(shù)枝樣突起。免疫組化結(jié)果顯示，Control組SD大鼠海馬DG區(qū)的GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)稍低，與Control組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠的膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目增加，突起變得粗短，著色加深，GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；與LE組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；與BPV+NS組比較，BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)均有一定程度降低（P均＜0.01）；BPV+LE組和LE+BPV+LE組、Control組和LE組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），見(jiàn)圖3。

2.4 五組SD大鼠海馬齒狀回BDNF的陽(yáng)性表達(dá)

BDNF蛋白在正常的腦組織中有一定的陽(yáng)性表達(dá)，免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，呈環(huán)狀包繞在細(xì)胞核周?chē)?。免疫組化結(jié)果顯示，Control組的SD大鼠海馬DG區(qū)BDNF蛋白陽(yáng)性表達(dá)較低，與Control組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠BDNF蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；LE組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠BDNF蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；與BPV+NS組比較，BPV+LE組和LE+BPV+LE組SD大鼠BDNF蛋白陽(yáng)性表達(dá)均有一定程度降低（P均＜0.01）；與BPV+LE組和LE+BPV+LE組、Control組和LE組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），見(jiàn)圖4。

圖3 各組大鼠海馬DG區(qū)GFAP免疫組化結(jié)果（IHC×400）

圖4 各組大鼠海馬DG區(qū)BDNF免疫組化結(jié)果（IHC×400）

2.5 各組SD大鼠海馬齒狀回Nestin的陽(yáng)性表達(dá)

正常成年SD大鼠腦組織中有極少量Nestin蛋白表達(dá)，免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色，陽(yáng)性著色部位在胞漿中，形狀不規(guī)則，在海馬及皮層呈顆粒狀。免疫組化結(jié)果顯示，Control組的大鼠海馬DG區(qū)Nestin蛋白陽(yáng)性表達(dá)稍低，與Control組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組大鼠Nestin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；與LE組比較，BPV+NS組、BPV+LE組和LE+BPV+LE組大鼠Nestin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均升高（P均＜0.01）；與BPV+NS組比較，BPV+LE組和LE+BPV+LE組大鼠Nestin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均有一定程度降低（P均＜0.01）；BPV+LE組和LE+BPV+LE組、Control組和LE組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），見(jiàn)圖5。

3 討論

以往研究[7]顯示，當(dāng)BPV血藥濃度較低時(shí)會(huì)引起神經(jīng)元離子通道的阻滯進(jìn)而出現(xiàn)CNS毒性癥狀，表現(xiàn)為聽(tīng)力和味覺(jué)障礙、頭暈以及惡心嘔吐，驚厥或持續(xù)癲癇；當(dāng)BPV血藥濃度繼續(xù)增大時(shí)會(huì)出現(xiàn)心血管系統(tǒng)毒性反應(yīng)，例如心跳驟停；給藥速度越快，毒性反應(yīng)越容易發(fā)生，導(dǎo)致驚厥的劑量也減少。本實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠尾靜脈注射方法，使用微量注射泵輸注BPV，在造成SD大鼠急性BPV中毒發(fā)生驚厥的同時(shí)又不易導(dǎo)致大鼠死亡。通過(guò)記錄造模所需BPV的劑量，本研究發(fā)現(xiàn)LE預(yù)處理后，會(huì)增加BPV中毒的閾值，延遲驚厥的發(fā)生。病理染色結(jié)果顯示，BPV會(huì)導(dǎo)致SD大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞壞死，而LE的使用減輕了BPV對(duì)大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞的損害。由此可見(jiàn)，LE可以有效改善急性BPV中毒SD大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的損害。

圖5 各組大鼠海馬DG區(qū)Nestin免疫組化結(jié)果（IHC×400）

有實(shí)驗(yàn)證明[8]，在原代海馬神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)狀態(tài)下，BPV可以直接作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞。在某些病理狀態(tài)下，星形膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生活化反應(yīng)，GFAP作為中間絲蛋白的一種，是星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的標(biāo)志物，同時(shí)GFAP作為神經(jīng)干細(xì)胞的一種標(biāo)志物，在成人腦DG區(qū)會(huì)呈星形膠質(zhì)細(xì)胞樣的表達(dá)[9]。Nestin屬于Ⅵ類(lèi)中間纖維絲蛋白，在腦損傷后反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Nestin蛋白[10]，其免疫陽(yáng)性細(xì)胞散在分布于大鼠海馬DG區(qū)，具有神經(jīng)保護(hù)作用[11]。實(shí)驗(yàn)證實(shí)Nestin陽(yáng)性細(xì)胞有分化成星形膠質(zhì)細(xì)胞的能力，腦缺血損傷使Nestin陽(yáng)性細(xì)胞增多，且大部分Nestin陽(yáng)性細(xì)胞與GFAP共表達(dá)[12]。此外，星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)功能的過(guò)程涉及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。例如BDNF的釋放[13]，在損傷等刺激因素的作用下，活化狀態(tài)的星形細(xì)胞可以調(diào)節(jié)這些神經(jīng)生長(zhǎng)因子分泌，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和再生起重要作用。BDNF屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族，在大腦回路發(fā)育、突觸和神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)可塑性以及神經(jīng)再生和神經(jīng)保護(hù)中起著重要作用[14]。

本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)急性BPV中毒SD大鼠腦組織中GFAP、BDNF和Nestin蛋白在海馬DG區(qū)的表達(dá)，以此來(lái)探討LE對(duì)BPV神經(jīng)毒性的解救機(jī)制。與Control組相比，BPV+NS組的GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增加，細(xì)胞突起變得粗短，著色加深，GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)率顯著升高，表明BPV與星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生活化反應(yīng)有關(guān)。與BPV+NS組比較，BPV+LE組和LE+BPV+LE組GFAP蛋白陽(yáng)性表達(dá)均降低，陽(yáng)性細(xì)胞形態(tài)趨于正常，表明使用LE后可以一定程度上改善星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化反應(yīng)。鏡下觀察BDNF和Nestin蛋白的免疫陽(yáng)性反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)與Control組相比，BPV+NS組BDNF和Nestin蛋白在海馬DG區(qū)的陽(yáng)性表達(dá)明顯增高，神經(jīng)細(xì)胞排列疏松，胞核有溶解破壞表現(xiàn)，染色較深，呈棕黃色或棕褐色。表明BPV損害大鼠海馬DG區(qū)后，神經(jīng)干細(xì)胞激活，Nestin蛋白大量表達(dá)；同時(shí)這種損傷也誘發(fā)了BDNF的釋放。在給予LE治療后，BPV+LE組和LE+BPV+LE組的大鼠海馬DG區(qū)BDNF和Nestin蛋白的免疫陽(yáng)性反應(yīng)顯著降低，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)趨于正常，只有少量的壞死細(xì)胞。以上結(jié)果提示，通過(guò)減輕星形膠質(zhì)細(xì)胞活化反應(yīng)可能會(huì)對(duì)急性BPV中毒的SD大鼠DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用。

BPV的急性中毒可能會(huì)引起SD大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的壞死和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化反應(yīng)；這種應(yīng)激反應(yīng)會(huì)誘發(fā)BDNF和Nestin蛋白的釋放；LE可以快速逆轉(zhuǎn)BPV的急性中毒會(huì)引起SD大鼠驚厥癥狀，改變急性BPV中毒大鼠腦組織中GFAP、BDNF和Nestin蛋白的表達(dá)，改善星形膠質(zhì)細(xì)胞活化反應(yīng)，減緩神經(jīng)元損傷，改善急性BPV中毒大鼠中樞神經(jīng)損傷狀況。從LE的給藥方式上看，預(yù)處理與后處理均能有效逆轉(zhuǎn)BPV的神經(jīng)毒性，雖然預(yù)處理組輸注了更多劑量的BPV，但兩組大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的改變并無(wú)明顯差異。而預(yù)處理能夠延長(zhǎng)發(fā)生驚厥的時(shí)間和增加BPV的安全閾值。在實(shí)際臨床工作中，使用局部麻醉藥時(shí)預(yù)先輸注LE，可能會(huì)對(duì)預(yù)防LAST的發(fā)生有一定的幫助，但是一旦在此基礎(chǔ)上發(fā)生LAST，由于輸注了更多劑量的局麻藥，解救難度將會(huì)增加，可能后果更加嚴(yán)重。

綜上所述，LE可以有效逆轉(zhuǎn)BPV的神經(jīng)毒性，緩解SD大鼠BPV的急性中毒引發(fā)的驚厥反應(yīng)，減輕大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的損傷，這一毒性逆轉(zhuǎn)反應(yīng)的機(jī)制可能是通過(guò)LE減輕急性BPV中毒的SD大鼠海馬DG區(qū)神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。但其具體作用機(jī)制及GFAP、BDNF和Nestin蛋白在大鼠海馬DG區(qū)與星形膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系仍需進(jìn)一步進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)、共定位分析等研究。